王 華，鄒阿玲，張光偉，肖 銳，牛志宏，張建軍，劉水濤，張 健，李 強

(1.克拉瑪依綠成農(nóng)業(yè)開發(fā)有限責(zé)任公司，新疆 克拉瑪依 834000;2.新疆動物胚胎工程技術(shù)研究中心，新疆 呼圖壁 831203)

關(guān)于超排供體母牛和移植受體母牛的季節(jié)性差異，均有不同的報道。但比較不同季節(jié)生產(chǎn)的冷凍胚胎的妊娠率方面的報道并不多見。

季節(jié)對母牛超排的影響主要表現(xiàn)在四季氣候的變化，取決于超排母牛所在的地理位置。在春季和冬季，超排后青年母牛的排卵數(shù)和有效胚胎數(shù)，明顯高于夏季和秋季[1]。Pradhan等(2008)報道，冬季比春、夏和秋季的回收卵數(shù)和有效胚胎數(shù)明顯增加。冬季和春季的可移植胚胎數(shù)比夏季和秋季多。雖然不同國家和地區(qū)有關(guān)季節(jié)對超排效果的報道不同，但都一致認(rèn)為，夏季由于熱應(yīng)激的影響，超排效果和有效胚胎數(shù)均較低。

季節(jié)對受體移植后的妊娠率也有不同程度的影響。Leon等[2]報道，夏季移植胚胎后，妊娠率最低(58.9%)，春季較高(68%)。他們認(rèn)為，夏季移植胚胎妊娠率低的部分原因是熱應(yīng)激的影響。熱應(yīng)激降低了母牛的發(fā)情持續(xù)期和發(fā)情強度，延長了發(fā)情周期，改變了激素分泌類型，增加了子宮溫度而降低了受胎率，這些都與環(huán)境溫度高有關(guān)。雖然前列腺素在四個季節(jié)都可以誘發(fā)有黃體母牛的發(fā)情，但處理后的繁殖力可能由于季節(jié)對黃體功能的影響，出現(xiàn)不同結(jié)果。

環(huán)境溫度對移植前胚胎有直接的影響。胚胎死亡率增加與移植前在37℃孵育時間長有關(guān)[3]。在加拿大阿爾伯特省，冬季非常寒冷，Shea等報道[4]，在12、1和2月移植胚胎，妊娠率最低，可能與移植前寒冷的環(huán)境有關(guān)。

本文的目的是驗證和比較，在不同季節(jié)生產(chǎn)的冷凍胚胎移植后妊娠率是否存在差異。

1 材料與方法

1.1 胚胎生產(chǎn)地點

新疆呼圖壁種牛場。

1.2 胚胎生產(chǎn)

在春夏秋冬四個不同季節(jié)，按常規(guī)FSH減量法(總劑量10 mg)進(jìn)行15～16月齡青年荷斯坦母牛的超排。母牛發(fā)情后按常規(guī)配種，第7天后回收胚胎[1]。在解剖顯微鏡下，將A級致密桑葚胚至擴張囊胚選出，放入0.25 mL細(xì)管準(zhǔn)備冷凍。冷凍方法為常規(guī)的逐步降溫法，冷凍液為PBS+乙二醇。

1.3 受體移植地點

新疆南北疆各地州土種母牛。

1.4 受體移植

將受體母牛進(jìn)行同期發(fā)情處理，發(fā)情后第7～8天或PG注射后第10天，經(jīng)直腸檢查母牛黃體和生殖道情況，合格受體用于胚胎移植。將不同季節(jié)生產(chǎn)的各發(fā)育階段的冷凍胚胎，采用一步細(xì)管法移植給受體母牛。私人農(nóng)牧戶的受體牛多以放牧為主，主要在春季和夏季進(jìn)行移植。一般是在注射PG后第10天，不觀察發(fā)情，直接經(jīng)直腸檢查后，選出合格的受體母牛移植胚胎。牛場的受體母牛是四季發(fā)情配種，秋季和冬季以牛場移植為主。在母牛發(fā)情后第7～8天移植胚胎。

2 結(jié)果

從表1可以看出，春、夏、秋、冬四個季節(jié)冷凍的胚胎，移植后妊娠率分別為49.21%、47.78%、54.31%和55.81%。從結(jié)果看，雖然春季和夏季妊娠率稍低一些(49.21%和47.78%)，但與其他季節(jié)差異不明顯。

