王國(guó)棟 陳 蓉 程家球 李明杰 陳 楠 章小小 金 鈴

(江蘇省南京市紅山森林動(dòng)物園獸醫(yī)院，江蘇南京 210028)

袋鼠是一種較為原始的哺乳動(dòng)物，具有較高的觀賞價(jià)值。球蟲病給動(dòng)物園袋鼠養(yǎng)殖帶來(lái)了較大的危害。2012年9月，南京紅山動(dòng)物園新引進(jìn)的10只袋鼠糞便中發(fā)現(xiàn)球蟲蟲卵，不久后死亡一只袋鼠。經(jīng)實(shí)驗(yàn)室檢查，確診為科貢氏艾美爾球蟲感染。

1 病例報(bào)道

2012年9月，該動(dòng)物園引進(jìn)10只袋鼠(5只赤袋鼠、5只灰袋鼠)，隔離飼養(yǎng)后，在糞便中發(fā)現(xiàn)球蟲。其中，1只袋鼠在第1 d發(fā)現(xiàn)血便后，第2 d晚上死亡。剖檢可見(jiàn)，從十二指腸起整個(gè)腸道都嚴(yán)重出血，并以十二指腸段最為嚴(yán)重；腸壁呈現(xiàn)許多菊花樣結(jié)節(jié)，刮取腸道內(nèi)容物觸片可見(jiàn)球蟲卵囊和疑似裂殖子。該群發(fā)病率為100%(10/10只)，死亡率為10%(1/10只)。全群立即投喂復(fù)方新諾明，并在飲水中投喂球蟲凈。對(duì)于拉稀嚴(yán)重的袋鼠，進(jìn)行輸液對(duì)癥治療。每天對(duì)籠舍地面、食槽、水槽等場(chǎng)所設(shè)施進(jìn)行火焰消毒。每天對(duì)袋鼠糞便進(jìn)行球蟲鏡檢，經(jīng)過(guò)7 d的療程，病情得到基本控制。20 d后，糞便檢查不到球蟲卵囊。

2 實(shí)驗(yàn)室檢查

2.1 細(xì)菌分離

無(wú)菌采集病死袋鼠的肝臟、心臟接種至血平板中，37℃培養(yǎng)24 h，均未見(jiàn)細(xì)菌。

2.2 糞便檢查

對(duì)袋鼠糞便采用直接涂片鏡檢，發(fā)現(xiàn)許多淡黃色、長(zhǎng)卵圓形、接近微卵孔端其壁變薄的球蟲未孢子化卵囊。測(cè)量約50個(gè)未孢子化卵囊，大小約32.5～40.5μm×19～21.3μm(平均33.2 μm×19.3μm)(見(jiàn)圖1)。同時(shí)，可見(jiàn)大量卵圓形的孢子化卵囊，大小平均約33.7μm×19.22μm，均有4個(gè)子孢子，平均大小約9.75μm×8.6μm(見(jiàn)圖2)。根據(jù)形態(tài)學(xué)觀察，判定該球蟲為科黃氏艾美爾球蟲。

圖1 袋鼠球蟲未孢子化卵囊(40×)

圖2 袋鼠球蟲孢子化卵囊(40×)

2.3 袋鼠球蟲卵囊分離收集

將采集的糞便，加水淘洗，先后過(guò)40目、200目尼龍篩。濾液進(jìn)行初步的離心沉淀(3 000 r/min，離心5min)棄去上清液。沉淀加入2.5%重鉻酸鉀液，28℃恒溫箱培養(yǎng)，期間每日對(duì)培養(yǎng)液輕輕攪拌3～5次，并觀察卵囊孢子化情況，當(dāng)有80%以上的卵囊發(fā)育為孢子化卵囊時(shí)，停止培養(yǎng)，收集卵囊保存?zhèn)溆谩?/p>

2.4 最短孢子化時(shí)間的測(cè)定

將腸道卵囊收集液置于直徑為14.5cm的培養(yǎng)皿中，液面高度1cm，卵囊濃度約為30×104個(gè)/mL，記錄培養(yǎng)溫度和開始培養(yǎng)的時(shí)間，于第24h、48h、96h分別檢查卵囊孢子化率情況，自開始培養(yǎng)的時(shí)間起至鏡檢發(fā)現(xiàn)折光體出現(xiàn)，以及4個(gè)孢子囊完全分開所需的時(shí)間即為最短孢子化時(shí)間。通過(guò)觀察，發(fā)現(xiàn)該球蟲最短孢子化時(shí)間為48 h(見(jiàn)圖3和圖4)。

圖3 24h的卵囊(40×)

圖4 48h的卵囊(40×)

2.5 寄生部位

刮取病死袋鼠的腸道內(nèi)容物，涂片鏡檢，發(fā)現(xiàn)從十二指腸起整個(gè)腸道均有球蟲卵囊和裂殖子。腸壁呈現(xiàn)許多菊花樣結(jié)節(jié)，以十二指腸最為嚴(yán)重。該球蟲卵囊主要寄生部位為十二指腸。

