HPLC法測(cè)定酒石酸布托啡諾注射液的含量

方寶霞，陳富超，朱 軍，李 鵬，劉慧敏

酒石酸布托啡諾是人工合成的к受體激動(dòng)藥和μ受體部分激動(dòng)藥，其鎮(zhèn)痛效價(jià)是嗎啡的5～8倍，而呼吸抑制僅僅為嗎啡的1/5［1］。近年來(lái)，布托啡諾用于術(shù)后鎮(zhèn)痛在臨床廣泛應(yīng)用［2-4］?！吨袊?guó)藥典》2010版未收載該品種的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，本文采用HPLC法測(cè)定了酒石酸布托啡諾注射液的含量，方法簡(jiǎn)便、快速準(zhǔn)確，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 儀器與試劑

1.1 儀器 DIONEX Ultimate 3000高效液相色譜儀，包括Ultimate 3000四元低壓梯度泵，UltiMate 3000二極管陣列檢測(cè)器，Chromeleon色譜工作站;日本島津AEU-210電子天平。

1.2 藥品與試劑 酒石酸布托啡諾注射液(江蘇恒瑞醫(yī)藥股份有限公司，批號(hào):10122534、11040134、11080834;規(guī)格:1 mg/mL);酒石酸布托啡諾對(duì)照品(江蘇恒瑞醫(yī)藥股份有限公司提供，含量:99.5%);乙腈為色譜純;磷酸二氫鉀(廣東汕頭西隴化工有限公司，分析純);水為新制注射用水;其他試劑均為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件 色譜柱:DIONEX-C18(150 mm×4.6 mm，5 μm);流動(dòng)相:乙腈 -0.05 mol/L 磷酸二氫鉀溶液(25∶75);流速:1.0 mL/min;柱溫:25 ℃;檢測(cè)波長(zhǎng):282 nm;進(jìn)樣量:20 μL。

2.2 系統(tǒng)適應(yīng)性試驗(yàn) 分別配制酒石酸布托啡諾對(duì)照品、樣品及空白對(duì)照溶液，分別將供試品、對(duì)照品及空白溶液按“2.1”項(xiàng)色譜條件進(jìn)樣測(cè)定，記錄色譜圖，酒石酸布托啡諾保留時(shí)間為8.8 min，理論塔板數(shù)按酒石酸布托啡諾色譜峰計(jì)大于4 000，見(jiàn)圖1。

2.3 溶液的制備

2.3.1 對(duì)照品溶液制備 精密稱取酒石酸布托啡諾對(duì)照品適量，用流動(dòng)相配制成濃度為1.02 mg/mL的對(duì)照品儲(chǔ)備液，置4℃冰箱中保存?zhèn)溆谩?/p>

2.3.2 樣品溶液的制備 精密吸取酒石酸布托啡諾注射液5.0～25 mL量瓶中，用流動(dòng)相溶解并稀釋至刻度，制成濃度約為0.2 mg/mL的樣品溶液，經(jīng)0.45 μm微孔濾膜過(guò)濾即得。

圖1 HPLC色譜圖

2.4 標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制 分別精密吸取儲(chǔ)備液0.25、0.5、1.0、2.0、3.0、5.0 mL 于 10 mL 量瓶中，用流動(dòng)相溶解并定容，混勻，各取20 μL進(jìn)樣測(cè)定。以峰面積(Y)為縱坐標(biāo)、濃度(C)為橫坐標(biāo)進(jìn)行線性回歸，酒石酸布托啡諾回歸方程為 Y=0.036 6 C+0.025(r=0.999 7，n=6)，結(jié)果表明，酒石酸布托啡諾在25.5～510.0 μg/mL濃度范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。

2.5 精密度試驗(yàn) 精密吸取標(biāo)準(zhǔn)曲線項(xiàng)下204.0 μg/mL酒石酸布托啡諾對(duì)照品溶液 20 μL，重復(fù)進(jìn)樣6次，測(cè)定峰面積，結(jié)果RSD為0.82%。

