李冀，何增芬，馬育軒，王艷麗，付殷，黃艷霞，高彥宇

(黑龍江中醫(yī)藥大學(xué)，黑龍江 哈爾濱 150040)

在前期的實(shí)驗(yàn)研究中，本課題組的研究結(jié)果表明烏腺金絲桃單味藥提取物具有顯著的抗心律失常［1］、抗心肌缺血作用［2］。另有研究結(jié)果表明，相同條件下烏腺金絲桃與丹參按一定比例配伍提取物對(duì)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物心肌缺血的保護(hù)作用優(yōu)于單味藥組［3］。但未見(jiàn)丹參與烏腺金絲桃配伍應(yīng)用預(yù)防和治療心律失常的報(bào)道。因此，本實(shí)驗(yàn)分別建立氯仿引起小鼠心室顫動(dòng)模型和氯化鈣誘發(fā)大鼠心律失常模型，觀察和統(tǒng)計(jì)烏腺金絲桃與丹參不同比例配伍對(duì)心律失常模型動(dòng)物的影響，為進(jìn)一步研究提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。

1 實(shí)驗(yàn)材料

1．1 動(dòng)物 SPF級(jí)昆明種小鼠，84只，雌雄各半，體質(zhì)量(35±2)g，由黑龍江中醫(yī)藥大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供;SPF級(jí)Wistar大鼠，64只，雌雄各半，體質(zhì)量(200±10)g，由黑龍江中醫(yī)藥大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心代購(gòu)，許可證號(hào):SCXK(京)2012－0001。均給予標(biāo)準(zhǔn)飼料，自由飲食水。

1．2 藥品與試劑 烏腺金絲桃提取物，丹參提取物，烏腺金絲桃與丹參1∶1(按生藥質(zhì)量比，下同)提取物，烏腺金絲桃與丹參1∶2提取物，烏腺金絲桃與丹參2∶1提取物。烏腺金絲桃、丹參均由黑龍江中醫(yī)藥大學(xué)方劑學(xué)實(shí)驗(yàn)室提供。

藥品的制備:將烏腺金絲桃植株剪段，與丹參的生藥飲片按既定質(zhì)量比分組混勻，每組生藥先以蒸餾水提取2次，第1次加8倍量水浸泡15min，冷凝回流提取60min，第2次加6倍量蒸餾水，冷凝回流提取40min;再以95%乙醇提取2次，煎煮方法、時(shí)間分別與兩次水提相同。將4次所得藥液混合，減壓濃縮至所需體積，即得各組提取物。

鹽酸普萘洛爾片(規(guī)格:10mg/片，大同市云崗制藥有限公司，國(guó)藥準(zhǔn)字H14020563，批號(hào)111021);鹽酸維拉帕米片(規(guī)格:40mg/片，天津市中央藥業(yè)有限公司，國(guó)藥準(zhǔn)字H12020051，批號(hào)120402);注射用生理鹽水(哈爾濱三聯(lián)藥業(yè)有限公司，批號(hào)120723A6);氯仿(分析純，天津市富宇精細(xì)化工有限公司，批號(hào)101206);無(wú)水氯化鈣(分析純，汕頭市西隴化工廠(chǎng)有限公司，批號(hào)0903122);烏來(lái)糖(化學(xué)純，上海山浦化工有限公司，批號(hào)20080110);碘伏(山東利爾康消毒科技股份有限公司，批號(hào)120311A)。

1．3 儀器 98－1－B型電子調(diào)溫電熱套(天津市泰斯特儀器有限公司);SZKW－D－1型電熱恒溫水浴鍋(北京市永光明醫(yī)療儀器廠(chǎng));SHB－Ⅲ型循環(huán)水真空泵(鄭州長(zhǎng)盛實(shí)驗(yàn)儀器有限公司);R－201型旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器(上海申勝生物技術(shù)有限公司);BL－420S型BL系列生物機(jī)能實(shí)驗(yàn)系統(tǒng)(成都泰盟科技有限公司)。