表1 不同季節(jié)生產(chǎn)的凍胚的妊娠率

3 討論

本文比較了不同季節(jié)生產(chǎn)的冷凍胚胎的質(zhì)量。結(jié)果表明，四季生產(chǎn)的胚胎質(zhì)量差異不大，移植后的妊娠率接近。由于春季和夏季的受體母牛主要來自私人農(nóng)牧戶，胚胎移植后的妊娠率稍低一些。秋季和冬季的受體母牛主要來自牛場，母牛的飼養(yǎng)管理較好，并進(jìn)行了準(zhǔn)確的發(fā)情觀察，妊娠率要稍高一些。劉水濤等[5]報道，在農(nóng)牧戶和牛場，受體母牛的平均妊娠率分別為47.92%和52.76%。與本文的結(jié)果相近。

夏季熱應(yīng)激對超排反應(yīng)沒有不利影響，但增加了發(fā)育停滯和質(zhì)量差胚胎的比例。胚胎對母牛發(fā)情后最初7天的母體熱應(yīng)激是敏感的[4]。Edwards 等也報道[6]，胚胎發(fā)育期間的妊娠母牛，在熱應(yīng)激環(huán)境下，會造成胚胎損失。胚胎死亡的原因是在升高的溫度下，胚胎發(fā)育停止。因此，胚胎暴露在熱應(yīng)激環(huán)境下，升高了培養(yǎng)溫度，阻止或降低了后來的胚胎發(fā)育。胚胎死亡的部分原因是降低了蛋白質(zhì)合成。

Hansen認(rèn)為[7]，超排母牛配種后(1或2細(xì)胞期)，出現(xiàn)熱應(yīng)激，發(fā)育到囊胚期時，降低了第8天胚胎妊娠的比例。然而，當(dāng)熱應(yīng)激發(fā)生在配種后第3天(4～8細(xì)胞期)，第5天(16細(xì)胞到桑葚胚)和第7天(桑葚胚到囊胚期)時，熱應(yīng)激對第8天囊胚的妊娠比例沒有不利影響。熱應(yīng)激對發(fā)情后第7天接受胚胎移植的受體的影響，比此時發(fā)情配種的母牛要小，因為第7天后的胚胎已經(jīng)渡過了胚胎對熱應(yīng)激最敏感期。

李強等(未發(fā)表資料)發(fā)現(xiàn)，發(fā)情和配種時下雪，供體母牛的有效胚胎數(shù)和有效胚胎率明顯減少，但配種2天后下雪，對有效胚胎數(shù)影響不大。由此看來，在發(fā)情和配種時，對母牛的任何應(yīng)激反應(yīng)，都有可能降低供體母牛的有效胚胎率。筆者認(rèn)為，夏季母牛配種后妊娠率低，可能是受熱應(yīng)激影響，卵泡發(fā)育緩慢，從而推遲了排卵時間。因此，有些學(xué)者，在夏季用胚胎移植替代人工授精，或二者兼顧，大大提高了母牛的妊娠率。

我們的統(tǒng)計結(jié)果表明，四季生產(chǎn)的冷凍胚胎(發(fā)情后第7天回收的胚胎)，移植后的妊娠率差異不大。與Hansen[7]的結(jié)論一致。由此得出結(jié)論，季節(jié)對胚胎發(fā)育的影響，與胚胎日齡有關(guān)，日齡越小，影響越大。季節(jié)對冷凍后胚胎的質(zhì)量影響不大。

[1] 李強，張光偉，劉水濤，等.不同季節(jié)對荷斯坦青年母牛超排效果的影響 [J].中國奶牛，2013，1.

[2] Leon D，Weaver，John Galland.Factors Affecting Embryo Transfer Success in Recipient Heifers Under Field Conditions[J].J.Dairy Sci.1986，69，10，2711-2717.

[3] Renard J P，Y Heyman，J P Ozil.Importance of gestation losses after nonsurgical transfer of cultured and non-cultured bovine blastocysts.Vet.Rec.1980，107:152.

[4] B F Shea，R E Janzen，D P McDermand.Seasonal variation in response to stimulation and related embryo transfer procedures in Alberta over a nine year period，Theriogenology，1984，21(1)，186-195.

[5] 劉水濤，肖銳，李強，等.注射PG和觀察發(fā)情后的牛胚胎移植結(jié)果的比較 [J].黑龍江畜牧獸醫(yī)，2010，16.

[6] Edwards J L，Hansen P J.Differential responses of bovine oocytes and preimplantation embryos to heat shock.Mol.Reprod.Dev.1997，46:138-145.

[7] Hansen P J.Embryonic mortality in cattle from the embryo's perspective，J.Anim.Sci.，2002，80(E.Suppl.2):E33-E44.