楊 希， 李衛(wèi)華， 黃崢嶸

(1 福建醫(yī)科大學(xué)第一臨床醫(yī)學(xué)院，福建 福州350005;2廈門大學(xué)附屬第一醫(yī)院心內(nèi)科，福建 廈門361003;3寧波市醫(yī)療中心李惠利醫(yī)院心內(nèi)科，浙江 寧波315041)

他汀類藥物是3-羥基-3-甲基戊二酰輔酶A(3-hydroxy-3-methylglutaryl-coenzyme A，HMG-CoA)還原酶抑制劑，可以降低血漿總膽固醇(total cholesterol，TC)、低密度脂蛋白膽固醇(low-density lipoprotein cholesterol，LDL-C)和甘油三酯(triglyceride，TG)水平，升高血漿高密度脂蛋白膽固醇水平(high-density lipoprotein cholesterol，HDL-C)［1］。在過去的20 年間，總計(jì)超過170 000 名參與者的多項(xiàng)大型臨床試驗(yàn)表明，他汀類藥物能夠降低心血管事件的發(fā)生率［2］。有研究顯示，辛伐他汀可通過抑制血清可溶性CD40L(sCD40L)及動脈組織CD40/CD40L 表達(dá)途徑從而保護(hù)血管功能［3］。因此，他汀被廣泛應(yīng)用于動脈粥樣硬化性心血管疾病以及卒中的一級和二級預(yù)防［4-7］。然而，與他汀類藥物對心血管疾病的有益作用相反，基于多項(xiàng)大型隨機(jī)對照臨床試驗(yàn)的薈萃分析表明，和安慰劑組比較，使用他汀類藥物能夠增加新發(fā)糖尿病的發(fā)生風(fēng)險［8-10］。

胰腺β 細(xì)胞功能障礙和胰島素抵抗是2 型糖尿病的兩大病理生理機(jī)制。目前有關(guān)他汀類藥物增加新發(fā)糖尿病發(fā)生風(fēng)險的相關(guān)機(jī)制尚未闡明，因此本研究將通過體外培養(yǎng)小鼠胰腺β 細(xì)胞株MIN6，從細(xì)胞整體水平及分子基因水平探討辛伐他汀對胰腺β細(xì)胞功能的影響并探討其可能的機(jī)制，為深入研究他汀類藥物導(dǎo)致胰腺β 細(xì)胞功能障礙以及他汀對糖代謝的影響提供相關(guān)實(shí)驗(yàn)依據(jù)。

材 料 和 方 法

1 材料

小鼠胰腺β 細(xì)胞株MIN6(以下簡稱MIN6 細(xì)胞，由上海交通大學(xué)醫(yī)學(xué)院附屬瑞金醫(yī)院內(nèi)分泌研究所惠贈)。SW-CJ-1F 超凈工作臺、恒溫水浴鍋、3111 型CO2恒溫恒濕細(xì)胞培養(yǎng)箱、倒置相差顯微鏡(Olympus)、LD5-2A 型臺式低速離心機(jī)、低溫高速離心機(jī)、luminometer(Modulus)、BR680 多功能酶標(biāo)儀(Bio-Rad)、紫外可見分光光度計(jì)、逆轉(zhuǎn)錄PCR 儀、Light-Cycler? 480 Real-Time PCR 擴(kuò)增儀(Roche)、垂直電泳儀、電轉(zhuǎn)儀和電泳與凝膠成像分析系統(tǒng);高糖DMEM 培養(yǎng)基和胎牛血清(fetal bovine serum，F(xiàn)BS)均購自HyClone;辛伐他汀購自Merck;牛血清白蛋白(bovine serum albumin，BSA)購自Roche;胰島素放射免疫分析藥盒購自北京北方生物技術(shù)研究所;ATP檢測試劑盒購自碧云天生物技術(shù)研究所;BCA 蛋白質(zhì)定量試劑盒及總RNA 提取試劑盒均購自天根生化科技(北京)有限公司;逆轉(zhuǎn)錄試劑盒及熒光定量PCR 試劑盒均購自TaKaRa。引物由Invitrogen 合成。小鼠內(nèi)向整流鉀離子通道6.2(inwardly rectifying potassium channel 6.2，Kir6.2)多克隆抗體、葡萄糖轉(zhuǎn)運(yùn)體2(glucose transporter 2，GLUT2)多克隆抗體以及山羊抗兔多克?、蚩咕徸訟bcam;電壓依賴性鈣離子通道1.2(voltage -dependent calcium channel 1.2，CaV1.2)多克隆抗體購自Novus;GAPDH 單克隆抗體購自Cell Signaling。其它化學(xué)試劑均購自國藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司。

