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      鼠創(chuàng)傷性失血性休克對其細(xì)胞生物膜脂質(zhì)過氧化水平的影響*

      2013-10-17 13:31:32李大鵬時利民張永軍呂春雷王鳳嬌
      實用醫(yī)藥雜志 2013年11期
      關(guān)鍵詞:過氧化脂質(zhì)收縮壓

      李大鵬,時利民,張永軍,呂春雷,王鳳嬌

      為探討創(chuàng)傷性失血性休克(THS)對細(xì)胞生物膜脂質(zhì)過氧化水平的影響,筆者建立收縮壓下降曲線形成THS動物模型,選擇反映脂質(zhì)過氧化及自由基代謝的重要指標(biāo)超氧化物歧化酶(SOD)及丙二醛(MDA)為檢測指標(biāo),探討THS發(fā)生過程中失血量變化及對血漿SOD、MDA的影響,現(xiàn)報告如下。

      1 材料和方法

      1.1 實驗動物選擇 選擇健康雌性Wistar大鼠10只,SPF 級,體重480 ~530 g,平均(502.9±15.1)g,購于山東省魯抗醫(yī)藥股份有限公司[實驗動物生產(chǎn)許可證:SCXK(魯)2008-0002]。實驗動物在十萬級亞屏障環(huán)境中恒溫、恒濕條件下適應(yīng)性飼養(yǎng)1周。實驗前禁食12 h,自由飲水。

      1.2 動物模型制備

      1.2.1 動物麻醉與插管 10%水合氯醛進(jìn)行麻醉,按0.3 ml/100 g大鼠體質(zhì)量的劑量,腹腔注射方式。麻醉穩(wěn)定后,將大鼠仰臥固定在解剖臺上,右側(cè)腹股溝區(qū)備皮,消毒后仔細(xì)解剖出其股動脈,分離完畢后對血管進(jìn)行PE套管插管,并與八導(dǎo)生理記錄儀(美國Biopac公司)相連,連接完畢打開三通監(jiān)測大鼠收縮壓、舒張壓、平均血壓、心率等變化。選擇以上消毒方式,解剖出大鼠頸動脈,經(jīng)頸動脈插入PE套管并與消毒的定量收集管相連,放血及留取血標(biāo)本。

      實驗前插管注射肝素生理鹽水(2.5 U/ml)進(jìn)行肝素化抗凝。

      1.2.2 模型制備 實驗操作前穩(wěn)定大鼠30 min,檢測及記錄相關(guān)生理功能指標(biāo)基礎(chǔ)值(T1)。選擇頸動脈放血管路放血,大鼠收縮壓隨其放血量增加而快速下降,形成收縮壓下降曲線。記錄每只大鼠收縮壓降至基礎(chǔ)值3/4(T2)、基礎(chǔ)值2/3(T3)、基礎(chǔ)值1/2(T4)、基礎(chǔ)值 2/5(T5)、30 mmHg(1 mmHg=0.133 kPa;T6)、基礎(chǔ)值 1/5(T7)、10 mmHg(T8)共7個位置的收縮壓與相應(yīng)位置放血量。7個位置定量收集管留取血樣(-80℃保存待檢)檢測T-SOD及MDA。

      1.3 T-SOD及MDA檢測 主要檢測儀器設(shè)備包括:722型光柵分光光度計(上海第三分析儀器廠、波長550~532 nm、1 cm光徑比色杯)、5415R臺式冷凍小型離心機、5810R臺式冷凍高速離心機(德國Eppendorf公司)等。

      T-SOD及MDA測定試劑盒購自南京建成生物工程研究所。T-SOD檢驗為羥胺法,MDA檢驗為TBA法,操作方法及要求按說明書。

      2 結(jié)果

      10只大鼠在T2~T8共7個位置取得失血量、TSOD活力、MDA含量數(shù)據(jù),分別按T2~T8進(jìn)行分組,T2~T8各組失血量、T-SOD活力、MDA含量分別進(jìn)行比較。

      根據(jù)統(tǒng)計學(xué)散點圖,失血量、T-SOD活力、MDA含量之間不存在相關(guān)性。

      失血量組間比較:T2T3、T5T6、T7T8之間存在顯著性差異(P <0.05),T3T4、T4T5、T6T7之間無顯著性差異(P>0.05)。T-SOD活力組間比較:T4T5、T6T7之間存在顯著性差異(P <0.05),T2T3、T3T4、T5T6、T7T8之間無顯著性差異(P>0.05)。MDA含量組間比較:T3T4、T5T6、T7T8之間存在顯著性差異(P<0.05),T2T3、T4T5、T6T7之間無顯著性差異(P >0.05),見表 1。