2 實(shí)驗(yàn)方法

2．1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的篩選 昆明種小鼠、Wistar大鼠分別適應(yīng)性喂養(yǎng)7天后，選取健康小鼠、大鼠，再以Ⅱ?qū)?lián)心電圖篩選出心電圖正常的小鼠84只、大鼠64只，進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。

2．2 氯仿引起小鼠心室顫動(dòng)實(shí)驗(yàn) 把經(jīng)過(guò)篩選的84只小鼠按體質(zhì)量隨機(jī)分為7組，每組12只(雌雄各半)，即烏腺金絲桃提取物組(以下簡(jiǎn)稱(chēng)烏提組)、丹參提取物組(以下簡(jiǎn)稱(chēng)丹提組)、烏腺金絲桃與丹參1∶1提取物組(以下簡(jiǎn)稱(chēng)1∶1組)、烏腺金絲桃與丹參1∶2提取物組(以下簡(jiǎn)稱(chēng)1∶2組)、烏腺金絲桃與丹參2∶1提取物組(以下簡(jiǎn)稱(chēng)2∶1組)、鹽酸普萘洛爾組即陽(yáng)性藥物對(duì)照組(以下稱(chēng)簡(jiǎn)陽(yáng)對(duì)組)、模型對(duì)照組(以下簡(jiǎn)稱(chēng)模型組)。烏提組、丹提組、1∶1 組、1∶2 組、2∶1 組分別給予相應(yīng)提取物，烏腺金絲桃給藥劑量8．32g/kg(按生藥，下同)，丹參給藥劑量8．32g/kg，陽(yáng)對(duì)組給予鹽酸普萘洛爾3．90mg/kg，模型組給予生理鹽水，各組實(shí)驗(yàn)動(dòng)物均經(jīng)灌胃給藥，灌胃體積為0．2ml/10g，1次/天，連續(xù)灌胃14天。末次給藥1h后，依次將小鼠放入含有3～4ml氯仿的棉球(更換小鼠時(shí)以氯仿飽和棉球)倒置的600ml燒杯內(nèi)，至呼吸停止立即取出剖開(kāi)胸腔，肉眼檢查心律，統(tǒng)計(jì)心室顫動(dòng)發(fā)生率［4］。

2．3 氯化鈣誘發(fā)大鼠心律失常實(shí)驗(yàn) 將篩選后的64只大鼠按體質(zhì)量隨機(jī)分為8組，每組8只(雌雄各4只)，即烏提組、丹提組、1∶1 組、1∶2 組、2∶1 組、鹽酸維拉帕米組即陽(yáng)性藥物對(duì)照組(以下簡(jiǎn)稱(chēng)陽(yáng)對(duì)組)、模型組、空白對(duì)照組(以下簡(jiǎn)稱(chēng)空白組)。烏提組、丹提組、1:1組、1:2組、2:1組分別給予相應(yīng)提取物，烏腺金絲桃給藥劑量為5．76g/kg，丹參給藥劑量為5．76g/kg，陽(yáng)對(duì)組給予鹽酸維拉帕米片43．2mg/kg，模型組和空白組均給以相應(yīng)體積的生理鹽水，灌胃體積為1ml/100g，1次/天，連續(xù)灌胃14天。末次給藥1小時(shí)后，20%烏拉坦 0．6ml/100g(1．2g/kg)［5］腹腔麻醉，仰位固定，碘伏棉球消毒手術(shù)部位，暴露一側(cè)股靜脈以備給藥。按使用說(shuō)明連接BL系列生物機(jī)能實(shí)驗(yàn)系統(tǒng)，記錄標(biāo)準(zhǔn)正常Ⅱ?qū)?lián)心電圖，10min后，烏提組、丹提組、1∶1 組、1∶2 組、2∶1 組、陽(yáng)對(duì)組、模型組以2．5%氯化鈣0．4ml/100g(100mg/kg)［6］，空白組以生理鹽水 0．4ml/100g，10s內(nèi)勻速推注，并記錄心電圖Ⅱ?qū)?lián)，觀察其心律失常情況，實(shí)驗(yàn)結(jié)果以心律失常潛伏時(shí)間、心律失常持續(xù)時(shí)間、死亡率做指標(biāo)統(tǒng)計(jì)受試藥物抗心律失常作用。