2 方法

2.1 MIN6 細(xì)胞的培養(yǎng)及分組 MIN6 細(xì)胞在高糖DMEM 培養(yǎng)基、5%CO2、37 ℃恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，培養(yǎng)基中包含15%FBS、1 ×105U/L 青霉素、100 mg/L鏈霉素、2 mmol/L L-谷氨酰胺和70 μmol/L β-巰基乙醇。接種密度為6 ×108/L，每2 d 更換1 次培養(yǎng)基。實(shí)驗(yàn)分為4 組，分別用含0、2、5 和10 μmol/L 辛伐他汀的高糖DMEM 培養(yǎng)基培養(yǎng)48 h。

2.2 胰島素釋放試驗(yàn)及細(xì)胞內(nèi)胰島素含量的檢測

將對數(shù)生長期的細(xì)胞消化離心后按5 ×104cells/well 接種于12 孔細(xì)胞培養(yǎng)板，待細(xì)胞長至60% ～70%融合，PBS 洗滌細(xì)胞1 次，分別給予不同組處理，在37 ℃、含95%空氣和5%CO2的培養(yǎng)箱中孵育48 h 后，行胰島素釋放試驗(yàn)。吸出培養(yǎng)基，無糖Krebs-Ringer 碳酸氫鹽緩沖液(KRBB:115 mmol/L NaCl，4.7 mmol/L KCl，1.2 mmol/L MgSO4，1.2 mmol/L KH2PO4，1.3 mmol/L CaCl2，24 mmol/L NaHCO3，0.1% BSA 和10 mmol/L HEPES，pH 7.4)洗滌細(xì)胞2 遍，加入無糖Krebs-Ringer 緩沖液，37 ℃孵育2 h，吸出緩沖液，每組分別加入含2.8 mmol/L(低糖)或16.7 mmol/L(高糖)葡萄糖的Krebs-Ringer 緩沖液，37 ℃孵育1 h，小心吸取上清液后4 ℃、1 000 r/min 離心5 min，取上清-70 ℃保存待測或直接用于檢測。相應(yīng)的細(xì)胞加入等量的酸醇提取液(75%無水乙醇，1.5%鹽酸，23.5%超純水;4 ℃貯存)，4℃冰箱靜置過夜，次日取上清離心后測定胰島素，即為細(xì)胞內(nèi)胰島素的含量。每組實(shí)驗(yàn)均設(shè)復(fù)孔，重復(fù)3次。采用放射免疫分析法(嚴(yán)格按照試劑盒說明書操作)測定胰島素水平。胰島素濃度測定結(jié)果用細(xì)胞總蛋白濃度校正。

2.3 MIN6 細(xì)胞內(nèi)三磷酸腺苷( adenine trisphosphate，ATP) 含量的測定 正常對照組細(xì)胞及予以辛伐他汀處理結(jié)束的細(xì)胞，采用生物化學(xué)發(fā)光法(螢光素酶方法)檢測細(xì)胞內(nèi)ATP 含量。ATP 水平的測定按照ATP 檢測試劑盒說明書操作。吸除培養(yǎng)液，12 孔板每孔加入100 μL 裂解液裂解細(xì)胞。4 ℃、12 000 ×g 離心8 min，取上清。加100 μL ATP 檢測工作液到檢測管內(nèi)，室溫放置5 min。加20 μL 樣品，迅速用微量移液器混勻，至少間隔2 s 后，立即用luminometer 測定RLU 值。ATP 檢測試劑盒購自碧云天生物技術(shù)研究所，結(jié)果由細(xì)胞總蛋白濃度校正。

