何云松，龍漢武，潘高潮，鄒方倫＊＊

(1.貴州省生物研究所，貴州 貴陽 550009;2.貴州省山地資源研究所，貴州 貴陽 550002)

紅托竹蓀Dictyophora rubrovolota Zang，是藏穆先生1976年在《云南植物研究》發(fā)表的一個新種。在自然環(huán)境生態(tài)條件下，竹蓀主要靠孢子繁殖，孢子借助于昆蟲的傳播，在適宜的條件下，孢子萌發(fā)形成菌絲體，菌絲體通過營養(yǎng)生長達(dá)到生理成熟后最終形成子實(shí)體。紅托竹蓀在貴州漫長的栽培過程中，出現(xiàn)了嚴(yán)重的菌種退化，導(dǎo)致上千畝的紅托竹蓀減產(chǎn)甚至絕收。因此培育優(yōu)良紅托竹蓀菌種是人工栽培成功的關(guān)鍵，要培育優(yōu)良菌種就必需了解紅托竹蓀生長所需的環(huán)境條件和生長基物，只有了解掌握了紅托竹蓀的生態(tài)習(xí)性[1]，才能培育出優(yōu)良的菌種并在適宜的低溫條件下進(jìn)行保藏。本項(xiàng)目從紅托竹蓀一級菌種培養(yǎng)基的配方篩選、菌種分離培養(yǎng);二級、三級菌種的培養(yǎng)基的配方篩選、菌種保藏的適宜溫度、保藏菌種的菌絲萌發(fā)試驗(yàn)、菌種的轉(zhuǎn)接擴(kuò)大培養(yǎng)及栽培岀菇等方面展開研究。

1 紅托竹蓀的菌種制作

1.1 紅托竹蓀一級菌種培養(yǎng)基的配方及制備

培養(yǎng)基配方:鮮松針 (馬尾松松針)100 g、馬鈴薯 (去皮)200 g、蔗糖20 g、瓊脂 18 g～20 g、H2O 1 000 mL，pH 7.5～8.0。

培養(yǎng)基的制備:先將馬鈴薯去皮，沖洗，取200 g，切成薄片，加水500 mL，溫火煮沸至薯塊酥而不爛為止，然后4層濕潤沙布過濾，取濾液備用。將松針100 g放入500 mL水中煮沸15 min，用4層濕潤的紗布過濾，取濾液備用。

把馬鈴薯浸出液與松針浸出液合并，補(bǔ)足1 000 mL，在合并溶液中加瓊脂20 g、蔗糖20 g，煮沸，調(diào)節(jié)pH值至pH 7.5～8.0。趁熱分裝試管后進(jìn)行消毒滅菌，高壓蒸汽滅菌1 kg·cm－2，121℃滅菌40 min后，取出割成斜面?zhèn)溆谩?/p>

1.2 紅托竹蓀一級菌種的分離

大型真菌菌種常用的分離方法有孢子分離法、組織分離法和菇木分離法3種。紅托竹蓀菌種的分離以組織分離為主，選取5成～6成熟未開的竹蓀菌蛋 (以野生資源采集的竹蓀菌蛋為最佳)作為分離竹蓀菌種用，將竹蓀菌蛋去掉泥沙，放入無菌工作臺內(nèi)，用75%酒精棉球擦拭竹蓀菌蛋進(jìn)行表面消毒。用解剖刀從竹蓀菌蛋中部切開，把竹蓀菌蛋切成兩半，把切開的竹蓀菌蛋中部白色部分 (即竹蓀菌柄與菌裙部分)挑取一小塊組織，移接到斜面培養(yǎng)基上，置于23℃左右培養(yǎng)，經(jīng)過5 d～7 d培養(yǎng)后，可看到組織塊上產(chǎn)生白色絨毛狀菌絲，待菌絲長滿斜面試管后，再經(jīng)過一次轉(zhuǎn)管擴(kuò)大培養(yǎng)，即得竹蓀母種。

1.3 二級、三級菌種的配方及制備

1.3.1 枝條菌種培養(yǎng)基配方

樹枝以直徑0.5 cm～1 cm的毛栗、山楊柳最為適宜 (圖1)。配方為樹枝條75%、米糠 (麥麩)15%、黃豆粉5%、白糖2%、石膏1.5%、過磷酸鈣1.5%，pH值為8.0～8.5，H2O適量。

枝條先用清水浸泡24 h，以枝條浸透水分為宜。

圖1 保藏菌種原料樹枝條

1.3.2 配料

將樹枝條、米糠 (或麥麩)、黃豆粉、白糖、石膏、過磷酸鈣分別充分?jǐn)嚢杈鶆颉：空{(diào)至60%～65%，pH 7.5～8，若酸度過高，可用石灰水調(diào)節(jié)。

