★ 廖寶源 李長(zhǎng)達(dá) 孫蔚華 方慧瓊（.江西省贛州市食品藥品檢驗(yàn)所 贛州34000；.江西贛州市第三人民醫(yī)院 贛州34000）

藥物中的殘留溶劑是指在原料藥或賦型劑的生產(chǎn)中，以及在制劑制備過(guò)程中使用的，但在工藝過(guò)程中未能完全去除的有機(jī)溶劑[1]。由于殘留溶劑不僅沒(méi)有療效，還可能增加藥物的毒副作用，而且影響藥物的穩(wěn)定性，故所有的有機(jī)溶劑應(yīng)盡可能除去。為了保護(hù)患者免受藥物中殘留有機(jī)溶劑的傷害，需對(duì)藥品在生產(chǎn)過(guò)程中引入的有機(jī)溶劑殘留量進(jìn)行測(cè)定[2]。恩替卡韋是一種用于治療乙肝病毒感染的新一代鳥(niǎo)嘌呤核苷類似物口服藥[3]，主要用于治療成人伴有病毒復(fù)制活躍和血清轉(zhuǎn)氨酶持續(xù)增高，或肝組織學(xué)為活動(dòng)性病變的慢性乙型肝炎，是目前降病毒最快最強(qiáng)、變異幾率最低的核苷類似物[4]。由于合成本品過(guò)程中使用三氯甲烷等有機(jī)溶劑，故有可能會(huì)殘留在產(chǎn)品中。資料表明，氯仿具有致癌、致畸、致突變作用，長(zhǎng)期接觸將對(duì)人體產(chǎn)生嚴(yán)重影響[5，6]。本文參考中國(guó)藥典2005 年版二部有關(guān)品種三氯甲烷殘留量檢測(cè)方法，建立了氣相色譜法，結(jié)果表明本法分離度高、靈敏、準(zhǔn)確且簡(jiǎn)便。

1 儀器與試劑

Agilent 7890A氣相色譜儀（配有ECD檢測(cè)器），恩替卡韋原料（廠方提供，批號(hào)20090515、20090520、20090526）。三氯甲烷、二甲基亞砜均為色譜純。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件

色譜柱：DB-624 毛細(xì)管柱（30m×0.53mm×3.0μm）；柱溫：初始60℃，保持6 分鐘，再以20℃∕分鐘的升溫速率升溫至200℃，保持4 分鐘；檢測(cè)器：ECD；檢測(cè)器溫度：300℃；進(jìn)樣口溫度：200℃；載氣：氮?dú)猓髁?.5mL∕min）；進(jìn)樣方式：分流進(jìn)樣；分流比：15：1；進(jìn)樣體積：1.0μL。

2.2 對(duì)照品溶液的制備

精密稱取三氯甲烷12.4mg，迅速加入已裝有適量二甲基亞砜溶劑的100mL 量瓶中，定容至刻度，搖勻，精密量取1mL 至50mL 量瓶中，定容至刻度，搖勻，即得三氯甲烷對(duì)照溶液。

2.3 供試品溶液的制備

精密稱取本品0.2g，置5mL量瓶中，加二甲基亞砜溶解并稀釋至刻度，搖勻，作為供試品溶液。

2.4 空白干擾試驗(yàn)

取三氯甲烷對(duì)照品溶液、供試品溶液及有機(jī)溶劑二甲基亞砜照上述色譜條件分別進(jìn)樣，結(jié)果空白溶劑對(duì)恩替卡韋的三氯甲烷殘留量測(cè)定無(wú)干擾。見(jiàn)圖1。

圖1 氣相色譜圖

2.5 最低檢測(cè)量

取對(duì)照溶液稀釋10-9倍得三氯甲烷的檢出限溶液，按上述色譜條件測(cè)定，結(jié)果最低檢出量為2.457 54×10-9μg∕mL，相對(duì)供試品最低檢出量為6×10-14g∕g。

2.6 精密度試驗(yàn)

