山東省日照市動物疫病預(yù)防控制中心 秦緒光 顧媛媛

西北農(nóng)林科技大學(xué)動物科技學(xué)院 劉福柱 牛竹葉＊

中草藥免疫活性物質(zhì)能增強機體免疫機能，提高動物抗應(yīng)激、抗疾病能力，改善動物生產(chǎn)性能，且具有無殘留、不易產(chǎn)生耐藥性等優(yōu)點（樸香淑和李德發(fā)，2002）。中草藥的化學(xué)成分極為復(fù)雜，含有豐富的維生素、礦物質(zhì)元素和蛋白質(zhì)，還含有苷類、揮發(fā)油、生物堿等。有些中草藥還含有甾醇類物質(zhì)，對內(nèi)分泌與生殖機能作用較強，能刺激畜禽的繁殖，提高畜禽的繁殖性能。本試驗根據(jù)中獸醫(yī)學(xué)理論選用溫腎壯陽、補氣益血、滋陰生津的中草藥及減緩應(yīng)激的中草藥組成復(fù)方飼喂種公雞，以期降低雞的應(yīng)激，減少淘汰，提高種公雞利用率，降低種雞場的飼養(yǎng)成本。同時也為中草藥飼料添加劑在種公雞日糧中的應(yīng)用提供理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 中草藥來源及復(fù)方組成 試驗用中草藥均購自楊凌中醫(yī)院，干燥后粉碎，過孔徑為1 mm的篩子，然后按照復(fù)方配比混勻裝袋，置于干燥處保存?zhèn)溆?。中草藥?fù)方組成：淫羊藿250 g，補骨脂、山茱萸、炒山藥各200 g，茯苓、牡丹皮、澤瀉、甘草各 120 g，肉桂、黃芪各 50 g（鄧楠，2001；謝仲權(quán)和牛樹琦，2001、1996）。

1.2 試驗動物 供試動物為50周齡體重約2.25 kg的尼克T種公雞，共80只，由西北農(nóng)林科技大學(xué)動物科技學(xué)院畜牧站種雞場提供。

1.3 試驗設(shè)計 供試雞隨機分成Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ組，每組16只，Ⅰ、Ⅱ組為對照組，分別飼喂基礎(chǔ)日糧和基礎(chǔ)日糧添加雞蛋；Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ為試驗組，在基礎(chǔ)日糧中分別添加1%、2%、3%中草藥復(fù)方添加劑。預(yù)飼期15 d，試驗期60 d?；A(chǔ)日糧組成及營養(yǎng)水平見表1。

表1 基礎(chǔ)日糧組成及營養(yǎng)水平

1.4 飼養(yǎng)管理 試驗雞采用二階梯單籠飼養(yǎng)，整個試驗期內(nèi)自由采食和飲水，其他飼養(yǎng)管理條件嚴格按照種雞場的要求進行。

1.5 血樣采集 在預(yù)飼期末和試驗期的第30天和第60天及試驗結(jié)束后第15天時，每組隨機選擇3只試雞，禁食12 h，供飲水，翅靜脈采血，每只雞采血3 mL，4000 r/min離心10 min，制備血清樣品，分裝于Eppendorf管中，于-20℃冰箱中保存?zhèn)溆谩?/p>

1.6 血清生化指標 血清總膽固醇（TC）、甘油三酯（TG3）、高密度脂蛋白（HDL）、低密度脂蛋白（LDL）、血清總蛋白（TP）、白蛋白（ALB）、球蛋白（GLOB）、白球蛋白比（A/G）、血尿素氮（BUN）、尿酸（UA）、的濃度以及谷丙轉(zhuǎn)氨酶（GPT）、谷草轉(zhuǎn)氨酶（GOT）的活性等血液生理生化指標，均送陜西省腫瘤醫(yī)院，采用日立7600血液生化自動分析儀測定。

1.7 數(shù)據(jù)處理 采用SPSS軟件進行單因子方差分析，平均數(shù)間的多重比較采用LSD法，數(shù)據(jù)均以“平均數(shù)±標準差”的形式表示。