2.4 Kir6.2、CaV1.2 及GLUT2 mRNA 的檢測 用總RNA 提取試劑盒提取MIN6 細(xì)胞的總RNA，用TaKa-Ra 逆轉(zhuǎn)錄試劑盒進(jìn)行逆轉(zhuǎn)錄，最后cDNA 進(jìn)行實(shí)時熒光定量PCR 擴(kuò)增。PCR 反應(yīng)體系為:cDNA 1 μL、上下游引物(10 μmol/L)各0.4 μL、SYBR? Premix Ex TaqTMⅡ(2 ×)5 μL、無核酶水3.2 μL。PCR 反應(yīng)條件:95 ℃預(yù)變性30 s，95 ℃5 s，59 ℃15 s，72 ℃20 s，共55 個循環(huán)。每次反應(yīng)設(shè)3 ～4 個復(fù)孔，重復(fù)3次。由實(shí)時熒光定量PCR 儀配套軟件算出每個反應(yīng)的平均熒光值，并除以相應(yīng)內(nèi)參照GAPDH 的平均熒光值，得到比值y，將正常對照組y 值的平均值視為100%，即可得出其它辛伐他汀處理組的相對熒光值。Kir6.2 上游引物5'-AAGGGCATTATCCCTGAGGAA-3'，下游引物5'-TTGCCTTTCTTGGACACGAAG-3';CaV1. 2 上游引物5'-AGACGCTATGGGCTATGA-3'，下游引物5'-AACACCGAGAACCAGATTTA-3';GLUT2 上游引物5'-TCAGAAGACAAGATCACCGGA-3'，下游引物5'-GCTGGTGTGACTGTAAGTGGG-3';GAPDH 上游引物5'-AGGTCGGTGTGAACGGATTTG-3'，下游引物5'-TGTAGACCATGTAGTTGAGGTCA-3'。

2.5 Kir6.2、CaV1.2 及GLUT2 蛋白表達(dá)的檢測

采用Western blotting 檢測Kir6.2、CaV1.2 及GLUT2蛋白的表達(dá)水平。收集細(xì)胞后加入細(xì)胞裂解液，冰上裂解20 ～30 min，期間振蕩數(shù)次。13 400 ×g、4 ℃離心20 ～30 min，吸取上清，使用BCA 蛋白質(zhì)定量試劑盒測定蛋白濃度。向蛋白質(zhì)樣品中加入5 ×上樣緩沖液煮沸8 min，直接用于后續(xù)電泳或-70 ℃儲存?zhèn)溆谩estern blotting:取蛋白樣品，進(jìn)行SDSPAGE、轉(zhuǎn)膜、封閉、Ⅰ抗Ⅱ抗反應(yīng)、洗膜、顯影定影。采用Bio-Rad Quantity One 軟件分析顯影條帶，將Kir6. 2/GAPDH、CaV1. 2/GAPDH 及GLUT2/GAPDH的相對灰度值作為Kir6.2、CaV1.2 及GLUT2 的蛋白表達(dá)相對水平。

3 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

采用SPSS 19.0 軟件分析。計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(mean ±SD)表示，多組間均數(shù)比較采用單因素方差分析或非參數(shù)檢驗(yàn)，以P ＜0.05 為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

結(jié) 果

1 辛伐他汀對MIN6 細(xì)胞胰島素分泌功能及細(xì)胞內(nèi)胰島素含量的影響

1.1 低糖狀態(tài)下MIN6 細(xì)胞胰島素的分泌及細(xì)胞內(nèi)胰島素含量 辛伐他汀處理組MIN6 細(xì)胞在低糖狀態(tài)下細(xì)胞內(nèi)的胰島素含量、分泌至細(xì)胞外的胰島素量及細(xì)胞內(nèi)外總胰島素量較正常對照組明顯減少(均P ＜0.05)，且胰島素分泌量呈濃度依賴性減少，見圖1。

Figure 1. Insulin levels under low glucose condition in MIN6 cells treated with simvastatin at the concentrations of 0，2，5 and 10 μmol/L. Mean±SD.n=6. * P ＜0.05 vs 0 μmol/L;# P ＜0.05 vs 2 μmol/L.圖1 低糖狀態(tài)下胰島素量比較

1.2 高糖刺激下MIN6 細(xì)胞胰島素的分泌及細(xì)胞內(nèi)胰島素含量 辛伐他汀處理組MIN6 細(xì)胞在高糖狀態(tài)下細(xì)胞內(nèi)的胰島素含量、分泌至細(xì)胞外的胰島素量及細(xì)胞內(nèi)外總胰島素量較正常對照組明顯減少(均P ＜0.05)，且隨著辛伐他汀濃度的增加，MIN6細(xì)胞內(nèi)外總胰島素量有所降低，高糖刺激下辛伐他汀10 μmol/L 組細(xì)胞內(nèi)的胰島素含量、分泌至胞外的胰島素量及細(xì)胞內(nèi)外總胰島素量較2 μmol/L 組明顯降低(均P ＜0.05)，見圖2。