取上述三氯甲烷對(duì)照品溶液，照上述色譜條件進(jìn)行氣相分析，連續(xù)進(jìn)樣5次，RSD為0.99%。

2.7 線性關(guān)系

精密量取上述三氯甲烷對(duì)照溶液1mL、2mL、5mL、8mL、10mL，分別置10mL 量瓶中，分別加入二甲基亞砜稀釋至刻度，搖勻，即得濃度分別為10%、20%、50%、80%、100%的溶液，作為線性回歸測(cè)定溶液。分別照上述色譜條件進(jìn)樣測(cè)定，每個(gè)濃度測(cè)定3 份，取平均值，以濃度為X軸，以峰面積為Y值，計(jì)算線性回歸方程：Y= 4030.204 1X+380.918 4，r＝1.000 0。結(jié)果表明三氯甲烷在0.2457 54-2.457 54 μg∕mL濃度范圍內(nèi)呈良好線性關(guān)系。

2.8 回收率試驗(yàn)

精密稱取樣品（批號(hào)20090520）約0.2g，置5mL量瓶中，用上述濃度為50%、80%、100%的溶液溶解，并稀釋至刻度，即得回收率測(cè)定溶液。照上述色譜條件測(cè)定，每個(gè)濃度測(cè)定3份，計(jì)算平均回收率為96.99%，RSD為0.98%。

2.9 樣品測(cè)定

取本品3 批（批號(hào)20090515、20090520、200905 26）樣品，分別制成供試品溶液，照上述色譜條件測(cè)定。結(jié)果見(jiàn)表1。

表1

3 討論與小結(jié)

3.1 色譜柱的選擇

試驗(yàn)中先后選擇了DB-1、DB-1701、HP-5、DB-624等不同極性的色譜柱，以在DB-624上的峰形和分離度最佳。

3.2 溶劑介質(zhì)的選擇

由于三氯甲烷在水中溶解度極小[7，8]，所以不宜用水作溶解介質(zhì)，考慮到恩替卡韋的的溶解度，且二甲基亞砜（DMSO）沸點(diǎn)不高，用其作溶解介質(zhì)有利于待測(cè)溶劑及溶解介質(zhì)的有效汽化和縮短分析時(shí)間。

3.3 檢測(cè)器的選擇

三氯甲烷在FID 檢測(cè)器上靈敏度低，無(wú)法準(zhǔn)確定量，因?yàn)槠浣Y(jié)構(gòu)上含有鹵原子，改用ECD 檢測(cè)器后靈敏度顯著提高，所以選擇ECD檢測(cè)器檢測(cè)三氯甲烷[1、8]。

[1]國(guó)家藥典委員會(huì).中國(guó)藥典.（二部）[S].北京：化學(xué)工業(yè)出版社，2005：附錄54-57.

[2]王衛(wèi).藥品中有機(jī)溶劑殘留量及其測(cè)定[J].天津藥學(xué)，2001，13（3）：26-27.

[3]姚光弼，張定風(fēng)，王寶恩，等.替卡韋抗乙型肝炎病毒劑量和療效的研究[J].中華肝臟病雜志，2005，13（7）：484-485.

[4]李金金，耿長(zhǎng)新，呂志國(guó).恩替卡韋治療慢性乙型肝炎30例[J].世界華人消化雜志，2009，17（4）：425-426.

[5]丁錦舂，陳儲(chǔ)良.水中揮發(fā)性鹵代烴的危害性及其分析方法的研究現(xiàn)狀[J].中國(guó)衛(wèi)生檢驗(yàn)雜志，1995，5（6）：364-366.

[6] Yang CY，Chiu HF. Chlorination of drinking water and cancer mortality in Taiwan[J].Environ Res，1998.78：1-6.

[7]容凱文，霍燕蘭，李月微.氣相色譜法測(cè)定酒石酸長(zhǎng)春瑞濱中三氯甲烷的殘留量[J].今日藥學(xué)，2010，20（6）：30-32.

[8]宋更申，姜建國(guó).GC-ECD法測(cè)定馬來(lái)酸桂哌齊特中三氯甲烷的殘留量[J].中國(guó)藥品標(biāo)準(zhǔn)，2010，11（3）：211-212.