3 討論

1898年，Barker首次報(bào)道了艾美耳球蟲感染袋鼠[1]。之后，J. P. Dubey、Adam W. Stern等作者報(bào)道了在袋鼠腸道切片中發(fā)現(xiàn)艾美耳球蟲[2、3]。但是只能證明球蟲可以感染袋鼠，卻無(wú)法證明球蟲能引起袋鼠的臨床癥狀。2010年，D.F. Twomey報(bào)道了腹瀉紅頸大袋鼠的柔嫩艾美耳球蟲，并對(duì)其卵囊、孢子囊進(jìn)行了測(cè)量，首次將柔嫩艾美耳球蟲與袋鼠的致病性相聯(lián)系[4]。與之相比，國(guó)內(nèi)動(dòng)物園袋鼠患球蟲病的報(bào)道次數(shù)較多，有學(xué)者認(rèn)為與袋鼠密集飼養(yǎng)而導(dǎo)致小環(huán)境中球蟲卵囊大量富集引起臨床癥狀有關(guān)[5]。1998年，上海某野生動(dòng)物園報(bào)道新引進(jìn)的成年紅頸袋鼠暴發(fā)威爾坎尼亞艾美耳球蟲病，并引起腹瀉等癥狀，發(fā)病率61.3%(38/62)，病死率為39.2%(15/38)，損失較為嚴(yán)重[6]。此次，該群袋鼠具有典型的腹瀉癥狀，排除細(xì)菌感染，球蟲的蟲種鑒定也與國(guó)內(nèi)報(bào)道存在差異。由于袋鼠非常珍貴，無(wú)法通過(guò)回歸實(shí)驗(yàn)證明該球蟲的致病性，但從臨床癥狀及病原的單一性，可以推測(cè)該球蟲具有一定的致病性。這是首次國(guó)內(nèi)報(bào)道袋鼠的致病性科貢氏艾美爾球蟲，給動(dòng)物園獸醫(yī)工作者敲響了警鐘。

通過(guò)對(duì)蟲卵的收集，觀察球蟲不同時(shí)期的形態(tài)，經(jīng)南京農(nóng)業(yè)大學(xué)寄生蟲教研室鑒定，該球蟲為科貢氏艾美爾球蟲。本文留下大量袋鼠球蟲不同時(shí)期的顯微圖片，也初步對(duì)其生物學(xué)特性進(jìn)行研究。結(jié)果發(fā)現(xiàn)宿主可為灰袋鼠和赤袋鼠，卵囊主要寄生部位為十二指腸，其最短孢子化時(shí)間為48 h。同時(shí)，該球蟲比重較大，漂浮法并不適合該球蟲的收集，而沉淀法能夠收集到較多的蟲卵。這些資料填補(bǔ)了國(guó)內(nèi)袋鼠球蟲生物學(xué)信息的空白，為進(jìn)一步防治袋鼠球蟲病奠定基礎(chǔ)。

本次暴發(fā)的袋鼠球蟲病，發(fā)病起因與之前國(guó)內(nèi)的報(bào)道相似，均由于引進(jìn)袋鼠時(shí)環(huán)境改變導(dǎo)致其機(jī)體抵抗力下降而引起。在野外，袋鼠多為球蟲感染，并不表現(xiàn)臨床癥狀，只有當(dāng)環(huán)境改變、長(zhǎng)途運(yùn)輸、飼養(yǎng)密度增加等因素刺激下蟲卵富集，才導(dǎo)致臨床癥狀的表現(xiàn)。因此，當(dāng)引進(jìn)袋鼠時(shí)，要適當(dāng)延長(zhǎng)隔離時(shí)間，并對(duì)其糞便進(jìn)行檢查，確保無(wú)球蟲感染。同時(shí)，可以適當(dāng)進(jìn)行預(yù)防性用藥。

本病例由于發(fā)現(xiàn)及時(shí)，確診早和及時(shí)治療，很快得到了控制，減少了經(jīng)濟(jì)損失。球蟲主要通過(guò)糞口途徑傳播，又因大多數(shù)消毒水對(duì)蟲卵的殺傷力不強(qiáng)，因此及時(shí)清理糞便、火焰消毒食槽、水槽和地面，可以較好的切斷傳播途徑。袋鼠球蟲病給動(dòng)物園造成了較大的經(jīng)濟(jì)損失，應(yīng)當(dāng)引起獸醫(yī)工作者的重視。

[1]Barker，I. K.，O’Callaghan，M. G. ＆ Beveridge，I. Host-parasite associationsof Eimeria spp(Apicomplexa：Eimeriidae)in kangaroos and wallabies of the genus Macropus(Marsupialia：Macropodidae)[J]. International Journal for Parasitology，1989，19：241-263.

[2]J. P. Dubey，William J. Hartley.Steatitis in a red kangaroo(Macropusrufus)associated with a coccidia-like protozoon[J]. J Vet Diagn Invest，4：93-96(1992).

[3]Adam W. Stern .A retrospective study of disease in captive kangaroos from Oklahoma State University，1995-2009[J]. J Vet Diagn Invest，2010，22：324-326.

[4]D. F. Twomey，N. J. Vine，M. E. Wessels，and et al. Eimeria prionotemniassociated Coccidiosis in a Bennett’s wallaby(Macropus rufogriseus)[J].Veterinary Record，2010，167，621-622.

[5]夏咸柱，高宏偉，華育平.野生動(dòng)物疾病學(xué)[M].高等教育出版社，2011.

[6]徐春忠，陳曉蘭，夏述忠.成年袋鼠暴發(fā)球蟲病的診治[J].畜牧與獸醫(yī).1998，30(1)：23.