Figure 2. Insulin levels under high glucose condition in MIN6 cells treated with simvastatin at the concentrations of 0，2，5 and 10 μmol/L. Mean±SD.n=6. * P ＜0.05，＊＊P ＜0.01 vs 0 μmol/L;##P ＜0.01 vs 2 μmol/L;△△P ＜0.01 vs 5 μmol/L.圖2 高糖狀態(tài)下胰島素量比較

2 辛伐他汀對MIN6 細(xì)胞內(nèi)ATP 水平的影響

與正常對照組比較，辛伐他汀處理后的MIN6 細(xì)胞裂解液中ATP 含量明顯下降(均P ＜0.05)，辛伐他汀10 μmol/L 組較5 μmol/L 組或2 μmol/L 組、5 μmol/L 組較2 μmol/L 組ATP 含量明顯減少，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(均P ＜0.05)，見圖3。

3 Kir6.2、CaV1.2 及GLUT2 的mRNA 水平

與正常對照組(mRNA 水平視為1)相比，辛伐他汀10 μmol/L 處理組MIN6 細(xì)胞Kir6.2 mRNA 水平上調(diào)為23.97 ±4.09(P ＜0.01)，辛伐他汀5 μmol/L處理組MIN6 細(xì)胞CaV1.2 和GLUT2 mRNA 水平分別下調(diào)為0.63 ±0.22(P ＜0.01)和0.50 ±0.21(P ＜0.05)，辛伐他汀10 μmol/L 處理組MIN6 細(xì)胞CaV1.2 和GLUT2 mRNA 水平分別下調(diào)為0.42 ±0.10(P ＜0.01)和0.26 ±0.11(P ＜0.01)，辛伐他汀10 μmol/L 處理組Kir6.2 mRNA 水平較2 μmol/L 或5 μmol/L 組明顯上調(diào)(均P ＜0.01)，10 μmol/L 處理組CaV1.2 mRNA 水平較2 μmol/L 或5 μmol/L 組明顯下調(diào)(P ＜0.01 或P ＜0.05)，5 μmol/L 組CaV1.2 mRNA 水平較2 μmol/L 組亦明顯下調(diào)(P ＜0.05)，10 μmol/L 處理組GLUT2 mRNA 水平較2 μmol/L 組明顯下調(diào)(P ＜0.05)，見圖4。

Figure 3. The content of ATP in MIN6 cells treated with simvastatin at the concentrations of 0，2，5 and 10 μmol/L for 48 h. Mean±SD. n=10. * P ＜0.05 vs 0 μmol/L;#P ＜0.05 vs 2 μmol/L;△P ＜0.05 vs 5 μmol/L.圖3 各組MIN6 細(xì)胞內(nèi)ATP 含量的比較

Figure 4. The relative mRNA levels of Kir6.2，CaV1.2 and GLUT2 in MIN6 cells treated with simvastatin at the concentrations of 0，2，5 and 10 μmol/L(group C)for 48 h. Mean±SD. n=10. * P ＜0.05，＊＊P ＜0.01 vs 0 μmol/L;#P ＜0.05，##P ＜0.01 vs 2 μmol/L;△P ＜0.05，△△P ＜0.01 vs 5 μmol/L.圖4 各組MIN6 細(xì)胞Kir6.2、CaV1.2 和GLUT2 的mRNA 相對水平

4 Kir6.2、CaV1.2 及GLUT2 蛋白的表達(dá)水平

與正常對照組相比，辛伐他汀5 和10 μmol/L處理組MIN6 細(xì)胞Kir6.2 蛋白表達(dá)水平分別上調(diào)約66%和91%(均P ＜0.01)，5 和10 μmol/L 處理組Kir6.2 蛋白表達(dá)水平較2 μmol/L 組亦分別上調(diào)約23%和43%(P ＜0.05 和P ＜0.01);與正常對照組相比，辛伐他汀5 和10 μmol/L 處理組MIN6 細(xì)胞CaV1.2 蛋白表達(dá)水平分別下調(diào)約38%和79%(均P ＜0.01)，10 μmol/L 處理組CaV1.2 蛋白表達(dá)水平較2 μmol/L 和5 μmol/L 組亦分別下調(diào)約73%和67%(均P ＜0.01);與正常對照組相比，辛伐他汀10 μmol/L 處理組MIN6 細(xì)胞GLUT2 蛋白表達(dá)水平下調(diào)約38%(P ＜0.01)，10 μmol/L 處理組GLUT2蛋白表達(dá)水平較2 μmol/L 和5 μmol/L 組亦分別下調(diào)約29%和27%(P ＜0.01 和P ＜0.05)，見圖5。

