趙永德，田洪根，丁長玲，丁召興，崔光懷，劉呈華（.濱州醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院，山東濱州56603；.濱州市藥品檢驗所，山東濱州 5668）

復(fù)方磺胺嘧啶銀混懸液是濱州醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院研制的一種治療燒傷、燙傷用特色藥物。其中的組分磺胺嘧啶銀保持了磺胺嘧啶及銀離子兩者的抗菌作用，除能控制創(chuàng)面感染外，還可促使創(chuàng)面干燥、結(jié)痂和促進(jìn)愈合；另一種組分醋酸氯己定對易造成創(chuàng)面感染的革蘭陽性球菌和革蘭陰性桿菌也有較強(qiáng)的抑制和殺滅作用，二者合用具有協(xié)同抗菌作用[1]。經(jīng)查閱文獻(xiàn)，有采用永停滴定法[2]和紫外分光光度法[3]測定磺胺嘧啶銀含量的報道，但是經(jīng)筆者試驗，這2種方法均不能有效分離2種組分，因此不能消除本品中磺胺嘧啶與醋酸氯己定之間的相互干擾。為進(jìn)一步完善該品種質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，保證檢驗質(zhì)量，筆者參照《美國藥典》中磺胺嘧啶銀原料藥及其制劑的含量測定方法[4]，建立了以高效液相色譜（HPLC）法測定該制劑中的2種組分含量的方法，并取得了滿意的效果。

1 材料

LC-20A HPLC儀、LC-20AT紫外檢測器（日本島津公司）。

磺胺嘧啶銀混懸液（濱州醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院，批號：20110503、20110602、20110626，規(guī)格：磺胺嘧啶銀5 g∶100 ml、醋酸氯己定0.1 g∶100 ml）；磺胺嘧啶銀對照品（湖南化學(xué)試劑總廠，批號：20060101，純度：99.2%）；醋酸氯己定對照品（中國食品藥品檢定研究院，批號：130183-200101，純度：99.0%）；乙腈為色譜純，水為純凈水，其余試劑均為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件

色譜柱：Kromasil C18（250 mm×4.6 mm，5 μm）；流動相A：0.8%三乙胺（冰醋酸調(diào)pH至4.9），流動相B：甲醇[先以流動相A-流動相B（90∶10）進(jìn)行洗脫，磺胺嘧啶出峰時間約為10 min；待磺胺嘧啶出峰后，立即改以流動相A-流動相B（60∶40）洗脫10 min，檢測醋酸氯己定]，流速：1.0 ml/min；檢測波長：260 nm；柱溫：室溫；進(jìn)樣量：20 μl。

2.2 對照品溶液的制備

2.2.1 磺胺嘧啶銀對照品溶液。精密稱定磺胺嘧啶銀對照品51.00 mg，置于50 ml量瓶中，加0.03 mol/L的鹽酸溶液溶解并稀釋至刻度，搖勻，作為磺胺嘧啶銀對照品貯備液（1.02 mg/ml）；精密量取對照品貯備液5 ml，置于50 ml量瓶中，加0.03 mol/L的鹽酸溶液稀釋至刻度，搖勻，即得。

2.2.2 醋酸氯己定對照品溶液。精密稱取醋酸氯己定對照品20.32 mg，置于50 ml量瓶中，加甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，作為醋酸氯己定對照品貯備液（0.4064 mg/ml）；精密量取對照品貯備液5 ml，置于50 ml量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，即得。

2.3 供試品溶液的制備

2.3.1 供試品溶液（測定磺胺嘧啶銀）。精密量取本品2 ml，置于50 ml量瓶中，加0.03 mol/L的鹽酸溶液稀釋至刻度，搖勻，濾過；精密量取續(xù)濾液5 ml，置于100 ml量瓶中，加0.03 mol/L的鹽酸溶液稀釋至刻度，搖勻，即得。

2.3.2 供試品溶液（測定醋酸氯己定）。精密量取本品2 ml，置于50 ml量瓶中，加甲醇適量，超聲3～5 min，用甲醇稀釋至刻度，搖勻，濾過，即得。

分別取2種組分的對照品和供試品溶液進(jìn)樣，色譜見圖1。

圖1 高效液相色譜圖Fig 1 HPLC chromatograms

2.4 線性關(guān)系考察

2.4.1 磺胺嘧啶銀。分別精密量取磺胺嘧啶銀對照品貯備液（1.02 mg/ml）2.50、3.75、5.00、6.25、7.50 ml，置于 50 ml量瓶中，用0.03 mol/L的鹽酸溶液稀釋至刻度。精密吸取上述對照品溶液各20μl，注入液相色譜儀，測定。以峰面積（y）為縱坐標(biāo)，濃度（c）為橫坐標(biāo)進(jìn)行線性回歸，得方程為y＝18092412c－47970（r＝0.9999），表明磺胺嘧啶銀檢測質(zhì)量濃度線性范圍為0.051～0.153 mg/ml。

2.4.2 醋酸氯己定。分別精密量取醋酸氯己定對照品貯備液（0.4064 mg/ml）2.50、3.75、5.00、6.25、7.50 ml，置于50 ml量瓶中，用甲醇溶液稀釋至刻度；精密吸取上述溶液各20μl，注入液相色譜儀，測定。以峰面積（y）為縱坐標(biāo)，濃度（c）為橫坐標(biāo)進(jìn)行線性回歸，得方程為y＝1084787c－42561（r＝0.9999），表明醋酸氯己定檢測質(zhì)量濃度線性范圍為20.32～60.96μg/ml。