2 結(jié)果

2.1 中草藥復(fù)方添加劑對種公雞血清蛋白的影響由表2可見，在種公雞日糧中添加中草藥復(fù)方添加劑能提高血清TP含量，各試驗組較對照Ⅰ組分別提高了16.68%、21.81%、16.51%，較對照Ⅱ組分別提高了2.09%、7.37%、1.94%，其中Ⅳ組與對照Ⅰ組相比，差異極顯著（P＜0.01），與對照Ⅱ組差異顯著 （P＜0.05），Ⅲ組和Ⅴ組與對照Ⅰ組相比，差異顯著（P＜0.05），但與對照Ⅱ組差異不顯著（P＞0.05）；血清球蛋白含量，各試驗組較對照Ⅰ組分別提高了22.86%、31.13%、20.99%，差異極顯著（P＜0.01），與對照Ⅱ組相比，各試驗組血清球蛋白含量均有所提高，但差異不顯著 （P＞0.05）；血清清蛋白含量，試驗組與對照組差異不顯著（P＞0.05）；A/G比值各試驗組均顯著低于對照Ⅰ組（P＜0.05），與對照Ⅱ組相比，差異不顯著（P ＞ 0.05）。

表2 中草藥復(fù)方添加劑對種公雞血清蛋白的影響

2.2 中草藥復(fù)方添加劑對種公雞其他血清生化指標的影響 由表3可知，試驗組種公雞血清BUN含量與對照組相比，呈下降趨勢，但組間差異不顯著（P＞0.05）；各試驗組種公雞血清HDL含量與對照組相比，呈上升趨勢，但組間差異不顯著（P＞0.05）；各試驗組GPT活性較對照Ⅰ組分別降低了27.21%、36.62%、24.68%，差異均極顯著（P＜0.01），與對照Ⅱ組相比，Ⅳ組GPT含量極顯著降低（P ＜ 0.01），Ⅲ和Ⅴ組顯著降低（P ＜ 0.05），各試驗組間相比，Ⅳ組GPT活性顯著低于Ⅲ和Ⅴ組（P ＜ 0.05），Ⅲ組和Ⅴ組差異不顯著（P ＞ 0.05）；各試驗組GOT活性均顯著低于對照組（P＜0.05），但各試驗組間相無顯著差異（P ＞ 0.05）；各試驗組UA含量較對照Ⅰ組分別降低了17.06%、23.05%、18.62%，較對照Ⅱ組分別降低了18.54%、24.42%、20.08%，差異均達極顯著水平 （P＜0.01）；各試驗組TG3含量顯著低于對照組 （P＜0.05），但試驗組間差異不顯著（P ＞ 0.05）；各試驗組TC含量均不同程度下降，其中Ⅳ組血清TC含量分別顯著低于Ⅰ和Ⅱ組17.19%和22.06%（P＜0.05），Ⅲ和Ⅴ組TC含量與對照組差異不顯著（P＞ 0.05），各試驗組間無顯著差異（P ＞ 0.05）；Ⅳ組公雞血清LDL顯著高于Ⅰ組和Ⅱ組 （P＜0.05），各試驗組間無顯著差異（P＞0.05）。

3 討論

表3 中草藥復(fù)方添加劑對種公雞血清其他生化指標的影響

3.1 中草藥添加劑對種公雞血清蛋白含量的影響本試驗的結(jié)果表明，試驗Ⅲ和Ⅴ組血清總蛋白含量顯著高于對照Ⅰ組，Ⅳ組極顯著高于Ⅰ組；各試驗組球蛋白含量極顯著高于對照Ⅰ組，并且試驗組A/G與對照組相比有降低的趨勢，說明飼喂含中草藥添加劑日糧可使血清蛋白含量與球蛋白含量保持較高的水平，提高了種公雞的免疫能力，降低了繁殖后期種公雞體內(nèi)的應(yīng)激。同時，血清白蛋白作為脂肪酸轉(zhuǎn)運的載體，其水平的高低是脂類分解情況的指標，這與試驗組種公雞血清中的甘油三酯和總膽固醇與對照組相比，都呈現(xiàn)出下降的趨勢相吻合。劉思當?shù)?（2003）、王曉霞等（2000）、劉春燕等（2000）研究均表明，在應(yīng)激情況下，血清中總蛋白、白蛋白、球蛋白的含量均下降，剛開始呈逐漸下降的趨勢，差異并不顯著；隨著應(yīng)激的持續(xù)，血清蛋白下降明顯，差異顯著。其機制有可能是種公雞的生產(chǎn)利用使雞體長期處于應(yīng)激狀態(tài)下，而中草藥中的某些活性成分有降低應(yīng)激，增強了機體對蛋白質(zhì)的利用程度，蛋白質(zhì)代謝活動加強，血清中總蛋白、白蛋白、球蛋白含量增加。

