楊毅，孫乙銘，徐建中，俞旭平(浙江省中藥研究所，杭州 310023)

延胡索為罌粟科植物延胡索(Corydalis yanhusuo W.T.Wang)的干燥塊莖，別名元胡。延胡索是常用理氣止痛藥，具活血化淤、行氣止痛功效，臨床常用于胸脅、脘腹疼痛、經(jīng)閉痛經(jīng)、產(chǎn)后淤阻、跌打腫痛等證[1]。延胡索乙素為延胡索主要化學成分之一，具有顯著的鎮(zhèn)痛作用。現(xiàn)代藥理實驗亦證明其有鎮(zhèn)痛作用[2]。目前臨床用延胡索多為炮制品；其傳統(tǒng)的加工炮制分為 2個階段，即產(chǎn)地加工和入藥前炮制。

傳統(tǒng)的延胡索加工炮制方法不僅工藝繁瑣，實際應(yīng)用費時費力，其質(zhì)量也不穩(wěn)定。而且，傳統(tǒng)延胡索飲片呈塊狀或粒狀，質(zhì)地堅硬，有效成分煎出率低。將延胡索的產(chǎn)地加工與炮制結(jié)合起來的一體化加工技術(shù)，生產(chǎn)出的延胡索飲片不僅能提高延胡索藥材的質(zhì)量，還能減少藥材中有效成分的流失。經(jīng)檢測，加工炮制一體化的延胡索飲片中延胡索乙素的含量高出藥典 50%以上。加工炮制一體化延胡索飲片不僅質(zhì)量穩(wěn)定，品質(zhì)得到了保證，同時也為中藥生產(chǎn)企業(yè)減少了能源的消耗，提高其生產(chǎn)效率，增加產(chǎn)業(yè)效益。

本研究利用扭體法、熱板法和熱水縮尾法比較加工炮制一體化延胡索飲片與傳統(tǒng)炮制延胡索飲片的鎮(zhèn)痛作用的差異性，為延胡索的加工炮制一體化工藝技術(shù)提供科學依據(jù)。

1 儀器與材料

1.1 動物

ICR小鼠，♀♂皆用，體質(zhì)量18～22 g，由浙江省實驗動物中心提供，動物合格證號：SCXK(浙)2003-0001。

1.2 試劑

0.6 %醋酸溶液，由中國杭州化學試劑有限公司生產(chǎn)，生產(chǎn)許可證：XK13-201-00067。阿司匹林腸溶片(德國拜耳公司，批號：20110978，規(guī)格：0.1 g)。

1.3 儀器

APT457A型工業(yè)電子天平(深圳安普特電子科技有限公司)；ACS-6型電子天平(花潮公司)；YJ501S型超級恒溫浴槽(上海躍進醫(yī)療器械廠)；秒表(上海秒表廠)。

1.4 試驗樣品制備

試驗樣品制備見表1。

延胡索乙素測定方法根據(jù)孫乙銘等[3]的文獻方法進行測定。給藥樣品采用稱取不同延胡索樣品50 g浸泡1 h，水煎煮2次，第1煎加入400 mL水，第2煎加入250 mL水，2次煎煮微沸25 min，過濾，合并濾液，水浴濃縮。制成水煎液1 g·mL-1。

2 方法與結(jié)果

2.1 小鼠扭體法鎮(zhèn)痛試驗

取體質(zhì)量18～22 g小鼠(♀♂各半)隨機分為5組，每組16只，分別為延胡索加工炮制一體化樣品1、傳統(tǒng)炮制延胡索樣品、延胡索加工炮制一體化樣品 2、陽性對照組及生理鹽水組。灌胃給藥3 d，給藥劑量為 1 0 g·kg-1。末次給藥前禁食 4 h，灌胃 30 min后腹腔注射 0.6%醋酸溶液，劑量為0.1 mL·(10 g)-1，觀察并記錄 2 0 min 內(nèi)出現(xiàn)扭體反應(yīng)的動物數(shù)及其平均扭體次數(shù)(以后肢伸展，身體扭曲拉長，腹肌內(nèi)凹，間歇性收縮為痛指標)。結(jié)果見表2。

表1 試驗樣品制備Tab 1 The preparation of samples

表2 不同延胡索樣品及陽性藥對小鼠醋酸扭體反應(yīng)的影響(n=16， s )Tab 2 Effects of different Corydalis yanhusuo samples and positive drugs on the twisting response of mice induced by acetic acid(n=16, s )

表2 不同延胡索樣品及陽性藥對小鼠醋酸扭體反應(yīng)的影響(n=16， s )Tab 2 Effects of different Corydalis yanhusuo samples and positive drugs on the twisting response of mice induced by acetic acid(n=16, s )

注：與生理鹽水組相比，1)P<0.01Note: Compared with saline group, 1)P<0.01

組 別 扭體潛伏期/s 扭體次數(shù)(20 min)/次 抑 制率/%樣品 1 547.40±347.48 5.33±4.351) 63.3樣品 2 473.47±340.48 9.33±8.62 35.8樣品 3 518.13±289.17 11.47±7.85 21.1陽性對照組 551.56±298.59 4.42±4.591) 69.6生理鹽水組 428.13±249.21 14.53±11.98 -