2.5 精密度試驗

分別精密吸取2種供試品溶液各20μl，各重復(fù)進(jìn)樣6次，測定峰面積，計算RSD，結(jié)果磺胺嘧啶和醋酸氯己定峰面積的RSD分別為1.3%、0.76%，符合規(guī)定，表明該方法精密度良好。

2.6 穩(wěn)定性試驗

分別精密吸取2種供試品溶液各20 μl，分別在0、4、8、12、24 h時進(jìn)樣，測定2種組分的峰面積，結(jié)果磺胺嘧啶和醋酸氯己定峰面積的RSD分別為0.72%、0.99%，符合規(guī)定，表明2種供試品溶液在24 h內(nèi)穩(wěn)定性均較好。

2.7 加樣回收率試驗

2.7.1 磺胺嘧啶銀。精密量取已知磺胺嘧啶銀含量的樣品（批號：20110503，磺胺嘧啶銀為標(biāo)示量的98.1%）1 ml，置于50 ml量瓶中，加磺胺嘧啶銀對照品貯備液0.5 ml，加0.03 mol/L的鹽酸溶液稀釋至刻度，搖勻，濾過。精密量取續(xù)濾液5 ml，置于100 ml量瓶中，加0.03 mol/L的鹽酸溶液稀釋至刻度，搖勻，得供試品溶液。取樣測定，計算回收率，結(jié)果平均回收率為99.3%，RSD＝0.75%，詳見表1。

表1 加樣回收率試驗結(jié)果（n＝6）Tab 1 Result of recovery test（n＝6）

2.7.2 醋酸氯己定。精密量取已知醋酸氯己定含量的樣品（批號：20110602，醋酸氯己定為標(biāo)示量的99.4%）1 ml，置于50 ml量瓶中，加醋酸氯己定對照品貯備液2.5 ml，加甲醇適量，超聲3～5 min，用甲醇稀釋至刻度，搖勻，濾過，得供試品溶液。取樣測定，計算回收率，結(jié)果平均回收率為98.0%，RSD＝0.90%，詳見表1。

2.8 重復(fù)性試驗

取同一批樣品（批號：20110503）6份，制備成供試品溶液并測定，計算供試品中磺胺嘧啶銀及醋酸氯己定的含量和RSD。結(jié)果，磺胺嘧啶銀和醋酸氯己定含量分別為標(biāo)示量的98.1%和99.4%，RSD分別為0.90%、0.61%，表明該方法具有良好的重復(fù)性。

2.9 含量測定結(jié)果

取3批樣品，按“2.3”項下方法制備成供試品溶液，進(jìn)樣測定，計算含量，結(jié)果見表2。

表2 3批樣品含量測定結(jié)果Tab 2 Result of content determination of 3 batches of samples

3 討論

3.1 溶劑的選擇

筆者根據(jù)磺胺嘧啶銀和醋酸氯己定的溶解性差異選擇了不同的溶劑制備相關(guān)的供試品溶液：以0.03 mol/L的鹽酸溶液作溶劑可使磺胺嘧啶銀完全溶解，而醋酸氯己定幾乎不溶于鹽酸溶液；而采用甲醇作溶劑，可使醋酸氯己定完全溶解，而磺胺嘧啶銀幾乎不溶于甲醇，從而避免了兩者的相互干擾[5]。

3.2 流動相及洗脫方法的選擇

筆者嘗試使用能同時測定2種組分的流動相，雖經(jīng)多次試驗但均未找到合適的流動相。因此，最終通過調(diào)整流動相各組分的比例對2種組分分別進(jìn)行測定。

3.3 流動相比例的選擇

由于本品中2種組分的極性相差較大，二者在色譜柱上的保留時間差別也較大，如果僅采用流動相A-流動相B（90∶10）進(jìn)行洗脫，磺胺嘧啶大約在10 min左右出峰，而醋酸氯己定60 min后也未見其出峰；如果僅采用流動相A-流動相B（60∶40）進(jìn)行洗脫，醋酸氯己定大約在7 min出峰，而磺胺嘧啶在色譜柱上幾乎無保留，2 min內(nèi)就出峰。為了保證檢測方法的實用性和結(jié)果的準(zhǔn)確性，筆者最終采用流動相A-流動相B（90∶10）的比例測定磺胺嘧啶，采用流動相A-流動相B（60∶40）的比例測定醋酸氯己定，結(jié)果表明方法可行。

試驗中磺胺嘧啶測定時采用了“立即改以流動相A-流動相B（60∶40）洗脫10 min”的操作，是為了將供試品溶液中可能存在的極微量的醋酸氯己定快速從色譜柱上洗脫下來，避免醋酸氯己定的強(qiáng)保留性對磺胺嘧啶測定產(chǎn)生影響。

綜上，采用本文建立的HPLC法可使磺胺嘧啶銀和醋酸氯己定完全分離，避免了相互干擾，且方法簡便、靈敏，能有效控制該制劑質(zhì)量。

[1]中國藥品生物制品檢定所.中國藥品檢驗標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)范[S].北京：中國醫(yī)藥科技出版社，2005：313-318.

[2]國家藥典委員會.中華人民共和國藥典：二部[S].2010年版.北京：中國醫(yī)藥科技出版社，2010：1145-1146.

[3]黎月玲，古淑儀，謝紹婷，等.磺胺嘧啶銀貼劑的制備及質(zhì)量控制[J].中國醫(yī)院藥學(xué)雜志，2009，29（4）：326.

[4]United States Pharmacopeial Convention.USP：24[S].Washington DC：Pharmacopeial Convention，Inc.，2000：1566.

[5]李小榮.高效液相色譜法測定醋酸氯己定緩釋凝膠中醋酸氯己定的含量[J].中國醫(yī)院藥學(xué)雜志，2008，28（19）：1727.