Figure 5. The relative protein levels of Kir6.2，CaV1.2 and GLUT2 in MIN6 cells treated with simvastatin at the concentrations of 0，2，5 and 10 μmol/L for 48 h. Mean±SD. n=3. ＊＊P ＜0.01 vs 0 μmol/L;#P ＜0.05，##P ＜0.01 vs 2 μmol/L;△P ＜0.05，△△P ＜0.01 vs 5 μmol/L.圖5 各組MIN6 細(xì)胞Kir6.2、CaV1.2 和GLUT2 蛋白表達(dá)相對水平

討 論

他汀類藥物通過特異性抑制膽固醇合成過程中的限速酶——HMG-CoA 還原酶的活性，從而抑制膽固醇合成、降低血漿膽固醇水平，具有穩(wěn)定血管內(nèi)粥樣斑塊、抗動脈粥樣硬化作用，因此被廣泛應(yīng)用于心血管科、神經(jīng)科、內(nèi)分泌科、腎臟科等領(lǐng)域。有研究顯示，阿托伐他汀可以通過抑制蛋白激酶C(protein kinase C，PKC)的活化從而對抗高糖誘導(dǎo)的內(nèi)皮細(xì)胞產(chǎn)生的氧化應(yīng)激反應(yīng)［11］。瑞舒伐他汀能顯著抑制C-反應(yīng)蛋白(C-reactive protein，CRP)刺激晚期內(nèi)皮祖細(xì)胞(endothelial outgrowth cells，EOCs)所致的炎癥因子白細(xì)胞介素8(interleukin-8，IL-8)和單核細(xì)胞趨化蛋白1(monocyte chemoattractant protein-1，MCP-1)以及血管細(xì)胞黏附分子1(vascular cell adhesion molecule-1，VCAM-1)和細(xì)胞間黏附分子1(intercellular adhesion molecule-1，ICAM-1)的分泌，從而為動脈粥樣硬化的防治提供新的靶點(diǎn)［12］。然而，近年來他汀類藥物的使用特別是強(qiáng)化劑量的他汀治療對糖代謝的影響也引發(fā)了極大的關(guān)注［13-17］。但迄今為止，他汀帶來糖尿病風(fēng)險的機(jī)制研究極為匱乏。

他汀類藥物影響糖代謝、降低胰島素敏感性、增加糖尿病發(fā)生風(fēng)險的具體機(jī)制，目前尚不清楚。Nakata 等［18］的研究發(fā)現(xiàn)，阿托伐他汀能夠抑制脂肪細(xì)胞的成熟以及GLUT4 的表達(dá)，減弱胰島素在脂肪細(xì)胞中的作用，從而導(dǎo)致胰島素敏感性的降低。他汀對糖代謝的不良影響也可能與其使體內(nèi)某些代謝產(chǎn)物的減少有關(guān)。輔酶Q10不僅在抗氧化和穩(wěn)定細(xì)胞膜方面發(fā)揮重要作用，也參與線粒體的氧化磷酸化，在機(jī)體的能量代謝中發(fā)揮重要作用［19］。已有研究表明，某些他汀類藥物能夠顯著降低血漿輔酶Q10的水平［20-23］。而輔酶Q10的降低會抑制線粒體的氧化磷酸化和ATP 的生成。他汀可以抑制甲羥戊酸途徑，不僅阻止了膽固醇的合成，也同樣阻止了體內(nèi)某些甲羥戊酸代謝產(chǎn)物如類異戊二烯和輔酶Q10的生物合成［24］，從而影響糖代謝和胰島素敏感性。

胰腺β 細(xì)胞胰島素的合成和分泌是一個完整有序的過程。目前，對于葡萄糖刺激的胰島素分泌(glucose-stimulated insulin secretion，GSIS)的共識是:胰腺β 細(xì)胞屬于電可興奮性細(xì)胞，葡萄糖通過GLUT2 進(jìn)入胰腺β 細(xì)胞，被葡萄糖激酶磷酸化代謝生成ATP，從而使ATP 敏感性鉀通道(KATP)關(guān)閉，細(xì)胞膜去極化，電壓依賴性鈣通道(CaV)開放，鈣離子內(nèi)流，細(xì)胞內(nèi)鈣離子濃度升高，激活胰島素分泌所需的一系列酶或蛋白，導(dǎo)致胰島素分泌。因此，胰腺β細(xì)胞胰島素的分泌受到多種因素、多個環(huán)節(jié)的影響。本研究結(jié)果表明辛伐他汀干預(yù)48 h 能夠明顯抑制小鼠胰腺β 細(xì)胞株MIN6 在基礎(chǔ)葡萄糖水平(2.8 mmol/L)及高糖(16.7 mmol/L)刺激下胰島素的合成和分泌，這種抑制作用呈明顯的劑量依賴性。

