王曉璐 徐靜 李慧 郭慧 梁華

隨著我國經(jīng)濟(jì)的發(fā)展人們飲食結(jié)構(gòu)的改變，痛風(fēng)已經(jīng)由過去的罕見病變成了當(dāng)今的常見病。痛風(fēng)是嘌呤代謝紊亂所導(dǎo)致的疾病，其主要臨床特點(diǎn)為血尿酸增高及尿酸鹽沉積導(dǎo)致的痛風(fēng)性關(guān)節(jié)炎反復(fù)發(fā)作、痛風(fēng)石沉積、慢性間質(zhì)性腎炎和尿酸腎結(jié)石形成［1］。痛風(fēng)已經(jīng)成為了當(dāng)今世界中老年男性的常見病［2］，患病率呈逐年增高的趨勢［3］，并且出現(xiàn)了發(fā)病年齡低齡化的特點(diǎn)［4］。本實(shí)驗(yàn)通過對(duì)急性痛風(fēng)性關(guān)節(jié)炎大鼠模型關(guān)節(jié)液內(nèi)IL-8、TNF-α水平變化的研究，探討五藤痛風(fēng)飲治療痛風(fēng)性關(guān)節(jié)炎的作用機(jī)制。

1 試驗(yàn)過程

1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 健康清潔級(jí)wistar大鼠60只，全部為雄性，體重為(200±20)g，購于北京維通利華實(shí)驗(yàn)動(dòng)物技術(shù)有限公司。實(shí)驗(yàn)動(dòng)物飼養(yǎng)環(huán)境：室溫20℃ ～22℃，空氣新鮮，自由攝食、飲水，飼固體飼料。分籠飼養(yǎng)。

1.2 實(shí)驗(yàn)藥品 中藥組五藤痛風(fēng)飲(忍冬藤、海風(fēng)藤、雞血藤、絡(luò)石藤 、青風(fēng)藤、穿山龍、秦艽、土茯苓、萆薢、威靈仙等組成。將藥物加水適量，煎制濃度為7.2 g/ml的水煎液)；西藥組秋水仙堿，配制成濃度為0.03 mg/ml的溶液。

1.3 試劑及設(shè)備 ①尿酸鈉溶液的制備取250 mg MSUC顆粒加入9 ml生理鹽水，1 ml吐溫80，加溫?cái)嚢?，制成濃度?5 mg/ml；②IL-8、TNF試劑盒；③0.9%氯化鈉注射液；④腺嘌呤制成10 mg/ml的乳濁液，現(xiàn)用現(xiàn)配。

1.4 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物分組 將60只Wistar大鼠隨機(jī)分為6組，分別為空白組，關(guān)節(jié)炎模型組，中藥高劑量組、中藥中劑量組、中藥低劑量組，西藥對(duì)照組，每組10只。每只均使用苦味酸染色標(biāo)記。

1.5 實(shí)驗(yàn)步驟 60只大鼠正常飼養(yǎng)一周后開始給藥，空白組常規(guī)飼養(yǎng)，中藥各組給藥：(7.2 g/ml、3.6 g/ml、1.8 g/ml)五藤痛風(fēng)飲煎液+腺嘌呤各2 ml，西藥組給藥：秋水仙堿+腺嘌呤各2 ml，模型組給藥：9%生理鹽水+腺嘌呤各2 ml，空白組給藥：9%生理鹽水2 ml，均為灌胃給藥；第2、3、4天給藥同第一天；第5天灌胃給藥30 min后在各鼠右踝關(guān)節(jié)處，立即以碘酒消毒局部，用6號(hào)滅菌注射針在大鼠右側(cè)踝關(guān)節(jié)背側(cè)，從45°方向插入至脛跗關(guān)節(jié)腔內(nèi)，注射0.2 ml MSU混懸液；第6、7天給藥同第5天。

1.6 取材 第7天給藥后30 min取材：10%水合氯醛麻醉，頸動(dòng)脈取血，脫頸處死后取踝關(guān)節(jié)滑膜組織，制備血清和組織勻漿，-70℃保存待測。

2 試驗(yàn)結(jié)果

五藤痛風(fēng)飲對(duì)大鼠痛風(fēng)性關(guān)節(jié)炎模型關(guān)節(jié)液TNF-α、IL-8含量影響：見表。

表1 各組藥物對(duì)關(guān)節(jié)液中IL-8、TNF-α水平的影響(±s)

表1 各組藥物對(duì)關(guān)節(jié)液中IL-8、TNF-α水平的影響(±s)

