劉冰松，袁昕蓉

(1.遼寧中醫(yī)藥大學(xué)附屬第四醫(yī)院，遼寧 沈陽 110101;2.遼寧省沈陽市食品藥品檢驗所，遼寧 沈陽 110013)

現(xiàn)代醫(yī)學(xué)研究表明，氧化苦參堿具有多方面的藥理活性和臨床功能，主要作用有抗炎、調(diào)節(jié)免疫、抗過敏等。目前，國內(nèi)有文獻(xiàn)報道采用高效液相色譜(HPLC)法測定苦參藥材中苦參堿和氧化苦參堿的含量[1]。筆者采用擠出－滾圓技術(shù)制備出了具有結(jié)腸靶向作用的微丸，劑型具有一定的特點和優(yōu)勢。現(xiàn)采用高效液相色譜法測定自制氧化苦參堿微丸的含量，旨在為氧化苦參堿及其制劑進(jìn)一步研究開發(fā)提供有效的檢測方法。

1 儀器與試藥

高效液相色譜儀(配備SPD－M10AVP型二極管陣列檢測器，LC－10ATVP型泵，CTO－10ASVP型溫控柱溫箱，CLASS－VP型色譜工作站，日本島津儀器公司);超聲波清洗儀(昆山市超聲波清洗儀器廠);電子天平(北京賽多利斯儀器系統(tǒng)有限公司)。氧化苦參堿原料(山西三元科技發(fā)展有限公司，含量為98.5%);氧化苦參堿對照品(中國藥品生物制品檢定所，批號為110780－201007);氧化苦參堿微丸(自制，批號分別為 20111205，20111206，20111207);乙腈(色譜純，天津市康科德科技有限公司);其他試劑試藥均為分析純，水為重蒸水。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件

色譜柱:Dimaosil C18柱(200 mm ×4.6 mm，5 μm);流動相:0.1%磷酸水溶液(每1 000 mL的0.1%磷酸水溶液中含1 mL的三乙胺)－乙腈(95∶5);檢測波長:220 nm;柱溫:35℃;流速:1.0 mL/min。

2.2 溶液制備

取氧化苦參堿對照品，用流動相配制成質(zhì)量濃度為每1 mL中含氧化苦參堿10 μg的標(biāo)準(zhǔn)溶液，即為對照品溶液。取氧化苦參堿微丸適量，研細(xì)，精密量取細(xì)粉適量(約含氧化苦參堿25 mg)，置100 mL容量瓶中，加流動相適量，超聲10 min，充分溶解，用流動相稀釋至刻度，搖勻，經(jīng)0.22 μm的微孔濾膜過濾，取續(xù)濾液1 mL，置25 mL容量瓶中，用流動相稀釋至刻度，搖勻，即得供試品溶液。取按處方配制不含氧化苦參堿的空白輔料，精密稱定，用流動相制成空白供試品溶液，過濾，備用。

2.3 方法學(xué)考察

專屬性試驗:分別取對照品溶液、空白供試品溶液和供試品溶液各20 μL，注入液相色譜儀，按上述色譜條件測定，記錄色譜圖，結(jié)果見圖1。

線性關(guān)系考察:取氧化苦參堿對照品約25 mg，精密稱定，置100 mL容量瓶中，用流動相溶解后稀釋至刻度，搖勻，配成質(zhì)量濃度約為 250 μg/mL 的貯備液。精密量取貯備液 0.4，0.6，0.8，1.0，1.2，1.4，1.6 mL，置 25 mL 容量瓶中，用流動相稀釋至刻度，各進(jìn)樣20 μL，記錄峰面積。以待測物質(zhì)量濃度(C)為橫坐標(biāo)、峰面積(A)為縱坐標(biāo)進(jìn)行線性回歸，得回歸方程 A=21 618.2C+149.25，r=0.999 9(n=7)。結(jié)果表明，氧化苦參堿質(zhì)量濃度在4.032～16.128 μg/mL范圍內(nèi)與峰面積呈良好線性關(guān)系。

圖1 高效液相色譜圖

精密度試驗:在上述色譜條件下，取線性關(guān)系考察中質(zhì)量濃度(10.08 μg/mL)的溶液，連續(xù)進(jìn)樣 6 次，每次進(jìn)樣 20 μL，色譜峰面積的 RSD為0.38%，表明方法可靠。

穩(wěn)定性試驗:取氧化苦參堿微丸適量，按“供試品溶液的制備”項方法操作，制成的供試品溶液于室溫條件下放置，分別在0，2，4，8，24 h 時各進(jìn)樣 20 μL，峰面積的 RSD 為 0.39% ，表明供試品溶液在24 h內(nèi)穩(wěn)定。

加樣回收試驗:取空白輔料與氧化苦參堿對照品，精密稱定，按處方工藝，配成主藥濃度為標(biāo)示量的80%，100%，120%的模擬樣品各3份，加流動相配制成供試品溶液，用0.22 μm微孔濾膜過濾，棄去初濾液，取續(xù)濾液，各進(jìn)樣20 μL，記錄色譜圖。按外標(biāo)法以峰面積計算含量，計算回收率。結(jié)果見表1。

表1 氧化苦參堿加樣回收試驗結(jié)果(n=9)

2.4 微丸含量測定

取氧化苦參堿對照品和3批自制微丸各適量，按2.2項下方法制備對照品溶液和供試品溶液，進(jìn)樣分析，記錄色譜圖，按外標(biāo)法以峰面積計算含量。3批樣品的含量測定結(jié)果見表2。

3 討論

在流動相條件前期摸索試驗中，氧化苦參堿峰形不好，拖尾現(xiàn)象嚴(yán)重。針對此現(xiàn)象，選擇流動相時在其中加入掃尾劑三乙胺，結(jié)果峰形得到了改善，分離度達(dá)到要求。

表2 氧化苦參堿微丸含量測定結(jié)果(n=3，%)

[1]田 娟，王智民，王維皓，等.HPLC測定苦參藥材中苦參堿和氧化苦參堿的含量[J]，中國實驗方劑學(xué)雜志，2006，12(2):23－25.