由表2可見，3種延胡索醋制樣品和陽性對照組均可使醋酸所致小鼠扭體反應(yīng)的潛伏期延長，20 min內(nèi)扭體次數(shù)減少，均具有鎮(zhèn)痛作用。與生理鹽水組相比，在醋酸誘發(fā)小鼠扭體反應(yīng)試驗中，3種炮制延胡索，鎮(zhèn)痛率分別達到63.3%，35.8%，21.1%和69.6%。尤其樣品1抑制率達到63.3%，在20 min內(nèi)樣品1和陽性對照組扭體次數(shù)顯著減少(P<0.01)。

2.2 小鼠熱板法鎮(zhèn)痛實驗

在室溫為 13～18 ℃的環(huán)境下，取體質(zhì)量 18～22 g小鼠，♀，在恒溫水浴(55±0.5)℃條件下，依次測量各小鼠的痛閾值(用秒表記錄，自小鼠投入熱浴板中至出現(xiàn)舔后足的反應(yīng)時間為痛閾指標。選擇痛反應(yīng)潛伏期在5～60 s的小鼠為合格鼠，剔除過敏(<5 s)或反應(yīng)遲鈍(>60 s)的個體。取合格小鼠，按痛閾時間分為 5組，分別為延胡索加工炮制一體化樣品1、傳統(tǒng)炮制延胡索樣品、延胡索加工炮制一體化樣品2、陽性對照組及生理鹽水組。每組22只，給藥3 d后進行實驗。末次給藥前將小鼠置于(55±0.5)℃的熱板上，首先測定5個實驗組的基礎(chǔ)潛伏期，給藥前測2次(間隔10 min)，取其平均值，然后給對照組用生理鹽水灌胃，其余4個給藥組分別用對應(yīng)樣品灌胃，測定各組在給藥后30，60，90，120 min舔足潛伏期的變化。超過90 s無反應(yīng)者，潛伏期按90 s計。結(jié)果見表3。

表3 不同延胡索樣品及陽性藥對小鼠熱板測試舔足反應(yīng)潛伏期的影響(n=22， s )Tab 3 Effects of different Corydalis yanhusuo samples and positive drugs on pain latency by hot-plate test(n=22, s )

表3 不同延胡索樣品及陽性藥對小鼠熱板測試舔足反應(yīng)潛伏期的影響(n=22， s )Tab 3 Effects of different Corydalis yanhusuo samples and positive drugs on pain latency by hot-plate test(n=22, s )

注：與生理鹽水組相比較，1)P<0.05, 2)P<0.01；與樣品3組比較，3)P<0.05Notes: Compared with saline group, 1)P<0.05, 2)P<0.01; compared with sample 3 group, 3)P<0.05

組 別 基礎(chǔ)潛伏期/s 給藥后各時間段的舔足潛伏期/s 30 min 60 min 90 min 120 min樣品 1 33.55±14.73 36.35±19.49 34.13±22.712)3) 41.30±18.812) 32.39±19.571)樣品 2 33.73±12.47 34.43±22.56 30.86±18.682)3) 34.62±19.75 30.38±15.251)樣品 3 33.23±17.01 29.86±15.81 19.10±11.92 30.38±24.45 21.57±20.05陽性對照組 33.83±15.23 35.90±17.56 37.56±15.632) 48.68±23.562) 30.56±18.671)生理鹽水組 33.45±12.42 27.27±16.69 15.64±7.13 20.32±10.54 20.73±10.42

表3結(jié)果表明，與生理鹽水組相比，3種炮制延胡索給藥組與陽性對照組在給藥60 min以后均具有提高小鼠熱刺激痛閾的作用。給藥 120 min后，樣品1、樣品2和陽性組仍具有明顯鎮(zhèn)痛作用。樣品3在給藥后30，60，90，120 min痛閾值有所延長，但與生理鹽水組比較差異不具有統(tǒng)計學意義(P>0.05)。

2.3 熱水縮尾法疼痛模型的制備及給藥方案[4]

取小鼠，♀♂兼用，將小鼠尾尖端3 cm浸入 48 ℃恒溫水浴鍋中，記錄其縮尾的潛伏期為痛閾指標，測2次(間隔10 min)，求其平均值，取潛伏期是5～30 s的為合格鼠，剔除過敏(<5 s)或反應(yīng)遲鈍(>30 s)的個體。24 h后進行實驗，取合格小鼠50只，分別為延胡索加工炮制一體化樣品 1、傳統(tǒng)炮制延胡索樣品、延胡索加工炮制一體化樣品 2、陽性對照組及生理鹽水組，每組小鼠10只。給藥3 d后進行實驗。末次給藥前將小鼠尾尖端3 cm浸入48 ℃的恒溫水浴鍋中，測定5個實驗組的基礎(chǔ)潛伏期，測兩2次(間隔10 min)，取其平均值，然后給對照組用生理鹽水灌胃，其余4個給藥組分別用對應(yīng)樣品灌胃，測定各組30，60，90，120 min 小鼠的縮尾潛伏期的變化，超過60 s無反應(yīng)者，痛閾按60 s計。結(jié)果見表4和表5。

