白玉香，蘇 興

(1.天津達仁堂京萬紅藥業(yè)有限公司，天津 300112;2.天津和澤干細胞科技有限公司，天津 300308)

京萬紅軟膏由地榆、地黃、冰片、血竭、乳香、沒藥等30余味中藥制成，具有消腫活血，解毒止痛，去腐生肌的功效。用于治療輕度水、火燙傷，瘡瘍腫痛，創(chuàng)面潰爛等。該藥原質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)收載在衛(wèi)生部《藥品標(biāo)準(zhǔn)中藥成方制劑第十六冊》中，原標(biāo)準(zhǔn)中含量測定項為填充柱法測定冰片含量，使用三氯甲烷作溶劑提取測定，該溶劑有毒性。為提高該制劑質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的可控性，本試驗采用氣相色譜法測定方中龍腦的含量，現(xiàn)報道如下。

1 儀器與試藥

儀器:Agilent 6890N氣相色譜儀，ChemStation工作站，檢測器為FID，載氣為氮氣。色譜柱:HP－INNOWAX(30 m ×0.53 mm，1 μm)。乙酸乙酯(色譜純，天津市康科德科技有限公司)。龍腦對照品(中國藥品生物制品檢定所，批號110881－200706，供含量測定用)，京萬紅軟膏(天津達仁堂京萬紅藥業(yè)有限公司，批號 211761、211762、211763)。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件 聚乙二醇20000(PEG－20M)為固定相的毛細管柱(30 m ×0.53 mm，1 μm)，柱溫為 155℃。理論板數(shù)按正十八烷峰計算不低于10 000。

2.2 提取條件的考查 原標(biāo)準(zhǔn)中使用三氯甲烷作溶劑提取測定。三氯甲烷是一種神經(jīng)毒、肝毒和腎毒物。主要引起中樞神經(jīng)系統(tǒng)麻醉，肝和腎細胞壞死，對皮膚黏膜有刺激作用，可誘發(fā)細胞突變，具有高度的胚胎毒性和潛在的致畸性［1］。另外，樣品中基質(zhì)——蜂蠟等易溶于其中，污染色譜柱，故改用乙酸乙酯作為提取溶劑，兩種溶劑提取結(jié)果比較，三氯甲烷溶解度高，乙酸乙酯提取液渾濁。因此，實驗中采用兩種溶劑進行了對比。

取本品約1 g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，分別精密加入每1 ml含正十八烷0.25 mg的內(nèi)標(biāo)溶液20 ml(溶劑分別為三氯甲烷、乙酸乙酯)，密塞，搖勻，濾過，取續(xù)濾液測定，對比試驗結(jié)果表明，二者對含量測定的結(jié)果無影響(RSD為0.05%)，故選用乙酸乙酯作為提取溶劑，見表1。

表1 提取溶劑考查(n=2)

2.3 溶液的制備

2.3.1 內(nèi)標(biāo)溶液的制備 取正十八烷適量，精密稱定，加乙酸乙酯制成每1 ml含0.25 mg的溶液，即得。

2.3.2 對照品溶液的制備 取龍腦對照品適量，精密稱定，加內(nèi)標(biāo)溶液制成每1 ml含0.3 mg的溶液，即得。

2.3.3 供試品溶液的制備 取本品適量(相當(dāng)于含龍腦約6 mg)，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入內(nèi)標(biāo)溶液20 ml，密塞，搖勻，濾過，取續(xù)濾液即得。

2.3.4 陰性樣品溶液的制備 取缺龍腦的陰性供試品，再按“2.3.3”供試品溶液制備方法，制成陰性樣品溶液。結(jié)果顯示，陰性樣品無干擾。見圖1。

2.4 標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備 取龍腦對照品適量，精密稱定，加內(nèi)標(biāo)溶液(0.253 06 mg/ml)制成每 1 ml含1.0052 mg的溶液，分別精密吸取1、2、3、5 和 10 ml至10 ml量瓶中，加內(nèi)標(biāo)溶液(0.253 06 mg/ml)至刻度，搖勻，精密量取1 μl，注入氣相色譜儀，按“2.1”項下色譜條件分析，測定各自峰面積，以龍腦對照品進樣量(μg)為橫坐標(biāo)，龍腦與正十八烷峰面積的比值為縱坐標(biāo)，求得回歸方程:Y=3.522 X+0.0189(r=0.999 9)。結(jié)果表明龍腦進樣量在0.100 52～1.0052 μg范圍內(nèi)線性良好。

圖1 對照品(A)樣品(B)陰性樣品(C)氣相色譜圖

2.5 進樣精密度試驗 取同一批號(批號211761)樣品適量(折合成龍腦約6 mg)，取1份，精密稱定，按照“2.3.3”項下供試品溶液制備操作，按“2.1”項下色譜條件分析，連續(xù)進樣6次，測得樣品中龍腦含量為6.1282 mg/g，RSD 為 0.21%，符合要求。