      3 討論

      筆者選擇大鼠頸動脈插入PE套管的創(chuàng)傷手段致動脈損傷,用大量放血方式致大量、快速失血引起休克,建立THS模型。由于失血性低血容量休克主要病理生理改變是有效循環(huán)血容量急劇減少,導(dǎo)致組織低灌注、再灌注損傷等[1],加之血管收縮反應(yīng)、總血容量、凝血機制、血液攜氧能力、組織氧供等因素影響,失血量在THS發(fā)生過程中變化各不相同,而維持腦、腎、肝等重要臟器臨界灌注血壓值是其中重要因素。

      本文收縮壓下降曲線中,數(shù)據(jù)表明失血量在T2~T8各位置變化不相同,組間比較T2~T3有顯著性差異,相關(guān)位置失血量顯著減少,表明 T1~T2位置為THS發(fā)生基礎(chǔ);T3~T5無顯著性差異,相關(guān)位置失血量無顯著變化,提示進(jìn)入代償階段;T5~T6有顯著性差異,相關(guān)位置失血量顯著增加。

      表1 大鼠失血量、T-SOD活力及MDA含量±s)

      表1 大鼠失血量、T-SOD活力及MDA含量±s)

      T2 T3 T4 T5 T6 T7 T8失血量(ml) 0.67±0.38 0.31±0.170.56±0.54 0.45±0.220.91±0.44 0.65±0.43 1.18±0.67 T-SOD活力(U/ml)295.7±47.8 304.6±60.2 326.8±60.7 383.8±83.5 371.0±46.5 294.9±56.2 304.4±53.5 MDA(nmol/ml) 2.91±1.00 3.21±2.03 4.33±2.70 3.46±1.31 2.48±1.78 2.38±0.97 3.27±1.70

      THS發(fā)展可使組織低灌流時間持久,導(dǎo)致組織結(jié)構(gòu)損傷及功能障礙,其中關(guān)鍵是引起細(xì)胞生物膜上脂質(zhì)過氧化及破壞膜結(jié)構(gòu)與功能的機體自由基[2]。SOD是一種氧自由基清除劑,其活力可反映機體清除氧自由基的能力;MDA是脂質(zhì)過氧化反應(yīng)的最終產(chǎn)物,可反映氧自由基水平及間接反映細(xì)胞受自由基攻擊后脂質(zhì)過氧化的嚴(yán)重程度,MDA升高是機體氧自由基損傷標(biāo)志[3]。SOD和MDA變化可間接反映氧自由基在體內(nèi)生成和清除情況,以及對組織損傷程度和體內(nèi)抗氧化防御作用的功能情況[4-6]。

      本文數(shù)據(jù)表明:THS過程中隨大鼠收縮壓快速下降,T2~T3時T-SOD活力及MDA組間無顯著性差異,T3~T4時隨失血量增加MDA水平出現(xiàn)顯著升高并維持高水平,之后T4~T5時T-SOD活力也出現(xiàn)顯著升高并維持高水平,提高體內(nèi)清除氧自由基能力;T5~T6時失血量顯著增加,MDA組間存在顯著性差異,提示高水平MDA含量隨失血量增加出現(xiàn)顯著下降,之后T6~T7時T-SOD活力隨失血量增加也出現(xiàn)顯著下降,提示體內(nèi)清除氧自由基能力顯著下降,表明體內(nèi)大量蓄積自由基、抗氧化保護(hù)能力減弱,過量自由基促進(jìn)脂質(zhì)過氧化并導(dǎo)致機體生物膜損傷。

      本實驗可為THS發(fā)生及救治過程中控制脂質(zhì)過氧化、清除自由基、抑制組織細(xì)胞氧化損傷等研究提供有益的數(shù)據(jù)支持。

      [1]吳健鋒,管向東,陳 娟,等.早期乳酸清除率評估與失血性低血容量休克預(yù)后的研究[J].中華普通外科學(xué)文獻(xiàn)(電子版),2010,4(4):332 -335.

      [2]楊 偉,王宇鶴,楊永彥,等.高原移居者返平原后血液學(xué)及血中MDA和SOD的變化觀察[J].臨床醫(yī)學(xué),2012,7(18):1799-1800.

      [3]劉靈芝.丹紅注射液對自然衰老大鼠心臟、大腦組織SOD、MDA及GSH -Px的影響[J].中國實用神經(jīng)疾病雜志,2012,15(17):73-74.

      [4]張歆薇,劉海強,徐勝龍,等.次生作用對大鼠血漿SOD、MDA、NO水平的影響[J].現(xiàn)代生物醫(yī)學(xué)進(jìn)展,2012,12(18):3416 -3419.

      [5]楊明聰,范小平,王 春.低頻超聲對大鼠頰囊黏膜潰瘍組織SOD、MDA含量的影響[J].重慶醫(yī)學(xué),2012,41(26):2711-2713.

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