表4 不同延胡索樣品及陽性藥對小鼠熱水縮尾法疼痛潛伏期的影響(n=10， s )Tab 4 Effects of different Corydalis yanhusuo samples and positive drugs on pain latency by tail-immersion test(n=10, s )

表4 不同延胡索樣品及陽性藥對小鼠熱水縮尾法疼痛潛伏期的影響(n=10， s )Tab 4 Effects of different Corydalis yanhusuo samples and positive drugs on pain latency by tail-immersion test(n=10, s )

注：與生理鹽水組相比，1)P<0.05，2)P<0.01Note: Compared with saline group, 1)P<0.05, 2)P<0.01

組 別 基礎(chǔ)潛伏期/s 給藥后各時間段的疼痛潛伏期/s 30 min 60 min 90 min 120 min樣品 1 6.94±0.44 8.86±1.10 10.23±0.962) 8.85±0.332) 9.85±0.782)樣品 2 6.88±0.43 8.25±0.76 8.69±0.951) 7.68±0.641) 8.55±0.561)樣品 3 6.79±0.48 8.37±0.86 8.65±0.651) 7.54±1.12 8.54±1.36陽性對照組 6.82±0.51 9.25±1.121) 9.58±1.252) 10.28±2.682) 9.78±1.022)生理鹽水組 6.85±0.46 7.98±0.88 7.68±0.65 6.95±0.54 7.54±0.98

表5 不同延胡索樣品及陽性藥對小鼠熱水縮尾實驗中的痛閾提高率Tab 5 Analgesic ratio of different Corydalis yanhusuo samples and positive drugs by tail-immersion test

表4與表5結(jié)果表明，與生理鹽水組相比，陽性對照組在給藥30 min后具有顯著提高小鼠疼痛痛閾的時間，3種炮制延胡索給藥組給藥60 min以后也均具有提高小鼠疼痛痛閾的時間。給藥120 min后，樣品1、樣品2和陽性組仍具有顯著提高小鼠疼痛痛閾的時間。樣品3在給藥后30，60，90，120 min痛閾值有所延長，其中只有在給藥60 min痛閾延長有顯著性差異，其他3個時間點與生理鹽水組比較差異不具有統(tǒng)計學意義(P>0.05)。表5的結(jié)果表明，3種炮制延胡索給藥組和陽性組都能提高小鼠疼痛的痛閾時間，尤其是樣品1在給藥60 min后痛閾提高百分率分別為33.20%，27.34%，30.64%，其中60 min和120 min的痛閾提高率還高于陽性組。數(shù)據(jù)表明延胡索加工炮制一體化樣品的痛閾提高率均高于傳統(tǒng)炮制延胡索樣品，說明延胡索加工炮制一體化樣品延胡索優(yōu)于傳統(tǒng)炮制的加工方法。

3 討論

將延胡索的產(chǎn)地加工與炮制結(jié)合起來的一體化加工技術(shù)，不僅能提高延胡索藥材的質(zhì)量，減少藥材中有效成分的流失，使其質(zhì)量穩(wěn)定，品質(zhì)得到了保證。從延胡索乙素檢測結(jié)果看，加工炮制一體化延胡索的延胡索乙素含量遠高于傳統(tǒng)炮制延胡索；且扭體法、熱板法、熱水縮尾法都證實了加工炮制一體化延胡索與傳統(tǒng)醋制均有鎮(zhèn)痛作用，加工炮制一體化延胡索的鎮(zhèn)痛作用比傳統(tǒng)醋制延胡索的鎮(zhèn)痛作用更強。說明延胡索加工炮制一體化技術(shù)較優(yōu)，該技術(shù)同時也為中藥生產(chǎn)企業(yè)減少了能源的消耗，提高其生產(chǎn)效率，增加產(chǎn)業(yè)效益。本研究試驗為延胡索的加工炮制一體化提供科學依據(jù)。

[1]Ch.P(2010)VolⅠ(中國藥典2010年版.一部)[S]. 2010: 130.

[2]HUANG J Y, FANG M, LI Y J, et al. Analgesic effect of Corydalis yanhusuo in a rat model of trigeminal neuropathic pain [J]. J Southern Med Univ(南方醫(yī)科大學學報), 2010,30(9): 2161-2164.

[3]SUN Y M, YU X P, XU J Z, et al. Study on the original procesing techonology in production place of Corydalis Rhizome [J]. Chin J Mod Appl Pharm(中國現(xiàn)代應(yīng)用藥學),2011, 28(10): 923-926.

[4]XU S Y, BIAN R L, CHEN X. The Pharmacological Experimental Methods(藥理實驗方法學)[M]. Beijing:People's Medical Publishing House, 2001: 882-888.