鄭凝堅(jiān)

強(qiáng)制降解試驗(yàn)是指將原料藥或制劑置于比較劇烈的試驗(yàn)條件下，考察其穩(wěn)定性的一系列試驗(yàn)。一般而言，該試驗(yàn)的目的主要有以下兩方面:一是通過考察藥品在一系列劇烈條件下的穩(wěn)定性，了解該藥品內(nèi)在的穩(wěn)定特性及其降解途徑與降解產(chǎn)物。例如，通過高溫降解試驗(yàn)，可以了解所考察的藥品在高溫條件下是否穩(wěn)定;如果不穩(wěn)定，大致在何種條件下不穩(wěn)定，該藥品又是通過何種降解途徑得到何種降解產(chǎn)物。其二，這些試驗(yàn)也能在一定程度上對(duì)有關(guān)物質(zhì)分析方法用于檢查降解產(chǎn)物的專屬性進(jìn)行驗(yàn)證。對(duì)于創(chuàng)新藥，由于對(duì)其各方面的性質(zhì)均不夠了解，因此，通過設(shè)計(jì)比較完整的強(qiáng)制降解試驗(yàn)，可以比較全面地了解其穩(wěn)定特性，從而為制劑處方、工藝的設(shè)計(jì)，以及產(chǎn)品儲(chǔ)存條件的確定等提供有益的參考。所以對(duì)于創(chuàng)新藥而言，通過強(qiáng)制降解試驗(yàn)來了解藥物的穩(wěn)定特性就顯得尤為重要。在《中國(guó)藥典》中只有對(duì)藥品進(jìn)行高溫、高濕研究的要求。在ICH中只是對(duì)光照試驗(yàn)有指導(dǎo)文件。而本研究是綜合了《中國(guó)藥典》［1，2］、ICH 及外國(guó)cGMP的要求，對(duì)藥品進(jìn)行了一個(gè)全面的研究。下面是我們對(duì)藥品利巴韋林片進(jìn)行強(qiáng)降解試驗(yàn)研究的全部?jī)?nèi)容。

利巴韋林片是抗病毒藥，主要適用于呼吸道合胞病毒引起的病毒性肺炎與支氣管炎，皮膚皰疹病毒感染。國(guó)外更大量用于丙型肝炎的配合治療。

為了掌握藥品利巴韋林片在極端惡劣環(huán)境下的降解情況，并證明我們所采用的分析方法對(duì)雜質(zhì)分析的專屬性，我們綜合了國(guó)內(nèi)外對(duì)藥品的穩(wěn)定性試驗(yàn)的要求，制定了負(fù)荷降解實(shí)驗(yàn)研究。將利巴韋林片在酸、堿、熱、氧化和光照條件下進(jìn)行降解，15 d(360 h)內(nèi)降解量要達(dá)到20%(±10%)。所有的樣品都用帶有UV檢測(cè)器的HPLC檢測(cè)系統(tǒng)進(jìn)行含量及雜質(zhì)檢測(cè)，峰純度用帶有DAD檢測(cè)器的HPLC檢測(cè)系統(tǒng)進(jìn)行檢測(cè)。

1 實(shí)驗(yàn)部分

1.1 儀器與試劑 儀器:HP1100高效液相色譜系統(tǒng)(HPLC)，色譜柱:Aminex Fast Acid Analysis陽離子交換柱(9μm，100 mm ×7.8 mm)，檢測(cè)方法:USP 利巴韋林測(cè)定方法。

1.2 樣品制備

1.2.1 酸處理實(shí)驗(yàn)樣品溶液的制備 酸處理貯備液(平行制備兩份):準(zhǔn)確稱取相當(dāng)于200 mg利巴韋林原料的片劑樣品，置于100 ml容量瓶中，加入適量的 HCL(1N)溶液溶解，并定容至刻度，搖勻。置于暗處，于室溫下放置24～144個(gè)小時(shí)。

1.2.2 堿處理實(shí)驗(yàn)樣品溶液的制備 堿處理貯備液(平行制備兩份):準(zhǔn)確稱取相當(dāng)200 mg利巴韋林原料的片劑樣品，置于100 ml容量瓶中，加入約70 ml KOH(0.1N)溶液溶解，并定容至刻度，搖勻。置于暗處，于室溫下放置4～144個(gè)小時(shí)。

1.2.3 熱處理實(shí)驗(yàn)樣品的制備 取5個(gè)稱量瓶，每個(gè)瓶中放入相當(dāng)于400 mg利巴韋林原料的片劑樣品，放入130℃的烘箱中，烘24～360個(gè)小時(shí)。

1.2.4 光照實(shí)驗(yàn)樣品的制備 取5個(gè)稱量瓶，每個(gè)瓶中放入相當(dāng)于400 mg利巴韋林原料藥的片劑樣品，置于光照試驗(yàn)箱日光燈下(照度:10000±1000Lux)，放置24～360個(gè)小時(shí)。