注：與模型組比較：▲P＜0.01

分組 n IL-8(pg/ml) TNF(pg/ml)空白 10 0.49±0.16▲ 0.54±0.07▲模型 10 2.49±0.35 2.14±0.50秋水仙堿 10 0.72±0.16▲ 0.87±0.11▲中藥高劑量 10 0.84±0.16▲ 0.95±0.14▲中藥中劑量 10 1.88±0.25▲ 1.31±0.26▲中藥低劑量10 2.27±0.38 1.84±0.36

對(duì)關(guān)節(jié)液中IL-8水平的影響：與空白組比較，模型組的IL-8水平有明顯升高(P＜0.01)，說明本次試驗(yàn)造模成功；與模型組比較，秋水仙堿組、中藥高劑量組、中藥中劑量組的IL-8水平均有明顯下降(P＜0.01)，中藥低劑量組的無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)；中藥高中兩個(gè)劑量組雖無顯著差異，但也存在著量效關(guān)系(高劑量＞中劑量)。對(duì)關(guān)節(jié)液中TNF-α水平的影響：與空白組比較，模型組的TNF-α水平明顯升高(P＜0.01)，說明本次試驗(yàn)造模成功；與模型組比較，秋水仙堿組、中藥高劑量組、中藥中劑量組的TNF-α水平有明顯下降(P＜0.01)，中藥低劑量組無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)；中藥高中兩個(gè)劑量組雖無顯著差異，但也存在著量效關(guān)系(高劑量＞中劑量)。

3 討論

現(xiàn)代醫(yī)學(xué)認(rèn)為痛風(fēng)急性發(fā)作其主要的病理改變是尿酸鈉晶體(MSUC)在關(guān)節(jié)周圍組織沉積引起急性炎癥反應(yīng)。沉積在關(guān)節(jié)腔中的尿酸鹽結(jié)晶(MSU)被吞噬細(xì)胞、白細(xì)胞吞噬后，破壞細(xì)胞的溶酶體等細(xì)胞器，釋放出蛋白水解酶、激酶、組胺、趨化因子等物質(zhì)，引起局部血管擴(kuò)張和通透性增加、血漿滲出、水腫、發(fā)熱、白細(xì)胞聚集等炎癥反應(yīng)，促使炎癥細(xì)胞釋放白細(xì)胞介素、腫瘤壞死因子等細(xì)胞因子，激活環(huán)氧化酶-2(COX-2)合成前列腺素類，導(dǎo)致炎癥范圍進(jìn)一步擴(kuò)大，進(jìn)而發(fā)生急性痛風(fēng)性關(guān)節(jié)炎［5］?？偟膩碇v，尿酸鹽在滑膜組織沉積并引起炎癥介質(zhì)釋放是急性痛風(fēng)性關(guān)節(jié)炎發(fā)作的基礎(chǔ)，PGE2、白細(xì)胞三烯 B4(LTB4)、IL-1、IL-6、IL-8、TNF-α 等是參與炎癥過程的重要因子。本實(shí)驗(yàn)研究發(fā)現(xiàn)，五藤痛風(fēng)飲對(duì)大鼠痛風(fēng)性關(guān)節(jié)炎模型關(guān)節(jié)液TNF-α、IL-8的水平有明顯下調(diào)作用，由此推測五藤痛風(fēng)飲在消除炎癥因子方面有一定的作用。總之，五藤痛風(fēng)飲對(duì)大鼠痛風(fēng)性關(guān)節(jié)炎發(fā)揮作的機(jī)制之一，可能與其降低TNF-α、IL-8的水平起到抗炎作用有關(guān)。

［1］ Richette P，Bardin T．Gout．Lancet，2010，375(9711)：318-328．

［2］ 南海榮．高尿酸血癥和痛風(fēng)的遺傳學(xué)研究進(jìn)展．國外醫(yī)學(xué)內(nèi)分泌學(xué)分冊，2002，22(5)：326．

［3］ Kim KY，Ralph schumaeher H．Hunsehe E，et al．A literature review of the epidemiology and treatment of acute gout．Clin Ther，2003，25(6)：1593-1617．

［4］ Choi HK，Curhan G．Gout：epidemiology and lifestyle choices．Curr Opin Rheumato1．2005，17(3)：341-345．

［5］ Ponce L，Arjona M，Blanco G．The effect of montelukast in a model of gouty arthritis induced by sodium monourate crystals．Invest Clin，2011，52(1)：15．