王爾棟，陳韻竹，陳國華，蔡 楓，李洪武*

（1.海南大學(xué) 海洋學(xué)院，海南 ?？?570228；2.海口瀾邦生物技術(shù)有限公司，海南 海口 570203）

由于自然環(huán)境的變化和人為破壞，世界上大部分的珊瑚正在以驚人的速度退化消失[1].擁有珊瑚礁30%的東南亞地區(qū)，已有60%的遭到破壞，其中菲律賓為70%，印度尼西亞則高達80%，以此速度，40年內(nèi)整個東南亞的珊瑚礁生態(tài)系統(tǒng)將完全消失[2-4].另外據(jù)澳大利亞的全球珊瑚礁生態(tài)系統(tǒng)監(jiān)測網(wǎng)估計，近年來，珊瑚捕捉和采集技術(shù)的提高以及珊瑚人工養(yǎng)殖研究者之間的交流都有效地促進了珊瑚人工養(yǎng)殖的發(fā)展[5].相關(guān)的問題也相繼的出現(xiàn)在養(yǎng)殖過程中[6]，如病原體的發(fā)生、傳播與擴散，寄生蟲以及捕食者的危害.其中珊瑚養(yǎng)殖中出現(xiàn)的寄生蟲問題，國內(nèi)外都報道極少[7].尤其對珊瑚寄生蟲的報道極少；而國內(nèi)的珊瑚人工養(yǎng)殖更是還在起步階段，沒有對珊瑚寄生蟲的任何描述.國外文獻中較為常見的珊瑚寄生蟲是紅蟲[8-10]，一般治理的方法是用治療大型狗類犬心蟲的菌素氧化物（每1436 L水中有23mg菌素氧化物含量為0.016mg·L-1），將其加入水缸中放置5～7h.但是關(guān)于鹿角珊瑚寄生蟲櫛水虱的報道幾乎沒有，所以很有必要對實驗室出現(xiàn)的櫛水虱進行詳細的研究[11-13].本研究探索人工養(yǎng)殖下鹿角珊瑚出現(xiàn)寄生蟲櫛水虱的防治方法，為未來珊瑚礁的保護提供數(shù)據(jù)和資料.

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 實驗生物

供試珊瑚為松枝鹿角珊瑚（Acropora brueggemanni）和寄生蟲櫛水虱 Asellus aquaticuse，分離自被寄生蟲感染的珊瑚體，由?？跒懓钌锟萍加邢薰咎峁?

1.1.2 實驗試劑

供試試劑見表1.

1.1.3 供試所需設(shè)備和器材

供試所需設(shè)備和器材見表2.

1.2 研究方法

1.2.1 實驗藥品的配制

量取O,O-二甲基-（2,2,2-三氯-1-羥基乙基）膦酸酯（敵百蟲）晶體藥品20 mg，加入200 mL蒸餾水，混勻，得到濃度為100 mg·L-1的敵百蟲藥品母液.置于室溫保存.

表1 供試試劑Tab.1 The experimental reagents

表2 供試所需設(shè)備和器材Tab.2 The instruments and experimental methods

1.2.2 供試生物采集

取中出現(xiàn)被寄生蟲感染并白化鹿角珊瑚，在解剖鏡下對珊瑚白化部分進行觀察，發(fā)現(xiàn)其白化和未白化交界區(qū)域有寄生蟲（A.aquaticuse）.其體長為2～3 mm.使用解剖將櫛水虱從珊瑚上分離（見圖1）.截取3 cm左右的健康鹿角珊瑚斷肢，固定在塑料板上[14].

1.2.3 供試所需養(yǎng)殖環(huán)境建立

供試所需培養(yǎng)方法為室內(nèi)循環(huán)水珊瑚人工養(yǎng)殖，該方法主要依靠柏林系統(tǒng)珊瑚養(yǎng)殖方法[9-10].應(yīng)用ELH JCR鹵素?zé)艉蚑5HO燈管作為光源，以蛋白質(zhì)分離器、鈣反應(yīng)器和沸石桶反應(yīng)器等控制水體環(huán)境（恒溫26℃）.

1.2.4 供試所需帶藥養(yǎng)殖環(huán)境制作

圖1 櫛水虱的變化Fig.1 The change of Asellus aquaticuse

據(jù)Mitch Carl等櫛水虱在敵百蟲濃度為3 mg·L-1的海水中，48 h內(nèi)必定會死亡，所以3 mg·L-1為最高濃度.在超凈臺上，按所需的質(zhì)量稱取供試試劑O,O-二甲基-（2,2,2-三氯-1-羥基乙基）膦酸酯（敵百蟲）后，將溶入到養(yǎng)殖環(huán)境中（恒溫26℃）混合均勻后，迅速蓋好，達到實驗所需藥品濃度.按照各濃度梯度配置，依次設(shè)置3.0、2.8、2.5、2.0、1.8、1.5、1.0、0.8、0.5 mg·L-19個濃度梯度.用等體積蒸餾水為對照組.