2.6 重復(fù)性試驗 取同一批號(批號211761)樣品適量(折合成龍腦約6 mg)，取6份，精密稱定，按照“2.3.3”項下供試品溶液制備操作，按“2.1”項下色譜條件分析，測定樣品中龍腦含量。結(jié)果樣品中龍腦平均含量為6.1041 mg/g，RSD 為1.14%，重復(fù)性良好。

2.7 穩(wěn)定性試驗 此項試驗采用每隔2 h測定一次的方式進行試驗。取同一批號(批號211761)樣品適量(折合成龍腦約6 mg)，取1份，精密稱定，按照“2.3.3”項下供試品溶液制備操作，按“2.1”項下色譜條件分析，分別在0、2、4、6、8 及10 h測定樣品中龍腦含量，結(jié)果分別為 6.1365、6.1084、6.1365、6.1212、6.1225及6.1442 mg/g，RSD 為 0.21%，表明供試品溶液在10 h內(nèi)穩(wěn)定。

2.8 回收率試驗 取同一批號(批號211761)樣品適量(折合成龍腦約3 mg)，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入每1 ml含龍腦0.149 64 mg的內(nèi)標(biāo)溶液(0.253 06 mg/ml)20 ml，再按“2.3.3”項下供試品溶液制備操作，制得供回收用供試品溶液，按“2.1”項下色譜條件分析，計算回收率。結(jié)果龍腦平均回收率為100.12%，RSD 為2.01%，結(jié)果見表2，醫(yī)生能及時知道病人所用的是何種藥物以便進行搶救，雙盲試驗應(yīng)為每一個編盲號設(shè)置一份應(yīng)急信件。其信封上印有藥物臨床試驗的名稱、藥品編號和遇緊急情況下揭盲的規(guī)定，信件內(nèi)容包括該編號的受試者所分入的組別及所放置的具體的藥物名稱，不良事件發(fā)生后拆閱時應(yīng)記錄的處理方法、采用藥品的名稱、搶救科室、主要負責(zé)人及應(yīng)立即報告的單位、地址和聯(lián)系電話等。應(yīng)急信封應(yīng)密封，隨相應(yīng)編號的臨床研究用藥物發(fā)往各臨床試驗中心，由該中心負責(zé)保存，非必要時不得拆閱，如果拆閱，需注明拆閱者、中心負責(zé)人或臨床藥理基地負責(zé)人、拆閱日期、原因等，并在病例報告表中記錄。試驗結(jié)束后應(yīng)急信件應(yīng)退還申辦單位［6］。

采用計算機系統(tǒng)進行試驗藥品的管理，通常采用硬質(zhì)泡沫塑料襯墊包裝，外面采用條形碼標(biāo)簽，臨床試驗藥品所含有盲法試驗的特殊信息，打印到每一個試驗藥品的標(biāo)簽上并儲存在計算機里，以達到真正的盲法試驗?zāi)康模?］。

中藥安慰劑的制作是臨床試驗用藥品的難點，對于兒童臨床試驗，安慰劑對照的設(shè)計不但要從科學(xué)性、倫理性方面考慮，還應(yīng)從安慰劑制作水準(zhǔn)方面加以考慮，以保證試驗結(jié)果的可信性。隨著國家加大對中藥安慰劑研制的力度及計算機系統(tǒng)的應(yīng)用，將為兒科藥物研發(fā)逐步與國際接軌提供有力的支持。

1 張慧芝.安慰劑在醫(yī)學(xué)中的應(yīng)用［J］.藥物研究，2006，3(5):58

2 王雪峰，董丹，劉芳，等.中藥臨床試驗研究安慰劑制作初探［J］.遼寧中醫(yī)雜志，2003，30(12):966

3 唐旭東，卞立群，高蕊，等.中藥臨床試驗安慰劑制作探討［J］.中國中西醫(yī)結(jié)合雜志，2009，29(7):656

4 GB2760—2011.食品添加劑使用標(biāo)準(zhǔn)［S］.

5 關(guān)德祺，丁安偉.中藥臨床試驗對照使用的安慰劑生產(chǎn)工藝質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的研究［D］.南京:南京中醫(yī)藥大學(xué).2006:43－46

6 鄭筱萸.中藥新藥臨床研究指導(dǎo)原則(試行)［M］.中國醫(yī)藥科技出版社，2002:9－11

7 王國芳，謝琪，王曉菲.雙盲雙模擬臨床試驗的藥物準(zhǔn)備及編盲［J］.中藥新藥與臨床藥理，2005，16(4):308

8 Schneider R，Bagby J，Carlson R.Bar－code medication administration:a systems perspective［J］.Am J Health Syst Pharm，2008，65(23):2216