顧建新 馮軍

【摘 要】本文研究了氟化物對(duì)雞新城疫疫苗免疫效果的影響。試驗(yàn)組Ⅰ和試驗(yàn)組Ⅱ在4-42d分別喂含氟量為300mg/Kg和500mg/Kg的飼料，43-56d喂常規(guī)飼料，對(duì)照組在整個(gè)試驗(yàn)期內(nèi)喂常規(guī)飼料。試驗(yàn)結(jié)果表明，在短期內(nèi)，氟化物能增強(qiáng)雞新城疫疫苗的免疫效果；在較長(zhǎng)時(shí)間內(nèi)，氟化物干擾ND疫苗免疫效果，但不顯著。

【關(guān)鍵詞】氟化物；雞；免疫效果；新城疫疫苗

氟中毒主要是由于自然高氟以及在飼料中添加含氟量過(guò)高的磷酸氫鈣所引起的，近年來(lái)后一種因素出現(xiàn)增多的趨勢(shì)。80年代以后，氟化物對(duì)機(jī)體免疫系統(tǒng)的影響研究日益引起國(guó)內(nèi)外學(xué)者的關(guān)注。眾多研究資料表明，氟化物對(duì)機(jī)體體液免疫功能有不同程度的影響[1]。為了弄清楚氟化物對(duì)雛雞免疫功能的影響，從而為提高動(dòng)物機(jī)體抵抗力和進(jìn)一步研究氟中毒提供科學(xué)依據(jù)和新途徑，特此研究。

1.材料和方法

1.1 飼料和實(shí)驗(yàn)動(dòng)物

1.1.1 飼料

本試驗(yàn)所用飼料按一定配方自行配制。經(jīng)檢測(cè)氟含量為64mg/Kg。準(zhǔn)確稱取氟化鈉，溶于離子交換水中，以噴霧方式均勻地混入飼料中，使飼料中氟含量分別為300mg/Kg、500mg/Kg。對(duì)照組飼料不添加氟化鈉，也噴霧等量的離子交換水。

1.1.2 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物

從華南農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物科學(xué)系種雞場(chǎng)購(gòu)進(jìn)1d石歧雜黃雞150只，當(dāng)天心臟采血8只，測(cè)母源抗體效價(jià)。試驗(yàn)期為56天。試驗(yàn)前，健康觀察三天，4d時(shí)稱重并隨機(jī)分為三組，每組50只，即試驗(yàn)組Ⅰ（300mg/Kg）、試驗(yàn)組Ⅱ（500mg/Kg）、對(duì)照組。試驗(yàn)組從4-42d分別飼喂上述濃度的飼料，43-56d喂常規(guī)飼料，對(duì)照組整個(gè)試驗(yàn)期內(nèi)均喂常規(guī)飼料。三組于14d和38d接種Lasota雞新城疫疫苗。

1.2 檢測(cè)項(xiàng)目和方法

1.2.1 雞新城疫血清HI抗體滴度的測(cè)定

分別于第1、14、21、28、35、42、49、56d各取10只雞（以后同），心臟或翅下靜脈采血，分離血清，采用微量HI試驗(yàn)法于當(dāng)天測(cè)定。

1.2.2 雞血清球蛋白含量的測(cè)定

方法：分別在14、28、42、56d采血，分離血清，用雙縮脲比色法和溴甲酚綠比色法分別測(cè)得血清總蛋白和清蛋白含量，兩者之差即為球蛋白含量。即：

球蛋白含量（g/l）=總蛋白含量（g/l）-清蛋白含量（g/l）

試劑：

T.P.試劑：廣東省人民醫(yī)院臨床檢驗(yàn)中心出品。

ALB.試劑：同上。

蛋白標(biāo)準(zhǔn)液：衛(wèi)生部上海生物制品研究所出品

儀器：法國(guó)產(chǎn)UV-VIS2型半自動(dòng)生化分析儀。

1.2.3 骨氟含量的測(cè)定

方法：用氟離子選擇電極法14、28、42、56d時(shí)測(cè)定雞的股骨氟含量

儀器：

PHS-3C型精密PH計(jì)：上海雷磁儀器廠生產(chǎn)。

232C型甘汞電極（參比電極）：江蘇泰縣水準(zhǔn)儀器廠生產(chǎn)。

氟離子選擇電極：上海電光器件廠生產(chǎn)。

1.2.4 法氏囊器官指數(shù)測(cè)定

方法：分別于14、28、42、56d每組各取10只雞，稱重，測(cè)定法氏囊重量，求出器官指數(shù)。即：器官指數(shù)=臟器重（mg）/體重（g）

2.結(jié)果與分析

2.1 骨氟含量的測(cè)定

從表1中可知，在整個(gè)試驗(yàn)期內(nèi)，二個(gè)試驗(yàn)組骨氟含量均比對(duì)照組高，且差異極顯著（P<0.01）；此外，試驗(yàn)組骨氟含量隨飼料中氟含量的升高而升高，呈正相關(guān)性；同時(shí)，隨著實(shí)驗(yàn)時(shí)間的推移，試驗(yàn)組骨氟含量也相應(yīng)升高。