3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果

3．1 實(shí)驗(yàn)各組小鼠心室顫動(dòng)發(fā)生率比較 表1提示各給藥組小鼠心室顫動(dòng)發(fā)生率分別為:模型組91.67%、陽(yáng)對(duì)組 16．67%、烏提組 50．0%、丹提組58.33%、1∶1 組 41．67%、1∶2 組 25．0%、2∶1 組66.67%，與模型組比較，1∶1組、1∶2組均有非常顯著性差異(P ＜0．01)，烏提組有顯著性差異(P ＜0．05)。說(shuō)明烏腺金絲桃提取物、1∶1提取物、1∶2提取物、2∶1提取物均能不同程度降低氯仿誘發(fā)的小鼠心室顫動(dòng)發(fā)生率，對(duì)小鼠心臟均有一定保護(hù)作用，其中1∶1提取物、1∶2提取物對(duì)心室顫動(dòng)小鼠心臟保護(hù)作用尤為顯著。

表1 各實(shí)驗(yàn)組小鼠氯仿誘發(fā)心室顫動(dòng)發(fā)生率比較

圖1 正常心電圖

圖2 注射氯化鈣溶液后心電圖

圖3 恢復(fù)正常節(jié)律后心電圖

3．2 實(shí)驗(yàn)各組大鼠心律失常潛伏時(shí)間、持續(xù)時(shí)間比較 經(jīng)股靜脈注射氯化鈣溶液前后大鼠心電圖如圖1、2和3，圖1為注藥前正常心電圖，圖2為注射氯化鈣溶液后心電圖，圖3為恢復(fù)正常節(jié)律后心電圖。表2表明，各給藥組心律失常潛伏時(shí)間與模型組比較，烏提組、丹提組、1∶1 組均有顯著性差異(P ＜0．05)，陽(yáng)對(duì)組、1∶2組有非常顯著性差異(P＜0．01)。與模型組比較，各給藥組大鼠心律失常持續(xù)時(shí)間，烏提組、1∶1組有顯著性差異(P＜0．05)，陽(yáng)對(duì)組、1∶2組有非常顯著性差異(P＜0．01)。說(shuō)明烏腺金絲桃提取物、丹參提取物、1∶1提取物、1∶2提取物均能延長(zhǎng)大鼠心律失常潛伏時(shí)間、縮短心律失常持續(xù)時(shí)間，具有抗氯化鈣引起的大鼠心律失常作用，其中1∶2提取物對(duì)氯化鈣引起心律失常大鼠心臟保護(hù)作用優(yōu)于其他提取物。

表2 各實(shí)驗(yàn)組大鼠氯化鈣引起心律失常潛伏時(shí)間、持續(xù)時(shí)間比較(±s)

表2 各實(shí)驗(yàn)組大鼠氯化鈣引起心律失常潛伏時(shí)間、持續(xù)時(shí)間比較(±s)

注:與模型組比較，*P ＜0．05，＊＊P ＜0．01。

組別 數(shù)量(只)心律失常潛伏時(shí)間(s)心律失常持續(xù)時(shí)間(s)空白組8－－模型組 8 7．75 ±1．76 113．80 ±3．81陽(yáng)對(duì)組 8 15．10±2．58＊＊ 84．95±4．84＊＊烏提組 8 11．42 ±1．96* 104．02 ±3．202*丹提組 8 11．38 ±1．77* 104．99 ±7．061∶1 組 8 11．97 ±2．28* 102．55 ±4．44*1∶2 組 8 13．35 ±2．09＊＊ 93．13 ±2．94＊＊2∶1 組9．52 ±2．18 108．38 ±5．068