1.2.5 供試養(yǎng)殖環(huán)境水質(zhì)測定

采用《GB17378.4-2007海洋檢測規(guī)范：第四部分海水分析》的方法對有寄生蟲的珊瑚養(yǎng)殖缸中水質(zhì)進行測定.

1.2.6 敵百蟲對寄生蟲櫛水虱的毒性研究

每個濃度下的實驗組與對照組各放將10只櫛水虱.分別放入氧氣泵，將通氣量調(diào)整到合適的大小進行充氧并造流.從放置寄生蟲時間開始計時，在12、24、48h后和觀察櫛水虱對敵百蟲的毒性反應(yīng).為保證實驗質(zhì)量，每個濃度下進行3次重復(fù)實驗，分別命名為A組，B組和C組.

1.2.7 敵百蟲對鹿角珊瑚毒性研究

為保證藥品敵百蟲不會在殺滅櫛水虱時對珊瑚本體造成影響.根據(jù)敵百蟲對櫛水虱的毒性研究的結(jié)果，由于3.0、2.8 mg·L-1的含量會對珊瑚形成明顯刺激，分泌腔液并迅速白化，所以確定使用2.5、2.0、1.8、1.5、1.0 mg·L-14個敵百蟲濃度梯度對鹿角珊瑚進行實驗.每2個一組分別放入實驗缸和對照缸.向?qū)嶒灲M中加入所需敵百蟲母液，將實驗組的濃度調(diào)整到所需濃度.記錄珊瑚狀態(tài)，根據(jù)敵百蟲對櫛水虱的實驗結(jié)果，決定對珊瑚先進行24h觀察，記錄下珊瑚情況并拍照.后將實驗鹿角珊瑚清潔后放回原養(yǎng)殖缸中，觀察其生存狀態(tài).

1.2.8 供試試劑殺蟲效果測定

分別記錄A組，B組和C組各6、12、24、48h后寄生蟲的死亡個數(shù)，取3次平均值，計算公式為：平均死亡率=（3組供試寄生蟲總數(shù)—3組剩余寄生蟲數(shù)）/（3組供試寄生蟲總數(shù)）×100%.

2 結(jié)果與分析

2.1 供試養(yǎng)殖環(huán)境水質(zhì)測定結(jié)果

測定結(jié)果見表3.

表3 供試養(yǎng)殖環(huán)境水質(zhì)測定結(jié)果Tab.3 The results of water quality of the coral husbandry exhibit

2.2 敵百蟲對櫛水虱毒性研究結(jié)果（見表4）

將A組、B組和C組求平均值后，將死亡個數(shù)同濃度梯度建立線性關(guān)系（見圖2）.

2.3 試驗時間內(nèi)櫛水虱死亡和存活狀態(tài)

通過分析和觀察分別放置在實驗組和對照組的10只櫛水虱試驗時間內(nèi)死亡和存活情況，選取有明顯分辨的組別進行整理和分析，判斷在某一濃度下敵百蟲溶液能否有效地殺死寄生蟲（見表5）.

2.4 敵百蟲對鹿角珊瑚毒性研究結(jié)果

敵百蟲對鹿角珊瑚毒性研究結(jié)果見表6.

表4 三組敵百蟲對櫛水虱毒性刺激結(jié)果Tab.4 The results of three groups toxicity experiment

圖2 敵百蟲對櫛水虱的試驗結(jié)果Fig.2 The results of toxicity experiment

2.5 分析與討論

據(jù)表3，珊瑚所需海水水質(zhì)環(huán)境是符合自然界珊瑚生存所適范圍，所以水體環(huán)境是試受珊瑚所適宜的.如圖3所示，在櫛水虱出現(xiàn)前后珊瑚的變化.當(dāng)相同的水環(huán)境下（如表3所示）在櫛水虱出現(xiàn)之前珊瑚狀態(tài)可見觸手完全伸展，色彩明艷，可鑒定為健康珊瑚.在櫛水虱出現(xiàn)之后珊瑚狀態(tài)可見觸手萎縮或珊瑚分泌腔液，表面有明顯的白化，1～2 d珊瑚即可見嚴重蛻皮，完全裸露白色骨骼，可鑒定珊瑚瀕臨死亡.

據(jù)表4，確定24 h內(nèi)，3.0、2.8、2.5、2.0、1.5 mg·L-1質(zhì)量濃度中的櫛水虱都基本死亡：完全麻痹，身體翻轉(zhuǎn)，步足無法爬行和附著，只有尾部抽動，最終從被感染珊瑚體上脫落.如圖1所示，櫛水虱受藥前后對比.

如圖2所示，36h內(nèi)絕大多數(shù)櫛水虱已經(jīng)死亡或已經(jīng)腐化消失，而含量為1.0 mg·L-1時，敵百蟲溶液對櫛水虱48 h內(nèi)基本沒有影響.從實驗結(jié)果可以看出，在含量為1.5～3.0 mg·L-1的敵百蟲溶液中，櫛水虱會在24 h內(nèi)基本死亡，從珊瑚上脫落.36 h內(nèi)，所有櫛水虱會腐化，完全死亡.說明在此濃度間，敵百蟲溶液能有效地殺死寄生蟲櫛水虱.