3.2 中草藥添加劑對種公雞谷丙轉(zhuǎn)氨酶、谷草轉(zhuǎn)氨酶活性的影響 正常情況下，細胞內(nèi)酶由于細胞膜的屏障作用不易逸出，僅由于細胞不斷更新而少量釋放入血。只有當細胞膜受到損傷，細胞膜的通透性升高，細胞內(nèi)酶釋放入血的速度大大提高，血清酶活性才明顯升高。王曉霞等（2000）報道，應(yīng)激時，蛋雞血清GPT水平高于正常值，而添加微營養(yǎng)素（Zn、Se、Cu、維生素 C）后，血清酶水平顯著下降。劉思當?shù)龋?003）研究表明，應(yīng)激使肉仔雞血清GPT顯著升高。劉春燕等（2000）報道，高溫應(yīng)激使蛋雞血清GOT的活性持續(xù)極顯著升高，GPT先升高后后下降。本試驗中，各試驗組種公雞血清中GPT活性顯著低于對照Ⅰ組 （P＜0.01或P＜0.05）；試驗組GOT活性顯著低于對照組（P＜0.05），結(jié)果產(chǎn)生的原因提高可能是因為中草藥添加劑有利于促進機體蛋白質(zhì)的合成，提高了機體氨基酸的利用程度，從而使機體組織細胞的蛋白質(zhì)合成代謝加強。說明該中草藥添加劑不會給機體代謝帶來不良影響，反而加強了肝細胞進行物質(zhì)代謝的功能，起到了保護肝臟的作用。

正常時，GPT主要存在于組織細胞內(nèi)，以肝細胞含量最多，心肌細胞中含量次之，只有極少數(shù)釋放入血，所以血液中此酶活力很低。當肝臟、心肌病變、細胞壞死或通透性增加時，此酶即釋放于血清中，血清中GPT活性升高，說明某些原因，如應(yīng)激等造成了肝臟的損傷，所以測定血液中此酶的含量可作為診斷、鑒別診斷及預(yù)后觀察的依據(jù)（上海市醫(yī)學(xué)化驗所，1979）。GOT是催化谷氨酸與草酞乙酸在心肌內(nèi)轉(zhuǎn)變成α－酮戊二酸和天冬氨酸的關(guān)鍵酶。GPT和GOT同時也能反映機體蛋白質(zhì)合成和分解代謝的狀況（Henry，1988），若機體處于應(yīng)激狀態(tài)，基礎(chǔ)代謝降低，采食量減少，使機體可利用的營養(yǎng)成分減少，細胞內(nèi)代謝所需的能量主要靠分解代謝來提供，在動員機體儲備氧化供能過程中，各種參與分解代謝的酶（GPT、GOT）的活性得到增強，但日糧中添加中草藥復(fù)方添加劑降低GPT和GOT活性，這與其生產(chǎn)性能的提高是一致的。

3.3 中草藥添加劑對種公雞血清尿酸、尿素氮濃度的影響 血清尿素氮和尿酸水平是反映機體的營養(yǎng)狀況及蛋白質(zhì)代謝水平的指標。血清中尿素氮含量越低，說明機體蛋白質(zhì)代謝越好。通常機體血漿代謝庫中尿素氮濃度比較穩(wěn)定，機體內(nèi)限制性氨基酸不足或氨基酸不平衡會使血液尿素氮濃度提高（Chikhou等，1993）。尿酸作為禽類氨基酸代謝的最終產(chǎn)物，主要由腎臟排出，當腎功能不全時，尿酸排出受阻，血中尿酸含量升高，因此血清中尿酸含量常作為檢測禽類腎功能的重要依據(jù)（賀普霄，1997）。 Scott（1982）研究認為，尿酸是核酸中嘌呤分解代謝的最終產(chǎn)物，血中尿酸直接反映體內(nèi)蛋白質(zhì)分解代謝水平。尿素氮盡管不是禽類蛋白質(zhì)代謝的主要產(chǎn)物，但也通常作為一個衡量指標，其代謝機制與尿酸相同。尿素氮占血清非蛋白氮（NPN）的50%，一般認為，尿酸氮含量與蛋白質(zhì)的利用率之間有顯著的負相關(guān)，但當肝中蛋白質(zhì)代謝和腎排泄功能正常時，其在血清中的含量維持在一定范圍內(nèi)（趙國先等，1995）。Malmlof（1988）報道，血漿尿素氮可以較準確的反映動物體內(nèi)蛋白質(zhì)的代謝情況和日糧氨基酸的平衡情況，可作為蛋白沉積的一個指標，血漿中尿素氮的水平可反映動物蛋白質(zhì)代謝狀況，蛋白質(zhì)代謝良好時，血漿尿素氮濃度降低。