由此可見(jiàn)，骨胳中氟含量的高低一方面與飼料中氟含量的高低有關(guān)，另一方面也與氟化物作用時(shí)間的長(zhǎng)短有關(guān)。

表1 股骨中氟含量的變化（×103） 單位：mg/Kg

注：① C=對(duì)照組 T1=試驗(yàn)組Ⅰ T2=試驗(yàn)組Ⅱ② 同日齡中，*表示試驗(yàn)組與對(duì)照組比較，差異極顯著； **表示差異極顯著

2.2 對(duì)雞新城疫血清HI抗體滴度的影響

從表2可知，在14d測(cè)定時(shí)，試驗(yàn)組Ⅱ母源抗體滴度高于對(duì)照組，且差異顯著（P<0.05），14dLasota ND疫苗首免后7d的測(cè)定結(jié)果也同樣如此。此時(shí)，試驗(yàn)組Ⅰ母源抗體滴度雖比對(duì)照組高，但差異不顯著（P>0.05）。

由此可見(jiàn)，氟化物在實(shí)驗(yàn)初期促進(jìn)抗體產(chǎn)生，并與劑量呈正相關(guān)性。隨時(shí)間推移，這種作用越來(lái)越不明顯。

表2 雞ND病毒血清HI抗體滴度

注： ① HI抗體滴度：以2為底對(duì)數(shù)（log2x）② 14d進(jìn)行Lasota疫苗首免，38日齡時(shí)二免③ 同日齡中，*表示試驗(yàn)組與對(duì)照組比較，差異顯著

2.3 對(duì)雞血清球蛋白含量的影響

從表3可知，在14d、28d測(cè)定時(shí)，試驗(yàn)組Ⅱ球蛋白含量比對(duì)照組升高，且差異極顯著（P<0.01）；在42d、56d測(cè)定時(shí)，試驗(yàn)組Ⅱ雖比對(duì)照組高，但差異不顯著（P>0.05）。而試驗(yàn)組Ⅰ在整個(gè)試驗(yàn)期內(nèi)，球蛋白含量雖然比對(duì)照組高，但差異不顯著（P>0.05）。

由此可見(jiàn)，氟化物僅在一定時(shí)間內(nèi)影響球蛋白的生成，而且與劑量呈正相關(guān)性。

表3 雞血清球蛋白含量的變化 單位：g/l

注：

① 總蛋白測(cè)定參數(shù)：波長(zhǎng)--540nm，反應(yīng)溫度--室溫，反應(yīng)時(shí)間--10分鐘，光程—1.0cm。 清蛋白測(cè)定參數(shù)：波長(zhǎng)--630nm，反應(yīng)溫度--室溫，反應(yīng)時(shí)間--5分鐘，光程—1.0cm。

② 表中數(shù)據(jù)為：總蛋白含量（g/l）-清蛋白含量（g/l） ③ 同日齡中， **表示差異極顯著

2.4 器官指數(shù)測(cè)定

法氏囊指數(shù)及脾臟指數(shù)在整個(gè)試驗(yàn)期內(nèi)均沒(méi)有明顯變化。如表4所示。

表4 器官指數(shù)及平均重量的變化

注：

① 表中重量均為器官平均重量（g）② 器官指數(shù)單位：mg/g

3.討論

體液免疫為B淋巴細(xì)胞介導(dǎo)（又稱抗體介導(dǎo)）的免疫應(yīng)答反應(yīng)。

本試驗(yàn)通過(guò)對(duì)雞ND病毒HI抗體滴度的測(cè)定和血清球蛋白含量的測(cè)定為指標(biāo)來(lái)評(píng)價(jià)氟化物對(duì)雞體液免疫功能的影響。結(jié)果表明，在短期內(nèi)，氟化物使雞血清ND病毒HI抗體滴度和球蛋白含量顯著升高，說(shuō)明氟化物能促進(jìn)抗體產(chǎn)生，反映了氟化物在短期內(nèi)能增強(qiáng)新城疫苗免疫效果。從結(jié)果還可發(fā)現(xiàn)，在短期內(nèi)，這種增強(qiáng)作用僅出現(xiàn)在高劑量組（500mg/Kg），說(shuō)明氟化物對(duì)體液免疫功能的影響存在劑量-效應(yīng)關(guān)系。

在實(shí)驗(yàn)后階段測(cè)定時(shí)發(fā)現(xiàn)，血清中ND病毒HI抗體水平和球蛋白含量，高、低劑量組與對(duì)照組之間不存在顯著差異（P>0.05），表明較長(zhǎng)時(shí)間內(nèi)，氟化物對(duì)新城疫免疫效果影響不大。

4.小結(jié)

（1） 在短期內(nèi)，氟化物能增強(qiáng)新城疫苗免疫效果，并呈劑量-效應(yīng)關(guān)系。這種增強(qiáng)作用可能是由于氟短時(shí)間作用引起機(jī)體應(yīng)激反應(yīng)所致。

（2）在較長(zhǎng)時(shí)間內(nèi)，氟化物對(duì)新城疫疫苗免疫效果影響不明顯。

參考文獻(xiàn)：

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