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      草莓炭疽病分生孢子離體快速繁殖技術(shù)探討

      2013-12-24 06:43:46馬華升阮松林王淑珍方獻(xiàn)平肖文斐
      浙江農(nóng)業(yè)科學(xué) 2013年3期
      關(guān)鍵詞:匍匐莖炭疽病分生孢子

      忻 雅,馬華升,阮松林,王淑珍,方獻(xiàn)平,肖文斐

      (浙江省杭州市農(nóng)業(yè)科學(xué)研究院,浙江 杭州 310024)

      草莓屬于薔薇科草莓屬,被譽(yù)為水果皇后,國外稱之為廉價的保健產(chǎn)品。中國目前草莓生產(chǎn)面積約7萬 hm2,居世界第1位,主要產(chǎn)地分布在安徽、遼寧、河北、山東、江蘇、上海、浙江等東部沿海地區(qū),設(shè)施栽培草莓更是成為各地高效特色主導(dǎo)產(chǎn)業(yè)之一。目前南方主栽的紅頰和章姬等品種主要來自日本,不僅商品性好,口感更適合亞洲人,但其易感炭疽病的特性限制了設(shè)施草莓的可持續(xù)發(fā)展[1]。

      草莓炭疽病主要爆發(fā)在夏季草莓育苗后期和初秋定植初期,主要為害匍匐莖與葉片。草莓炭疽病是由半知菌類黑盤孢目黑盤孢科刺盤孢菌屬(Colletotrichum spp.)真菌引起[2],已經(jīng)明確的致病菌主要有 3種,分別為 C.gloeosporioides、C.a(chǎn)cutatum 和 C.fragariae[3],我國草莓生產(chǎn)上以膠孢炭疽菌 (C.gloeosporioides)為多見。

      目前國內(nèi)對草莓炭疽病的研究主要集中在病原菌的鑒定[4-5]和防治藥劑篩選[6-8],對于發(fā)病規(guī)律、流行條件、測報方法等報道很少。病害防治缺乏理論依據(jù),達(dá)不到理想效果,病害逐年加重。全面、深入地了解該菌的生物學(xué)特性有助于制定和完善草莓炭疽病的防治措施。本研究通過在人工控溫、控濕條件下,研究炭疽病菌在人工條件下的產(chǎn)孢條件,以期明確病菌繁殖的發(fā)生規(guī)律,為病害的田間防控提供參考和依據(jù)。

      1 材料與方法

      1.1 草莓炭疽病病菌分離部位和抗生素篩選

      供試草莓品種為紅頰。2011年7月,從建德、臨安等草莓育苗基地采集帶有炭疽病斑的植株,分別以有病斑的葉片、匍匐莖和根冠為材料,在病健交界處取樣。葉片樣品剪取5 mm ×5 mm左右的小塊,匍匐莖切成5 mm長、2~3 mm厚的小塊,根冠部剖開后取開始褐變的組織切成5 mm見方、2~3 mm厚的小塊。設(shè)置不同的抗生素處理:①氨芐青霉素 50 μg·mL-1+ 鏈霉素 50 μg·mL-1,②鏈霉素50 μg·mL-1,③不加抗生素。樣品用0.1%升汞進(jìn)行表面滅菌,處理3 min后用滅菌水洗3次,置于光照培養(yǎng)箱 (MMM,德國)25℃、馬鈴薯葡萄糖瓊脂 (PDA)培養(yǎng)基上黑暗培養(yǎng)。分離部位和抗生素處理形成9種組合,每種組合各接20皿,接種7 d后觀察雜菌污染率。

      1.2 濕度對草莓炭疽病菌絲及分生孢子的影響

      用上一步分離出的炭疽病菌邊緣菌絲塊 (3 mm×3 mm)為材料,在PDA培養(yǎng)基上培養(yǎng),加入氨芐青霉素 50 μg·mL-1和鏈霉素 50 μg·mL-1。根據(jù)小容器空氣濕度調(diào)節(jié)法,進(jìn)行適當(dāng)改良,形成濕度分別為100%,90%,80%和70%的環(huán)境。光照培養(yǎng)箱內(nèi)25℃培養(yǎng),光照為1 050 lx。5 d后觀察菌落大小,10 d后用血球計數(shù)器統(tǒng)計分生孢子數(shù)量。

      1.3 濕度和光照組合對草莓炭疽病分生孢子的影響

      用上一步篩選出來的2個適宜濕度,結(jié)合不同光照處理 (Hobo電子照度溫度儀),形成8個組合,10 d后觀察每皿分生孢子數(shù)量。

      1.4 培養(yǎng)基和接種形態(tài)對草莓炭疽病菌絲及分生孢子的影響

      選用3種培養(yǎng)基:PDA、PSA、酵母膏培養(yǎng)基;2種接種形態(tài):生長旺盛的菌落邊緣菌絲塊 (打孔器取直徑8 mm的圓塊)、適量分生孢子團(tuán)涂開成直徑8 mm的圓。組合成6種處理,在人工氣候箱內(nèi)培養(yǎng),溫度為25℃,濕度80%,光照為252 lx。7 d后觀察菌落大小,并刮去菌絲,10 d后統(tǒng)計每皿分生孢子數(shù)量。