2.6 重復(fù)性試驗(yàn) 配制酒石酸布托啡諾樣品溶液6份，分別于上述色譜條件進(jìn)樣20 μL，測(cè)定峰面積。結(jié)果測(cè)得酒石酸布托啡諾含量的RSD為1.21%。

2.7 溶液穩(wěn)定性試驗(yàn) 配制濃度約為0.2 mg/mL的酒石酸布托啡諾樣品溶液，置于常溫下不避光保存，分別于0、0.5、1、2、4、6 h 在“2.1”項(xiàng)色譜條件進(jìn)樣20 μL，測(cè)定峰面積。結(jié)果酒石酸布托啡諾6次測(cè)定峰面積RSD為1.56%。說(shuō)明酒石酸布托啡諾樣品溶液在6 h內(nèi)穩(wěn)定。

2.8 加樣回收率實(shí)驗(yàn) 分別精密吸取已知含量的酒石酸布托啡諾注射液(批號(hào):10122534;含量:0.995 2 mg/mL)2.5 mL置25.0 mL量瓶中，共9份，分別加入高、中、低不同濃度酒石酸布托啡諾對(duì)照品溶液，用流動(dòng)相定容至刻度，混勻，用0.45 μm微孔濾膜過(guò)濾，取續(xù)濾液按“2.1”項(xiàng)色譜條件進(jìn)樣20 μL，測(cè)定，將酒石酸布托啡諾峰面積代入回歸方程計(jì)算濃度，并計(jì)算回收率，結(jié)果見(jiàn)表1。

表1 回收率試驗(yàn)結(jié)果(n=9)

2.9 含量測(cè)定 取3批酒石酸布托啡諾注射液，按“2.3.2”項(xiàng)方法制備供試品溶液，按“2.1”項(xiàng)色譜條件進(jìn)樣20 μL，計(jì)算樣品中酒石酸布托啡諾的含量，結(jié)果見(jiàn)表2。

表2 含量測(cè)定結(jié)果(n=3)

3 討論

HPLC法測(cè)定酒石酸布托啡諾含量方法的文獻(xiàn)報(bào)道較少。劉欽偉等［5］采用 AstecCyclobondⅡ手性柱，以甲醇-三乙胺醋酸鹽溶液(pH 6.80)(52∶48)為流動(dòng)相，對(duì)酒石酸布托啡諾進(jìn)行手性拆分，并檢測(cè)其中右旋異構(gòu)體含量。本方法雖能準(zhǔn)確定量，但要采用手性柱，且流動(dòng)相組成復(fù)雜，在普通實(shí)驗(yàn)室難以推廣應(yīng)用。本實(shí)驗(yàn)以乙腈-0.05 mol/L磷酸二氫鉀水溶液(25∶75)為流動(dòng)相，不用調(diào)pH值，流動(dòng)相組成與操作簡(jiǎn)單，酒石酸布托啡諾色譜峰與雜質(zhì)色譜峰能獲得很好的分離，符合測(cè)定要求。

［1］黃宇光，黃文起，李剛，等.酒石酸布托啡諾鎮(zhèn)痛專家共識(shí)［J］.臨床麻醉學(xué)雜志，2011，27(10):1028-1029.

［2］錢(qián)衛(wèi)，劉燕，杜學(xué)柯，等.布托啡諾用于術(shù)后病人自控靜脈鎮(zhèn)痛(PCIA)的 Meta分析［J］.中國(guó)疼痛醫(yī)學(xué)雜志，2011，17(2):97-101.

［3］王勝，王志萍，齊敦益.布托啡諾在術(shù)后鎮(zhèn)痛中的有效性及安全性研究［J］.徐州醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào)，2006，26(2):132-134.

［4］劉才堂，陳劍.布托啡諾對(duì)羅哌卡因肌間溝臂叢神經(jīng)阻滯的影響［J］.中國(guó)醫(yī)藥，2011，6(9):1113-1114.

［5］劉欽偉，馬仕珉，楊小明，等.HPLC法檢查酒石酸布托啡諾原料藥中右旋異構(gòu)體［J］.藥學(xué)進(jìn)展，2008，32(10):460-463.