炒參薯飲片含量測定方法研究

★ 田桂紅 袁桂平（.江西南華醫(yī)藥有限公司 南昌330006；.江西省食品藥品檢驗所 南昌33009）

參薯來源于薯蕷科植物參薯Dioscorea alataL.的干燥塊莖。其塊莖中含有薯蕷皂苷元、多糖、多酚等多種成分。具有健脾、補(bǔ)肺、益精氣、消腫、止痛功效，主要用于脾虛久瀉、肺虛喘咳、水腫、小便不利、腎虛不固的遺精、尿頻[1-2]。炒參薯炮制方法收載于《江西省中藥材標(biāo)準(zhǔn)》，但無飲片的質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)。為了有效控制炒參薯飲片的質(zhì)量，課題組對炒參薯飲片的含量測定方法進(jìn)行了研究，采用紫外分光光度法測定參薯多糖的含量，從而構(gòu)建炒參薯飲片質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)規(guī)范體系，以便科學(xué)合理地控制炒參薯飲片質(zhì)量，為中醫(yī)臨床和開發(fā)應(yīng)用提供參考。

1 儀器與試藥

TU-1901 雙光束紫外-可見分光光度計（Win5操作系統(tǒng)）；百萬分之一電子天平；RE-52A 型旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀。D-（+）無水葡萄糖對照品（中國藥品生物制品檢定所，批號：110833-200503，供含量測定用）；硫酸為優(yōu)級純，水為三重蒸餾水，其他試劑為分析純。樣品批號：0707025、0707007、0710009、0710003、0707001、0802002。

2 含量測定[3-5]

2.1 對照品溶液的制備

精密稱取經(jīng)105℃干燥至恒重的無水葡萄糖對照品40 mg，置50 mL 量瓶中，加水使溶解并稀釋至刻度，搖勻，即得（每1 mL中含無水葡萄糖800 μg）。

2.2 標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備

精密量取對照品溶液0.5、1.0、2.0、2.5、4.0、5.0 mL，分別置50 mL 量瓶中，各加水稀釋至刻度，搖勻。分別精密量取2 mL，置具塞試管中，各加入新配制的5%苯酚溶液1.0 mL，混勻，迅速加入硫酸7.0 mL，搖勻，放置15分鐘，取出后置冷水浴中冷卻30 分鐘，取出，以相應(yīng)試劑為空白，照紫外-可見分光光度法測定，在490 nm 的波長處測定吸光度，以吸光度為縱坐標(biāo)，濃度為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。

2.3 測定法

分別取炒參薯飲片細(xì)粉約1.0 g，精密稱定，置水浴中加熱回流兩次，每次加80%乙醇100 mL，第1次3小時，第2次2小時，濾過，殘渣置水浴中加熱回流3次，每次加水100 mL，第1次3小時，第2、3次各2 小時，濾過，合并3 次濾液，減壓濃縮至30 mL，加入4 倍量的無水乙醇，搖勻，靜置過夜，溶液離心5分鐘（3 500 轉(zhuǎn)/分），棄去上清液，殘渣加95%乙醇10 mL洗滌，離心5分鐘（3 500轉(zhuǎn)/分），棄去上清液，殘渣加丙酮10 mL 洗滌，離心5 分鐘（3 500 轉(zhuǎn)/分），棄去上清液，殘渣加水溶解并轉(zhuǎn)移至200 mL 量瓶中，加水至刻度，搖勻，濾過，精密量取續(xù)濾液5 mL置100 mL 量瓶中，加水稀釋至刻度，搖勻，測定，6批樣品測定結(jié)果見表1。

表1 參薯多糖含量測定結(jié)果

3 方法學(xué)考察

3.1 測定波長的選擇

取按含量測定方法項下制備的對照品溶液（800 μg/mL）和供試品溶液按標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備方法于顯色后在550-450 nm 的波長范圍內(nèi)進(jìn)行光譜掃描，結(jié)果對照品溶液與供試品溶液均在490±2 nm的波長處有最大吸收。故選擇490 nm 的波長作為檢測波長。

3.2 耐用性試驗

精密稱取樣品約1.0 g，按含量測定方法項下制備供試品溶液，分別采用3 種不同廠家的分光光度計進(jìn)行測定，結(jié)果參薯多糖在不同儀器上測得含量無顯著差異。

