膿毒癥患者腸道通透性及糞便菌群檢測分析

謝國旗，顧 韋，蔣建新

膿毒癥是由病原微生物入侵機體感染引起的全身損傷性防御反應癥候群，通常認為是機體過度炎癥反應或炎癥失控所致，是嚴重創(chuàng)傷、損傷、外科大手術后常見的并發(fā)癥。胃腸道以其在體內獨特的生理環(huán)境參與了膿毒癥病理生理過程，腸道黏膜損害是膿毒癥促發(fā)多器官功能障礙綜合征的重要病理環(huán)節(jié)，腸黏膜屏障功能不全與膿毒癥患者的內毒素血癥、系統(tǒng)性炎癥反應綜合征以及多器官功能衰竭密切相關，臨床上主要表現(xiàn)為應激性胃腸黏膜病變、中毒性腸麻痹、腸道微生態(tài)失衡、腸道通透性增加、細菌易位所致的腸源性感染[1]。因此，預防和治療腸黏膜屏障功能不全，將對膿毒癥患者預后有重要意義。本研究通過檢測腸道通透性和糞便菌群分析兩個方面初步探討了膿毒癥患者腸黏膜屏障功能障礙情況。

1 資料與方法

1.1 一般資料 膿毒癥組：選擇2009￣01—2010￣12收住筆者所在醫(yī)院的20例患者，均符合文獻[2]的診斷標準，被證實有細菌存在或有高度可疑的感染灶，其診斷標準包括下列3項或3項以上體征：①體溫>38℃或<36℃；②心率>90次/min；③呼吸頻率>20次/min，或過度通氣使動脈血二氧化碳分壓（PaCO2）<32 mmHg（1 mmHg=0.133 kPa）；④外周白細胞計數(shù)>12×109/L或<4×109/L或未成熟粒細胞>10%。對照組：同期接診的外傷患者20例，無任何部位感染征象，血常規(guī)正常。兩組患者性別、年齡構成無統(tǒng)計學差異。

1.2 儀器和試劑 721型分光光度計；800型醫(yī)用離心機；PEG-600貯備液：準確稱取PEG-600（分子量范圍570～660）20.000 g溶于水中，用蒸餾水定容于1000 ml容量瓶中，使用時根據(jù)需要稀釋成不同濃度的溶液。

1.3 Fe（SCN）3-CHCl3二相系統(tǒng)光度法檢測腸道通透性 尿PEG600測定檢測IBF方法的建立[3]：在不同波長下測定有色CHCl3相和水相中Fe（SCN）3的最大吸收波長。測定不同時間吸光度。將PEG-600貯備液稀釋成標準系列，作校準曲線。計算回收率及相對標準偏差。將2.00 ml A液和2.00 ml CHCl3混合于10 ml試管中組成兩相系統(tǒng)。將0.2 ml PEG-600標準溶液或尿樣加入含有二相系統(tǒng)的離心管中，用不含PEG的兩相系統(tǒng)中的CHCl3相作參比，最大吸收波長處測定吸光度。膿毒癥組與對照組患者尿中的PEG含量分別計算均數(shù)（M）與標準差（SD），超過對照組M＋2SD者視為通透性增加。

1.4 糞便菌群分析檢測腸道菌群失調 參考文獻[4]糞便涂片診斷腸道菌群的理論和基礎，對每份糞便標本快速涂片革蘭染色以快速診斷腸道菌群失調癥，按照菌種總數(shù)及菌群分布分為正常大便及Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ度菌群失調癥。

1.5 統(tǒng)計學處理 用SPSS統(tǒng)計學軟件進行統(tǒng)計學處理，組間比較用t檢驗和χ2檢驗，P<0.05為有統(tǒng)計學差異。

2 結 果

2.1 各組患者的尿樣檢測結果 尿樣測定發(fā)現(xiàn)膿毒癥組患者與對照組相比，尿液中 PEG-600含量升高 [（90.589±17.565） vs （83.867±6.234） μg，P<0.05]，提示膿毒癥組患者有腸道通透性增加。

2.2 各組菌群失調率 膿毒癥組高于對照組（P<0.05）。見表1。

表1 兩組患者菌群失調情況

3 討 論

膿毒癥發(fā)病機制相當復雜，其發(fā)病機制不僅包括感染、炎癥、免疫、凝血等基本問題，與腸功能障礙也存在密切關系。研究證實，膿毒癥可使胃腸道黏膜缺血缺氧，胃腸道運動減弱，腸上皮細胞損傷，腸道病原微生物粘附、定植能力改變，厭氧菌數(shù)量減少，腸黏膜上粘附、定植的致病菌數(shù)量增加發(fā)生腸道菌群紊亂以及腸黏膜通透性增加[1]。腸黏膜屏障是指由機械屏障（腸上皮分泌的黏液、腸上皮細胞及其緊密連接等）、生物屏障（腸道微生態(tài)）和免疫屏障等組成的機體防御體系，主要作用是能阻止腸道內有害物質進入體循環(huán)[5]。本研究通過檢測腸道通透性和糞便菌群分析兩個方面初步探討了膿毒癥患者腸黏膜屏障功能障礙情況。結果顯示，膿毒癥組患者有腸道通透性增加、菌群失調發(fā)病率顯著高于對照組（P<0.05），說明膿毒癥患者確實易導致腸黏膜屏障功能障礙。

另一方面，膿毒癥由于腸黏膜屏障破壞，腸道通透性增加，致病菌大量繁殖以及缺血缺氧、細胞因子作用，導致寄生于腸道內的微生物和（或）內毒素通過某種途徑越過腸黏膜屏障，大量侵入正常情況下為無菌的腸道外組織，如腸壁漿膜、腸系膜淋巴結、門靜脈及其他遠處器官，出現(xiàn)腸源性感染并刺激已活化的單核和巨噬細胞釋放大量的細胞因子和炎性介質，誘發(fā)和加重膿毒癥和多器官功能障礙，故腸功能衰竭又被稱為膿毒癥、多器官功能衰竭的扳機。腸道在膿毒癥發(fā)病過程的作用主要是通過缺血-再灌注損傷、腸道菌群失調、內毒素釋放炎癥介質等機理，造成腸道細菌和內毒素移位，啟動或加重炎癥介質的“瀑布效應”，導致失控性SIRS[5]。因此，膿毒癥與腸功能障礙互相影響，極易形成惡性循環(huán)。探討膿毒癥患者的腸黏膜屏障功能，加強早期對膿毒癥患者腸道屏障功能的保護，對防治腸源性細菌和毒素移位以及膿毒癥、多器官功能障礙綜合征具有重要的意義。

[1]孟廣剛，任愛民.膿毒癥胃腸黏膜損傷及中西醫(yī)保護研究進展[J].北京中醫(yī)藥，2010，29（10）：795-796.

[2]姚詠明，盛志勇，林洪遠，等.膿毒癥定義及診斷的新認識[J].中國危重病急救醫(yī)學，2004，16（6）：321-323.

[3]姚玉川，馮天杰，趙江華，等.慢性消化病患者腸黏膜屏障功能障礙與腸道微生態(tài)失衡的關系[J].中華消化雜志，2006，26（4）：267-268.

[4]張秀榮，徐智民.腸道菌群糞便涂片檢查圖譜[M].北京：人民軍醫(yī)出版社，2000.1223.

[5]Baumgart DC，Dignass AU.Intestinal barrier function[J].Curr Opin Clin Nutr Metab Care，2002，5（7）:685-694.