1.2.5 氧化處理實(shí)驗(yàn)樣品溶液的制備 氧化試驗(yàn)貯備液(平行制備兩份):準(zhǔn)確稱取相當(dāng)于100 mg利巴韋林原料藥的片劑樣品，置于100 ml容量瓶中，加入約100 ml 3% 雙氧水溶解，然后稀釋至100 ml，搖勻，置于恒溫恒濕箱中(40℃±5℃，避光)，放置24～360個(gè)小時(shí)。

1.2.6 雜質(zhì)溶液的制備 雜質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)品貯備液:分別準(zhǔn)確稱取10 mg 雜質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)品(RTCOOH、TCOOH、Ribavirin α-Anomer、TCONH2、5’ARTCONH2)，置于五個(gè)不同的 50 ml容量瓶中，用稀釋液溶解并定容至刻度，搖勻。再準(zhǔn)確稱取25 mg利巴韋林標(biāo)準(zhǔn)品，置于另外一個(gè)50 ml容量瓶中，用稀釋液溶解并定容至刻度，搖勻。

1.3 實(shí)驗(yàn)程序 按照上述負(fù)荷降解處理?xiàng)l件，將利巴韋林片分別進(jìn)行酸、堿、熱、光、氧化處理，然后運(yùn)用HPLC分析系統(tǒng)，根據(jù)設(shè)定的儀器及色譜條件，對(duì)處理后的樣品溶液進(jìn)行含量、雜質(zhì)及峰純度測(cè)定。堿處理樣品處理4 h后測(cè)定，酸處理樣品在第24、48、144 h分別測(cè)定一次，熱處理、光處理和氧化處理樣品在第 24、72、120、240、360 h 分別測(cè)定一次。

圖1 酸處理實(shí)驗(yàn)利巴韋林片樣品圖譜

2 實(shí)驗(yàn)結(jié)果及分析

2.1 酸處理實(shí)驗(yàn)總結(jié) 按照已定的實(shí)驗(yàn)方案，在酸處理實(shí)驗(yàn)第24、48、144 h，我們分別對(duì)處理后的利巴韋林片樣品進(jìn)行了HPLC檢測(cè)，結(jié)果表明，利巴韋林片經(jīng)過酸處理144 h后，發(fā)生了明顯降解，所檢測(cè)出的已知雜質(zhì)有 RTCOOH、TOOOH、TCONH2等，見圖1。

2.2 堿處理實(shí)驗(yàn)總結(jié) 按照已定的實(shí)驗(yàn)方案，在堿處理實(shí)驗(yàn)第4小時(shí)，我們對(duì)處理后的利巴韋林片樣品進(jìn)行了HPLC檢測(cè)，結(jié)果表明，利巴韋林片經(jīng)堿處理4 h后，發(fā)生了明顯降解。這說明:在堿性條件下，利巴韋林片降解產(chǎn)生RTCOOH雜質(zhì)，見圖2。

圖2 堿處理實(shí)驗(yàn)利巴韋林片樣品圖譜

2.3 光處理實(shí)驗(yàn)總結(jié) 按照已定的實(shí)驗(yàn)方案，在光處理實(shí)驗(yàn)第24、72、120、240、360 h，我們分別對(duì)處理后的利巴韋林片樣品進(jìn)行了HPLC檢測(cè)，結(jié)果表明，利巴韋林片干品經(jīng)過光照處理360 h后，均未發(fā)生明顯降解。這說明:在光照條件下，利巴韋林片相對(duì)比較穩(wěn)定。

2.4 熱處理實(shí)驗(yàn)總結(jié) 按照已定的實(shí)驗(yàn)方案，在熱處理實(shí)驗(yàn)第24、72、120、240、360 h，我們分別對(duì)處理后的利巴韋林片樣品進(jìn)行了HPLC檢測(cè)，結(jié)果表明，利巴韋林片干品經(jīng)熱處理360 h后，未發(fā)生明顯降解，這說明:在較高溫度條件下，利巴韋林片干品相對(duì)比較穩(wěn)定。

2.5 氧化處理實(shí)驗(yàn)總結(jié) 按照已定的實(shí)驗(yàn)方案，在氧化處理實(shí)驗(yàn)第24、72、120、240、360 h，我們分別對(duì)處理后的利巴韋林片樣品進(jìn)行了HPLC檢測(cè)，結(jié)果表明。在氧化條件下，利巴韋林片中核糖基與三氮唑環(huán)之間的C-N鍵發(fā)生斷裂，由于核糖基不包含能吸收紫外光的發(fā)色團(tuán)，故而不能被UV檢測(cè)器檢出，見圖3。

圖3 氧化處理樣品圖譜

3 結(jié)論

本報(bào)告以上實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)及結(jié)論表明，利巴韋林片采用USP高效液相測(cè)定方法，能夠穩(wěn)定準(zhǔn)確地檢測(cè)到利巴韋林片的降解雜質(zhì)，該方法可作為對(duì)利巴韋林片進(jìn)行質(zhì)量監(jiān)控的有效手段。

［1］ 2010年1月 ISBN 978-7-5067-4438-6《中國(guó)藥典》2010版二部附錄XIX C原料藥與藥物制劑穩(wěn)定性試驗(yàn)指導(dǎo)原則

［2］ 2001年8月，ICH-Q1A(R2)Stability Testing of New Drug Substances and Products