據(jù)表5，當(dāng)敵百蟲含量為1.5 mg·L-1到2.0 mg·L-1之間時，對珊瑚無影響.36 h內(nèi)（放回原缸中），當(dāng)含量為2.0 mg·L-1時，珊瑚在原缸中白化死亡.分析可能其受到了敵百蟲的影響，不能適應(yīng)原缸中的生存條件.而含量為2.5 mg·L-1時，珊瑚會在24 h內(nèi)死亡.從實驗結(jié)果可以看出，在含量為1.5 mg·L-1和1.8 mg·L-1的敵百蟲溶液中，鹿角珊瑚24h內(nèi)不會受到影響，并且在被放回原缸后的24 h后，也不會有白化現(xiàn)象.

由表6，根據(jù)本次對寄生蟲櫛水虱和珊瑚的實驗結(jié)果，可以得出結(jié)論：當(dāng)敵百蟲溶液質(zhì)量濃度為1.5 mg·L-1和1.8 mg·L-1時，36h內(nèi)可有效使鹿角珊瑚附著的寄生蟲櫛水虱脫落，且對鹿角珊瑚的生長不造成任何影響.后將鹿角珊瑚移出放回原缸，24 h內(nèi)櫛水虱會腐化，而鹿角珊瑚則能繼續(xù)生存.

危害生物櫛水虱屬于甲殼綱（Crustacea)，等足目（Isopoda)，櫛水虱亞目身體細長，2 mm-11 mm.有的種類具眼.其生存于海底表面或底內(nèi)[15-16].因為自然界珊瑚白化死亡的主要原因是全球氣候變化和人為破壞，可能寄生蟲這方面沒有引起足夠的重視，鮮見報道.由于在室內(nèi)循環(huán)水養(yǎng)殖環(huán)境下，沒有自然環(huán)境的影響，寄生蟲的危害就被凸顯出來.雖然國外珊瑚礁人工養(yǎng)殖資料已經(jīng)比較豐富[12]，但是對珊瑚寄生蟲的報道極少；而國內(nèi)的珊瑚人工養(yǎng)殖更是還在起步階段，沒有對珊瑚寄生蟲的任何描述.本次實驗希望能為以后的研究提供基礎(chǔ)數(shù)據(jù).

表5 試驗時間內(nèi)死亡和存活情況Tab.5 The death and the servive during the experiment

表6 敵百蟲對鹿角珊瑚毒性研究Tab.6 The results of toxicity experiment

圖3 珊瑚狀態(tài)的變化Fig.3 The change of coral state

[1]王麗榮,趙煥亭.珊瑚礁生態(tài)保護與管理研究[J].生態(tài)學(xué)雜志,2004,23(4)：103-108.

[2]鄒仁林.中國珊瑚礁的現(xiàn)狀與保護對策[M].北京：中國科學(xué)技術(shù)出版社,1979：281-291.

[3]羅夏.珊瑚前途堪憂[N].科學(xué)時報,2003-09-17(3).

[4]Holdgate M W.熱帶海岸帶資源的可持續(xù)利用—一個重大的保護問題[J].AMBIO,1993,22(7)：481-482.

[5]鮑鷹,周學(xué)家,黃美霞,等.鹿角珊瑚人工養(yǎng)殖的初步研究[J].海洋科學(xué),2012,36(1)：69-72.

[6]Henrik Franklin,Christopher A.Muhando,et al.坦桑尼亞桑給巴爾地區(qū)珊瑚養(yǎng)殖及其在時間上的補生模式[J].Ambio,1998,27(8)：649-653.

[7]Eric Borneman.Introduction to the husbandry of corals in aquariums：A review[J].Advances in Coral Husbandry in Public Aquariums.Public Aquarium Husbandry Series,2008,2：3-14.

[8]Adey W H.The microcosm：A new tool for reef research[J].Coral Reefs,1983,1：193-201.

[9]Anthony K R N.Coral suspension feeding on fine particulate matter[J].Exp Mar Biol Ecol,1999,232：85-106.

[10]Borneman E H.Sea Salts,Part One：A review and a new study to determine their effects on reef aquarium inhabitants[J].Reef Hobbyist Online,2006,2(3).542-551.

[11]Mitch Carl.Predators and pests of captive corals[J].Advances in Coral Husbandry in Public Aquariums.Public Aquarium Husbandry Series,2008,2：31-36.

[12]鄒仁林.中國動物志,腔腸動物門,珊瑚蟲綱,石珊瑚目,造礁石珊瑚（第1版）[M].北京：科學(xué)出版社,2001：1-221.

[13]鄒仁林.西沙群島珊瑚類研究，Ⅴ.深水的鹿角珊瑚及其一新種[J].熱帶海洋,1984,3(2)：52-58.

[14]鄒仁林.造礁石珊瑚[J].生物學(xué)通報,1998,33(6)：8-11.

[15]劉凌云,鄭光美.普通動物學(xué)（第3版）[M].北京：高等教育出版社,1978：1-248.

[16]中國大百科全書總編輯委員會.中國大百科全書,生物卷[M].北京：中國大百科全書出版社,1991：1-460.