楊鳳玉 賈素賢

內蒙古自治區(qū)赤峰上京內分泌?？漆t(yī)院，內蒙古赤峰 024000

創(chuàng)傷等引發(fā)的失血性休克為臨床常見的危重癥，可導致多個器官功能障礙乃至病理損傷。肺臟由于其結構、功能特點，極易在失血性休克后發(fā)生急性肺損傷，嚴重時可造成急性呼吸功能障礙。失血性休克時，動脈平滑肌上的KATP 通道被激活[1]，對增加組織血流、維持器官正常功能具有重要意義[2-4]，而休克狀態(tài)長時間持續(xù)時，KATP 通道的上述保護機制卻可導致全身低血壓和血管對升壓藥的低反應性，繼而引發(fā)多器官功能障礙綜合征。趙克森[5]利用失血性休克動物模型研究發(fā)現，KATP 阻斷劑可減輕細胞膜超極化，并恢復血管反應性?；诖?，本實驗研究了KATP通道阻斷劑格列苯脲在休克復蘇期對肺損傷的保護作用，以期為休克早期肺功能保護、提高休克后存活率開辟新思路。

1 材料與方法

1.1 實驗對象分組及處理方法

健康雄性 Wistar 大鼠 24 只，體重（300±30）g，由天津醫(yī)科大學實驗動物中心提供，將其隨機分為對照組（C 組）、休克組（S 組）和格列苯脲組（G 組）。對照組僅行麻醉、插管；格列苯脲組于休克90 min 后，按照10 mL/kg 勻速由右股靜脈注入1 mg/mL格列苯脲溶液 （美國Sigma公司產品）；休克組按上述方法僅給予生理鹽水（10 mL/kg）。

1.2 創(chuàng)傷失血性休克動物模型建立

大鼠經10%水合氯醛腹腔注射麻醉后，雙側股動脈及右側股靜脈插入PE-50 管，利用左股動脈抽放血進行休克造模，右側股動脈進行平均動脈壓 （mean artery pressure，MAP）監(jiān)測，控制 MAP 在（45±5）mm Hg（1 mm Hg=0.133 kPa），持續(xù)時間90 min。右股靜脈用于休克后復蘇，回輸抽出的血液及等量生理鹽水，分別于復蘇后4h處死大鼠，采集肺標本。

1.3 檢測指標

采用大鼠髓過氧化物酶（myeloperoxidase，MPO）試劑盒 （南京建成生物工程研究所）檢測肺組織勻漿液MPO值。真空加熱干燥法測定肺濕/干重（W/D）比值。采用酶聯免疫試劑盒（南京建成生物工程研究所）檢測肺泡灌洗液中腫瘤壞死因子-α（TNF-α）、白細胞介素-6（IL-6）水平（按照試劑盒操作）。

1.4 統(tǒng)計方法

采用SPSS 16.0統(tǒng)計軟件進行統(tǒng)計學分析，計量資料數據以均數±標準差（±s）表示，組間比較采用t 檢驗。以P＜0.05 為差異有統(tǒng)計學意義。

2 結果

2.1 格列苯脲對失血性休克復蘇期MAP的影響

創(chuàng)傷失血期（0～90 min）休克、格列苯脲組大鼠MAP 控制在（45±5）mm Hg。復蘇初期（150 min）格列苯脲組與休克組相比 MAP 顯著升高（P ＜ 0.05）；復蘇后期（210～330 min）休克組同對照組比較MAP 下降，而格列苯脲與對照組之間無差異無統(tǒng)計學意義。見表1。

表1 各處理組不同時間點平均動脈壓比較（±s）

表1 各處理組不同時間點平均動脈壓比較（±s）

注：與C 組比較，*P＜0.05；與S 組比較，#P＜0.05

監(jiān)測時點 平均動脈壓（mm Hg）C 組 S 組 G 組失血期0 min 45min 90 min復蘇期150 min 210 min 270 min 330 min 115.6±6.8 116.7±10.3 118.9±9.8 113.4±10.3 43.5±3.6 41.8±5.1 117.2±9.3 41.9±3.7 42.3±2.9 117.5±8.9 113.3±11.1 114.1±7.0 116.5±8.1 105.1±8.8 101.9±9.2*99.8±10.1*88.2±3.0*122.2±6.7#121.6±7.3#122.5±5.3#117.5±5.6#

2.2 格列苯脲對失血性休克復蘇后TNF-α、IL-6 水平的影響

創(chuàng)傷失血性休克復蘇4 h 后，休克組和格列苯脲組肺泡灌洗液TNF-α 濃度分別為83.12、38.92 ng/L，IL-6 濃度分別為840.10、37.92 ng/L， 均顯著高于對照組 （TNF-α：16.50 ng/L，IL-6：123.06 ng/L）（P ＜ 0.01），但格列苯脲組上述指標與休克組相比已顯著降低（P＜0.01）。見圖1、2。