3．3 各實(shí)驗(yàn)組氯化鈣引起心律失常大鼠死亡率比較

由表3可見(jiàn)，陽(yáng)對(duì)組死亡率為12．5%，烏提組死亡率為37．5%，丹提組死亡率為 50．0%，1∶1組死亡率為25．0%，1∶2 組死亡率為12．5%，2∶1 組死亡率為75.0%。與模型組比較，陽(yáng)對(duì)組、1∶2有非常顯著性差異(P ＜0．01)，烏提組、1∶1組有顯著性差異(P ＜0.05)，說(shuō)明烏腺金絲桃提取物、烏腺金絲桃與丹參1∶1提取物、烏腺金絲桃與丹參1∶2提取物能降低氯化鈣引起心律失常大鼠死亡率，對(duì)心臟有保護(hù)作用，且烏腺金絲桃與丹參1∶2提取物抗心律失常作用優(yōu)于其他提取物。

表3 各實(shí)驗(yàn)組大鼠死亡率比較

4 討論

心律失常(cardiac arrhythmia)是指心臟沖動(dòng)的頻率、節(jié)律、起源部位、傳導(dǎo)速度或激動(dòng)次序的異常［7］。心律失常是疾病名，可作為臨床診斷單獨(dú)發(fā)生，也是癥狀，作為合并癥、并發(fā)癥存在。心律失常在冠心病、擴(kuò)張性心肌病等心血管疾病中發(fā)病廣，是危害較為嚴(yán)重的疾病之一。心律失常的造模方法有多種且導(dǎo)致心律失常的機(jī)制各異。本實(shí)驗(yàn)選取氯仿和氯化鈣建立心律失常模型。氯仿誘發(fā)的小鼠心室纖顫與植物神經(jīng)紊亂及遞質(zhì)釋放有關(guān)［8］。氯化鈣誘發(fā)心律失常的作用機(jī)制較復(fù)雜，不僅是鈣離子對(duì)心臟的直接作用，而且與腎上腺素能神經(jīng)對(duì)心臟的作用也有關(guān)。本實(shí)驗(yàn)研究結(jié)果表明，烏腺金絲桃與丹參1:2配伍提取物組能明顯降低氯仿引起小鼠心室顫動(dòng)發(fā)生率、延長(zhǎng)氯化鈣誘發(fā)大鼠心律失常潛伏時(shí)間、縮短氯化鈣誘發(fā)大鼠心律失常持續(xù)時(shí)間。且在相同實(shí)驗(yàn)條件下，對(duì)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物心臟的保護(hù)作用優(yōu)于單味藥組和其他配伍組，本實(shí)驗(yàn)結(jié)果將為后續(xù)研究提供實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)。

［1］ 李冀，滕林，高彥宇．烏腺金絲桃抗心律失常作用的研究［J］．中醫(yī)藥信息，2008，25(6):32－33．

［2］ 李冀，滕林，高彥宇．烏腺金絲桃提取物對(duì)小鼠心肌缺血的保護(hù)作用［J］．中國(guó)中醫(yī)藥信息雜志，2009，16(1):38－39．

［3］ 李冀，曹明明，高彥宇．烏腺金絲桃與丹參配伍對(duì)心肌缺血模型動(dòng)物影響的研究［J］．中醫(yī)藥學(xué)報(bào)，2012，40(1):17－19．

［4］ 魏偉，吳希美，李元建．藥理實(shí)驗(yàn)方法學(xué)［M］．北京:人民衛(wèi)生出版社，2010:978－982．

［5］ 胡久略，黃顯章．炙甘草湯抗心律失常作用的實(shí)驗(yàn)研究［J］．時(shí)珍國(guó)醫(yī)國(guó)藥，2008，19(5):1189－1190．

［6］ 劉演波，劉苗苗，毛飛鵬，等．?；撬釋?duì)氯化鈣引起的大鼠心律失常的保護(hù)作用［J］．廣東藥學(xué)院學(xué)報(bào)，1998，14(4):331－332．

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［8］ 李敏，朱靜，王祥．充血性心力衰竭患者血漿腦鈉素水平與其心功能關(guān)系的研究［J］．心血管康復(fù)醫(yī)學(xué)雜志，2007，16(1):30－32．