1.3.3 裝瓶

采用500 mL標(biāo)準(zhǔn)三角瓶，將配好的培養(yǎng)料裝入三角瓶內(nèi)，邊裝邊搖動，盡量減少空隙，料裝至三角瓶高度的3/4為宜，清洗三角瓶外表面和瓶口，塞上棉塞 (圖2)。

圖2 裝料完畢的三角瓶

1.3.4 滅菌

將裝好料的三角瓶放入滅菌鍋內(nèi)，以1.5 kg·m－2壓力滅菌1.5 h或在常壓下滅菌8 h，悶2 h。滅菌完成后，趁熱放入接種工作臺或接種室備用。

1.3.5 接種

待料溫降至30℃以下時，無菌操作，向三角瓶內(nèi)接入菌種，為防止菌種干縮，接種時應(yīng)盡量將菌種埋入培養(yǎng)料內(nèi)。

1.3.6 培養(yǎng)

將接種后的三角瓶放入培養(yǎng)箱或培養(yǎng)室內(nèi)培養(yǎng)，溫度保持在22℃～24℃。待三角瓶內(nèi)培養(yǎng)料長滿菌絲后，將其放在4℃的溫度下保藏4年 (圖3)。

圖3 保藏了4年的三角瓶菌種

1.4 保藏4年的紅托竹蓀菌種萌發(fā)試驗(yàn)

將保藏4年的紅托竹蓀枝條菌種切開放入培養(yǎng)皿內(nèi)，并在培養(yǎng)皿內(nèi)放入吸水飽和的脫脂棉 (圖4)，放入溫度24℃的培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)，保藏菌種培養(yǎng)20 d后，菌絲萌發(fā)，生長狀況良好 (圖5)。

圖4 保藏4年的枝條菌種

圖5 培養(yǎng)20 d的保藏菌種

1.5 紅托竹蓀保藏菌種的轉(zhuǎn)接擴(kuò)大培養(yǎng)

紅托竹蓀保藏菌種通過菌絲萌發(fā)試驗(yàn)證明菌種活性良好，需要進(jìn)行菌種轉(zhuǎn)接擴(kuò)大培養(yǎng)，并進(jìn)行岀菇試驗(yàn)，才能證明該菌種是優(yōu)良菌種。

1.5.1 木屑麥麩培養(yǎng)基

木屑70%、麥麩或米糠20%、黃豆粉5%、白糖2%、石膏1.5%、過磷酸鈣1.5%，pH值為8.0～8.5，H2O適量。

將5.1配方原料充分?jǐn)嚢杈鶆?。含水量調(diào)至60%～65%，pH8.0～8.5，若酸度過高，可用石灰水調(diào)節(jié)，原料裝瓶、滅菌、接種、培養(yǎng)均參照以上3.3、3.4、3.5、3.6的操作。

1.5.2 栽培岀菇

栽培原料以玉米芯和黃豆桿為主要原料進(jìn)行栽培，原料用石灰水浸泡12 h后，用清水沖洗至pH為8.5即可播種覆土栽培。后期的菌絲生長管理、岀菇、采收、產(chǎn)品加工等參照竹蓀栽培[2]。紅托竹蓀保藏菌種栽培岀菇情況見圖6。

圖6 紅托竹蓀保藏菌種栽培岀菇

1.6 結(jié)果與討論

紅托竹蓀與其它竹蓀品種比較，其特點(diǎn)是竹蓀菌蛋、菌索以及菌絲受傷后變紫色，這是紅托竹蓀與其它竹蓀的主要區(qū)別。根據(jù)栽培岀菇情況圖6顯示，采用枝條保藏紅托竹蓀菌種保藏4年后，其紅托竹蓀原有的菌托和菌索受傷變紫色的性狀仍然保持，為紅托竹蓀保藏菌種采用秸稈栽培推廣栽培提供了堅實(shí)的基礎(chǔ)和依據(jù)。有關(guān)紅托竹蓀保藏菌種栽培的竹蓀子實(shí)體氨基酸含量及營養(yǎng)成分的測定有待進(jìn)一步研究。

[1]鄒方倫.貴州竹蓀資源及生態(tài)的研究 [J].貴州農(nóng)業(yè)科學(xué)，1994(3):43－47.

[2]鄒方倫，宋培浪，王波，等.貴州特色菌物和珍稀菌類的栽培與馴化研究[M].貴陽:貴州科技出版社，2007.