本研究對辛伐他汀抑制胰腺β 細(xì)胞胰島素分泌的機(jī)制進(jìn)行了探討。ATP 是胰腺β 細(xì)胞胰島素分泌的重要調(diào)節(jié)物質(zhì)，胰腺β 細(xì)胞內(nèi)ATP 濃度的下降會抑制KATP通道的關(guān)閉，抑制細(xì)胞膜去極化，進(jìn)而抑制CaV通道的開放，最終抑制胰島素的分泌。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果也證實(shí)，中、高濃度的辛伐他汀對小鼠胰腺β 細(xì)胞內(nèi)ATP 的生成具有明顯的抑制作用且呈劑量依賴性。

ATP 敏感性鉀通道(KATP)是一個八聚體，在小鼠胰腺β 細(xì)胞中由4 個內(nèi)向整流鉀通道亞單位Kir6.2 和硫脲類藥物受體亞單位SUR1 組成。KATP通道把胰腺β 細(xì)胞內(nèi)的糖代謝過程和細(xì)胞膜的電活動相偶聯(lián)［25］，在胰島素的分泌過程中發(fā)揮重要的調(diào)節(jié)作用。KATP通道調(diào)控胰島素分泌的活性有賴于Kir6.2 和SUR1 亞單位在基因和蛋白水平上的協(xié)調(diào)表達(dá)［26］。胰腺β 細(xì)胞分泌胰島素是一個相當(dāng)復(fù)雜而精密的過程，CaV在這一過程中起著非常重要的調(diào)控作用。在胰腺β 細(xì)胞膜上，CaV通道主要包括L型鈣通道和非L 型鈣通道，而以L 型鈣通道為主［27］。

本實(shí)驗(yàn)中，實(shí)時熒光定量PCR 結(jié)果表明，5 μmol/L 及10 μmol/L 的辛伐他汀干預(yù)48 h 后，MIN6細(xì)胞Kir6.2 mRNA 表達(dá)水平明顯升高，而CaV1.2 及GLUT2 mRNA 表達(dá)受到明顯抑制。Western blotting結(jié)果進(jìn)一步證實(shí)，辛伐他汀能夠上調(diào)Kir6.2 蛋白的表達(dá)水平，而下調(diào)CaV1. 2 及GLUT2 蛋白的表達(dá)。Kir6.2 通道為內(nèi)向整流鉀通道，在維持胰腺β 細(xì)胞膜的靜息電位及胰島素分泌過程中都發(fā)揮著重要作用。當(dāng)Kir6.2 通道蛋白表達(dá)升高時，細(xì)胞膜不易去極化，從而影響CaV1.2 通道的開放，胞外鈣離子內(nèi)流減少，進(jìn)而抑制胰島素的分泌。CaV1.2 通道蛋白表達(dá)的降低也可以減少胞外鈣離子內(nèi)流，胞漿中鈣離子濃度降低，胰島素分泌減少。GLUT2 蛋白表達(dá)的下調(diào)，能夠降低胰腺β 細(xì)胞對葡萄糖的攝取利用，從而影響胰島素的分泌。

循證醫(yī)學(xué)證據(jù)表明，他汀類藥物的抗動脈粥樣硬化作用與其應(yīng)用劑量有關(guān)［28］。因此，該類藥物的臨床應(yīng)用劑量有日益增加的趨勢。本研究結(jié)果提示，2 μmol/L、5 μmol/L 及10 μmol/L 的辛伐他汀干預(yù)48 h 均呈現(xiàn)出明顯的胰島素分泌抑制作用。可見，在長期大劑量應(yīng)用辛伐他汀時，可能引起辛伐他汀血藥濃度的明顯升高，此時應(yīng)注意其對胰腺β 細(xì)胞功能的潛在影響。

總之，他汀類藥物對于心血管系統(tǒng)的有益作用是毋庸置疑的，但考慮到他汀治療特別是大劑量他汀強(qiáng)化治療對糖代謝和胰島素敏感性的不利影響，因此在臨床實(shí)踐中，應(yīng)該注意病人血糖的變化，減少他汀對糖代謝不良影響事件的發(fā)生。

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