本試驗研究結(jié)果表明，中草藥的添加對公雞血清尿素氮有降低作用，但未達顯著水平 （P＞0.05）。肝臟是體內(nèi)生成尿素的最主要部位，血液中尿素絕大多數(shù)是由肝臟經(jīng)鳥氨酸循環(huán)從氨基酸中所脫下的氨生成的，通過血液循環(huán)至腎臟排出體外，肝臟中尿素生成的減少可為其他組織（如肌肉）的蛋白沉積提供充分的氨基酸等原材料，這樣有利于蛋白在體內(nèi)的沉積，這與本試驗中血清總蛋白有增高的趨勢相吻合。同時，可以推測中草藥中有效活性成分可抑制蛋白質(zhì)分解，減少氨的生成；而尿酸含量則顯著降低，一方面，說明蛋白質(zhì)代謝終產(chǎn)物排泄正常，給種公雞飼喂中草藥復(fù)方添加劑不僅不會損害腎臟，反而有保護腎臟，增強腎臟排泄功能的作用；另一方面，尿酸又是禽類蛋白質(zhì)分解的產(chǎn)物，血液中尿酸水平降低，說明蛋白質(zhì)的分解代謝降低，增加了蛋白質(zhì)在體內(nèi)的利用。

3.4 中草藥添加劑對種公雞血清脂類代謝的影響血清TG3主要有兩個來源，一是小腸食物消化吸收而來，并以乳糜微粒的形式經(jīng)淋巴管進入血液；二是在肝臟利用葡萄糖和脂肪酸形成的TG3，以VLDL的形式從肝臟釋放至血液。乳糜微粒和VLDL在外周組織脂蛋白脂肪酶的催化下分解，釋放TG3。中草藥添加劑中的纖維素等物質(zhì)可能起到阻抑日糧中的TG3消化吸收作用；人醫(yī)臨床研究中，治療高甘油三酯血癥常用的藥物有貝丁酸類、煙酸類、洛伐他汀等，本試驗所用中草藥中是否含有這些成分，或者相似作用的其他成分，抑制肝臟內(nèi)合成甘油三酯酶的活性，目前還不清楚，有待進一步研究。

血清LDL主要通過肝臟LDL受體途徑清除，因此肝臟中LDL受體決定了血清LDL的水平；LDL受體含量的高低決定于受體基因轉(zhuǎn)錄和翻譯兩個水平。中草藥添加劑有降低血清LDL的趨勢，其機制可能是中草藥有效成分促進LDL受體表達，加速脂蛋白的分解，由于LDL受體的這種降解作用，使血液中LDL減少。說明中草藥對基因表達有影響作用，這種作用有可能是對脂蛋白受體具有翻譯和翻譯后水平的調(diào)節(jié)作用，從而達到調(diào)控血脂水平的目的。

中草藥添加劑對HDL有升高的作用，可能由于中草藥活性成分提高了卵磷脂膽固醇?；D(zhuǎn)移酶（LACT）活性，LACT參與高密度脂蛋白的合成代謝，影響HDL的形成。HDL是由肝臟及小腸黏膜細胞合成，是唯一將膽固醇從外周組織運回肝臟清除至體外而產(chǎn)生抗動脈硬化作用的脂蛋白，現(xiàn)在人們通過一些藥物提高HDL水平，如煙酸類、纖維類、雌二醇、他汀類等，本試驗所用中草藥是否含有這些物質(zhì)及類似有效成分及其他提高HDL的有效成分，有待于進一步研究。

本試驗中，中草藥添加組公雞血清中的甘油三酯含量與對照組相比均顯著下降（P＜0.05），Ⅳ組總膽固醇含量顯著低于對照組（P＜0.05），Ⅲ和Ⅴ組與對照組相比有所下降，但差異不顯著（P＞0.05），試驗組與對照組相比則有下降的趨勢，并且Ⅳ組顯著低于Ⅰ組（P＜0.05），Ⅲ和Ⅴ組與對照組相比差異均不顯著（P＞0.05）；而HDL與對照組相比則呈上升的趨勢，但差異不顯著（P＞0.05）。說明本中草藥添加劑可以調(diào)節(jié)種公雞脂質(zhì)代謝，影響機體脂肪的合成代謝，降低脂肪在體內(nèi)的沉積，可以防止或降低雞脂肪肝的發(fā)生。

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