3.3 線性關(guān)系的考察

精密量取含量測定方法項下的對照品溶液（800 μg/mL）制備40 μg/mL 的對照品溶液0.5、1.0、2.0、2.5、4.0、5.0 mL，分別置50 mL量瓶中，各加水稀釋至刻度，搖勻。分別精密量取2 mL，置具塞試管中，各加入新配制的5%苯酚溶液1.0 mL，混勻，迅速加入硫酸7.0 mL，搖勻，放置15分鐘，取出后置冷水浴中冷卻30 分鐘，取出，以相應(yīng)試劑為空白，照紫外-可見分光光度法測定，在490 nm 的波長處測定吸光度，以吸光度為縱坐標(biāo)，濃度為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，得線性方程為Y=0.0123X-0.0282，r=0.999 6。結(jié)果表明D-（+）無水葡萄糖濃度在8-80 μg/mL呈良好的線性關(guān)系。

3.4 精密度試驗

取含量測定方法項下的對照品溶液制備40 μg/mL的對照品溶液，顯色后依法測定吸光度，其平均值為0.458（n=5），結(jié)果RSD為1.2%。

3.5 重現(xiàn)性試驗

取同一批號樣品，按含量測定方法項下方法平行制備供試品溶液5 份，測得含量的平均值為20.92%，RSD為1.3%，表明本法重現(xiàn)性良好。

3.6 穩(wěn)定性試驗

取按含量測定方法項下方法制備的對照品溶液（40 μg/mL）與供試品溶液，按標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制方法，分別在不同時間測定吸光度，每隔30 分鐘測定一次吸光度，結(jié)果在24 小時內(nèi)樣品溶液穩(wěn)定（RSD為0.6%）。

3.7 回收率試驗

采用加樣回收率測定法，精密稱取已測定含量的同一批號樣品6份，分別加入對照品溶液（40 μg/mL）1 mL，依法測定，結(jié)果回收率為99.4%、99.1%、97.9%、101.6%、100.05%、102.0%，平均回收率99.6%，RSD=1.4%。

4 討論

4.1 本文建立炒參薯飲片含量測定有效控制方法，為科學(xué)合理管理參薯炮制品質(zhì)量，提高參薯炮制品的生產(chǎn)加工、資源利用和臨床合理應(yīng)用提供科學(xué)依據(jù)。

4.2 采用苯酚-硫酸法測定炒參薯中多糖的含量[6]，并參照有關(guān)文獻(xiàn)[7]，表明試驗苯酚溶液的濃度，硫酸的用量，反應(yīng)溫度及時間對實驗結(jié)果的影響較顯著。同時，課題組對苯酚溶液的濃度、硫酸的用量、反應(yīng)溫度及時間進(jìn)行單因素考察，結(jié)果顯示苯酚溶液的濃度、硫酸的用量、反應(yīng)溫度及時間分別為5%、7.0 mL、室溫及15分鐘較適宜。經(jīng)方法學(xué)考察，線性關(guān)系良好，精密度、穩(wěn)定性、重現(xiàn)性的RSD均在2%以內(nèi)，回收率在97%-102%之間，且RSD=1.4。說明該法操作簡單、靈敏度高、準(zhǔn)確、可靠，可以很好地控制炒參薯飲片的質(zhì)量

[1]江西省衛(wèi)生廳編. 江西省中藥材標(biāo)準(zhǔn)（1996年版）[S]. 南昌：江西科學(xué)技術(shù)出版社，1996：142.

[2]中國醫(yī)學(xué)科學(xué)院藥物研究所編. 中藥志（第2冊）[M]. 北京：人民衛(wèi)生出版社，1981：248.

[3]董群，等. 改良的苯酚-硫酸法測定多糖和寡糖含量的研究[J].中國藥學(xué)雜志，1996，31（9）：505.

[4]貢濟(jì)宇. 酚硫酸法測定靈芝多糖含量的實驗研究[J].長春中醫(yī)學(xué)報，2002，1（18）：45.

[5]徐斌等. 改良苯酚-硫酸法測定苦瓜多糖含量[J].食品科技，2005（7）：79.

[6]姜芳婷，等.山藥及其同屬植物參薯中多糖含量的測定[J]. ，2005，15（3）：47.

[7]羅毅等.苯酚-硫酸法測定多糖含量顯色方式的優(yōu)選[J].制劑與工藝，2005，12（1）：45.