      2 結(jié)果與分析

      2.1 植株部位和抗生素對草莓炭疽病菌分離效果的影響

      表1所示,與不加抗生素相比,加抗生素①(氨芐青霉素 50 μg·mL-1+ 鏈霉素 50 μg·mL-1)后,污染率分別下降23.1%,54.5%和27.3%,加抗生素②(鏈霉素50 μg·mL-1)后,污染率分別下降7.7%,36.4%和9.1%。不同分離部位相比,匍匐莖在不同抗生素處理中的污染率都為最低。因此,加抗生素①、以匍匐莖為接種材料,能盡量減少草莓炭疽病菌分離時的污染率。

      表1 不同分離部位和抗生素濃度下的污染率

      2.2 濕度對草莓炭疽病菌絲及分生孢子生長的影響

      用改良后的小容器空氣濕度調(diào)節(jié)法研究濕度對草莓炭疽病菌絲及分生孢子生長的影響,結(jié)果如表2所示,菌落直徑隨著濕度成比例增加,差異不顯著。濕度為80%時孢子量最大,70%時其次,都顯著高于另外2個濕度,100%的濕度產(chǎn)孢量最少。

      表2 不同濕度炭疽病菌絲及分生孢子的生長情況

      2.3 濕度和光照組合對草莓炭疽病分生孢子的影響

      圖1顯示,除了全黑暗培養(yǎng),其他光照強(qiáng)度下產(chǎn)孢量都是80%濕度高于70%,這與上面小容器空氣濕度調(diào)節(jié)法研究結(jié)果一致。其中,光照為252 lx時2種濕度下分生孢子的數(shù)量都顯著高于其他處理,其他處理間差異不顯著。

      圖1 濕度和光照組合處理對草莓炭疽病分生孢子的影響

      2.4 培養(yǎng)基及接種形態(tài)對草莓炭疽病菌絲及分生

      孢子的影響

      如圖2所示,從菌落直徑看,接種菌絲比接種孢子效果略好。但從分生孢子數(shù)量看,接種孢子顯著高于接種菌絲,其中PDA和PSA培養(yǎng)基沒有顯著差異。酵母培養(yǎng)基不適合用于膠孢炭疽菌的分生孢子培養(yǎng)。

      圖2 不同培養(yǎng)基及接種形態(tài)對草莓炭疽病菌絲及分生孢子的影響

      3 小結(jié)與討論

      從本研究結(jié)果看,以匍匐莖為接種材料,培養(yǎng)基中加氨芐青霉素 50 μg·mL-1和鏈霉素 50 μg·mL-1,能顯著減少草莓炭疽病菌分離時的污染率。以PDA或PSA為培養(yǎng)基,以孢子堆為接種材料,光照為252 lx,濕度為80%,是分生孢子產(chǎn)生的最佳條件。

      草莓根冠部直接與土壤接觸、葉片又相對容易感染其他病害,因此,病害癥狀明顯且細(xì)菌感染較少的匍匐莖是分離草莓炭疽病的較好部位。80%的濕度是產(chǎn)生分生孢子的最佳條件,這也是育苗后期高溫高濕條件下,炭疽病容易造成大面積死苗的原因。因此,控制子苗繁殖系數(shù)、挖除老苗,剝除老葉、殘葉等農(nóng)藝措施[9],可以盡量降低環(huán)境濕度,減少炭疽病的發(fā)生。PDA和PSA培養(yǎng)基對草莓炭疽病分生孢子的生長沒有顯著差異,與張海英等[4]的研究結(jié)果有較大差異。弱光培養(yǎng)下可以產(chǎn)生最大量的孢子,與張海英等[4]的研究結(jié)果較為一致,但與姚紅燕等[10]的結(jié)果略有不同。

      [1] 俞庚戍,丁峙峰,張成義,等.“紅頰”草莓苗期炭疽病藥劑防治研究 [J].中國南方果樹,2009,38(4):83-85.

      [2] 魏景超.真菌鑒定手冊 [M].上海:上??茖W(xué)技術(shù)出版社,1979:463-475.

      [3] Porta-Puglia A,Mifsud D. Firstrecord ofColletotrichum acutatum on s trawberry in Malta [J]. Journal of Plant Pathology,2006,88(2):228.

      [4] 張海英,張明會,劉志恒,等.草莓炭疽病病原鑒定及其生物學(xué)特性研究 [J].沈陽農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報,2007,38(3):317-321.

      [5] 任小杰,梁艷,陸金萍,等.上海地區(qū)草莓炭疽病病原鑒定 [J].植物病理學(xué)報,2008,38(3):325-328.

      [6] 俞庚戍,丁峙峰,張成義,等.草莓紅頰育苗期應(yīng)用多效唑防控炭疽病試驗 [J].浙江農(nóng)業(yè)科學(xué),2010(5):1029-1030.

      [7] 張雪,張志宏,劉月學(xué),等.木霉菌劑提高‘紅顏’草莓炭疽病抗性的效應(yīng) [J].西北農(nóng)業(yè)學(xué)報,2010,19(8):153-156.

      [8] 霍恒志,糜林,李金鳳,等.設(shè)施避雨育苗對紅頰草莓炭疽病的防治效果 [J].江西農(nóng)業(yè)學(xué)報,2009,21(9):93-94.

      [9] 楊肖芳,蔣桂華,鄒宜靜.草莓炭疽病防控育苗技術(shù)[J].上海蔬菜,2010(3):74-75.

      [10] 姚紅燕,王揚(yáng)軍,周金波,等.寧波地區(qū)草莓炭疽病的病原鑒定和生物學(xué)特性 [J].寧波農(nóng)業(yè)科技,2010(2):5-8.

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