2.3 格列苯脲對肺組織勻漿MPO 值、組織W/D 值的影響

在創(chuàng)傷失血性休克復蘇4 h 后，休克組和格列苯脲組肺組織MPO 活性分別為26.59 U/g 和13.21 U/g， 肺W/D比值則分別為7.66 和5.06，均較對照組顯著升高（MPO：2.35U/g，W/D：3.87）（P ＜ 0.05），但格列苯脲組 MPO 活性及肺W/D 比值與休克組相比已顯著降低（P＜0.05）。見圖3、4。

3 討論

格列苯脲是一種KATP 通道阻斷劑，研究證實，格列苯脲具有顯著改善失血性休克動物模型血流動力學和部分臟器功能的作用[6-7]。本研究通過創(chuàng)傷失血使大鼠處于休克狀態(tài)，并維持休克狀態(tài)90 min，然后對休克早期大鼠用格列苯脲、輸血及生理鹽水或僅輸血及生理鹽水進行復蘇，成功建立大鼠失血性休克與復蘇模型。目前，失血性休克的治療原則中，除盡快采取止血治療措施外，還需給予升壓藥物，使收縮壓維持在80～90 mm Hg，以保證重要臟器的基本灌注需要。本研究結果發(fā)現，采用格列苯脲、輸血及生理鹽水可有效改善復蘇后期MAP 水平，這與Salzman等[8]的研究結果是相似的。

研究表明，由中性粒細胞、內皮細胞等炎癥細胞激活并釋放大量炎癥細胞因子（如 TNF-α、IL-1、IL-6、IL-8、TXA2等）以及氧自由基損傷等是休克時引起急性肺損傷的重要原因[9]。一般認為，TNF-α在機體炎癥反應中細胞因子級聯釋放起核心作用；而IL-6 則在休克后期炎癥反應的發(fā)生、發(fā)展中也發(fā)揮重要作用。臨床常用的多巴胺等血管活性升壓藥物可能加重器官灌注不足和缺氧的風險，故其目前在失血性休克治療時的應用受到諸多限制和爭議。而本實驗發(fā)現應用格列苯脲可明顯降低大鼠創(chuàng)傷失血性休克復蘇期肺組織炎癥因子及氧自由基水平，減輕急性肺損傷[9-10]。

綜上所述，失血性休克復蘇期應用格列苯脲不僅可有效改善復蘇后期MAP，還能夠通過減輕失血性休克復蘇期肺組織炎癥反應和氧自由基損傷，起到保護作用。該保護作用的機制可能是：格列苯脲可阻斷KATP 通道，進而改善了失血性休克后全身低血壓和血管對升壓藥的低反應性狀態(tài)。

[1] Landry DW，Oliver JA.The pathogenesis of vasodilatory shock [J].N Engl J Med，2001，345（8）：588-595.

[2] Davies NW.Modulation of ATP-sensitive K+channels in skeletal muscle by intracellular protons[J].Nature，1990，343（6256）：375-377.

[3] Wang X，Song R，Bian HN，et al.Polydatin，a natural polyphenol，protects arterial smooth muscle cells against mitochondrial dysfunction and lysosomal destabilization following hemorrhagic shock [J].Am J Physiol Regul Integr Comp Physiol，2012，302（7）：805-814.

[4] Yang Y，Shi W，Cui N.Oxidative stress inhibits vascular KATP channels by S-Glutathionylation[J].Biol Chem，2010，285（49）：38641-38648.

[5] 趙克森.重癥難治性休克的機制和治療[J].中華創(chuàng)傷雜志，2003，19（6）：325-328.

[6] Maybauer DM，Salsbury JR，Westphal M.The ATP-sensitive potassium-channel inhibitor glibenclamide improves outcome in an Ovine Model of Hemorrhagic Shock[J].Shock，2004，22（4）：387-391.

[7] Szabo C，Salzman AL.Inhibition of ATP-activated potassium channels exerts pressor effects and improves survival in a rat model of severe hemorrhagic shock[J].Shock，1996，5（6）：391-394.

[8] Salzman AL，Vromen A，Denenberg A.KATP-channel inhibition improves hemodynamics and cellular energetics in hemorrhagic shock[J].Am J Physiol，1997，272（2）：688-694.

[9] Lomas-Neira J，Perl M，Venet F，et al.The role and source of tumor necrosis factor-α in hemorrhage-induced priming for septic lung injury[J].Shock，2012，37（6）：611-620.

[10] 林春水，劉朋，趙亞娟，等.烏司他丁對失血性休克大鼠肺損傷的保護作用[J].南方醫(yī)科大學學報，2009，29（5）：876-879.