腦出血患者血清丙烯醛含量的動(dòng)態(tài)變化及其意義

馮肖亞 呂涌濤 郇 英 劉 磊 孫良偉 趙修敏 陳興旺 趙永俊

(山東省交通醫(yī)院，山東 濟(jì)南 250031)

動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中發(fā)現(xiàn)丙烯醛與腦出血有關(guān)〔1〕,臨床上有關(guān)丙烯醛的研究較少。本研究動(dòng)態(tài)檢測(cè)68例急性高血壓腦出血患者的血清丙烯醛水平，探討其與腦出血量、出血部位、病情及預(yù)后之間的關(guān)系。

1 對(duì)象與方法

1.1研究對(duì)象 2009年1月至2010年12月山東省交通醫(yī)院神經(jīng)內(nèi)科收住院急性幕上高血壓腦出血患者68例為腦出血組，男38例，女30例；年齡42～79歲〔平均(60.3±10.6)〕歲；入組者均發(fā)病<24 h,均符合全國(guó)第四屆腦血管病學(xué)術(shù)會(huì)議修訂的高血壓性腦出血診斷標(biāo)準(zhǔn)，并經(jīng)頭顱CT檢查證實(shí)，其中伴有糖尿病10例。出血部位：殼核35例，丘腦8例，腦葉12例，尾狀核6例，殼核-丘腦7例。出血量5～100 ml，平均(46.3±18.5)ml。排除嚴(yán)重的心、肝、腎疾病及神經(jīng)系統(tǒng)其他疾病。選取系山東省交通醫(yī)院查體中心健康體檢者50例為對(duì)照組，男28例，女22例;年齡45～80〔平均(57.2±11.3)〕歲。無(wú)心、肝、腎疾病，經(jīng)神經(jīng)系統(tǒng)檢查及頭顱CT檢查正常。

1.2丙烯醛檢測(cè)方法 腦出血患者分別于發(fā)病第1、3、7、14天采靜脈血3 ml，正常對(duì)照組在體檢日清晨空腹采靜脈血3 ml，在4℃、2 300 r/min離心10 min，分離血清，吸取上清液，裝EB管，置于-80℃冰箱保存待測(cè)。

1.3試劑 丙烯醛標(biāo)準(zhǔn)品(純度98%)、丙烯醛-DNPH衍生物的標(biāo)準(zhǔn)品(純度為98%)均購(gòu)自Sigma公司,2,4-二硝基苯肼(DNPH),AR;二氯甲烷,AR;甲醇,色譜純;乙腈,色譜純;實(shí)驗(yàn)用水均為去離子水，MT型樣品凈化富集柱(BOND ELUTEC18;1500MG),購(gòu)自天津開發(fā)區(qū)富集技術(shù)發(fā)展公司。

1.4儀器及色譜條件 島津LC-4A高效液相色譜儀,二極陣列檢測(cè)器,工作波長(zhǎng)為360 nm,C-R2AX色譜數(shù)據(jù)處理機(jī),BAS-C18色譜柱(250.0 mm×4.6 mm)。流動(dòng)相為甲醇-乙腈-水(70∶12∶18，V/V)，流速1 ml/min，進(jìn)樣量10 μl,柱溫40℃。

1.5實(shí)驗(yàn)步驟 取0.5 ml血清,加入2 ml醋酸鹽緩沖液(pH=5),再加入2 ml的DNPH飽和水溶液,振搖,室溫下反應(yīng)1 h；然后,以注射器吸取2 ml此反應(yīng)液,經(jīng)C18凈化柱富集純化,再以甲醇洗脫富集物,搖勻,進(jìn)行色譜分析,標(biāo)準(zhǔn)曲線法定量。

1.6病情及預(yù)后判斷 患者入院時(shí)記錄入院時(shí)間、入院時(shí)血壓水平及檢測(cè)血糖水平。發(fā)病3 d內(nèi)進(jìn)行神經(jīng)功能缺損(NDS)評(píng)分，輕型<15分，中型16～30分，重型31～45分。發(fā)病后3個(gè)月隨訪，由經(jīng)過(guò)專門培訓(xùn)的專業(yè)技術(shù)人員采用改良的Rankin評(píng)分(mRS)評(píng)價(jià)神經(jīng)功能轉(zhuǎn)歸及殘障水平，mRS評(píng)分3～5分為有較嚴(yán)重傷殘，0～2分為僅有輕度殘疾或無(wú)遺留癥狀。

2 結(jié) 果

2.1兩組血清丙烯醛水平比較 腦出血組患者血清丙烯醛水平均在發(fā)病第1天即明顯升高為(1.26±0.31)ng/ml，第3天為(1.96±0.53)ng/ml(P<0.05)，第7天達(dá)到高峰(3.23±0.87)ng/ml，第14天(2.14±0.60)ng/ml仍高于正常對(duì)照組〔(0.58±0.17)ng/ml,P<0.05〕。

2.2血清丙烯醛水平與出血量、腦水腫體積、病情及神經(jīng)功能的關(guān)系 經(jīng)相關(guān)分析顯示腦出血組第7、14天血清丙烯醛水平與最終出血量具有明顯相關(guān)性。腦出血組血清丙烯醛水平均與腦水腫體積、NDS評(píng)分、mRS評(píng)分呈正相關(guān)，以第7天關(guān)系最為密切。見表1。

2.3血清丙烯醛水平與血腫擴(kuò)大的關(guān)系 腦出血組中有12例發(fā)生了血腫擴(kuò)大,5例死亡,血腫擴(kuò)大的12例患者第1天血清丙烯醛水平為(2.01±0.65)ng/ml，其余56例第1天血清丙烯醛水平為(1.26±0.31)ng/ml，兩者具有顯著差異(P<0.01)。說(shuō)明血清丙烯醛水平與血腫擴(kuò)大具有相關(guān)性，第1天丙烯醛水平高者血腫擴(kuò)大的風(fēng)險(xiǎn)較高。

3 討 論

丙烯醛是精胺/亞精胺代謝的主要毒性產(chǎn)物之一，在體內(nèi)以兩種形式存在，一是游離狀態(tài)，二是和蛋白結(jié)合形成蛋白共軛丙烯醛。本研究顯示丙烯醛的水平和腦水腫體積呈正相關(guān)，說(shuō)明丙烯醛能夠影響腦水腫的形成。有研究表明丙烯醛可以引起谷胱甘肽水平下降，進(jìn)而誘導(dǎo)活性氧(ROS)的產(chǎn)生〔1～3〕。ROS是生物體內(nèi)的氧自由基，包括氧和含氧的高反應(yīng)活性分子(如超氧化物陰離子、組織過(guò)氧化物和自由基等)，ROS可引起脂質(zhì)過(guò)氧化，造成DNA鏈斷裂和氧化性損傷、蛋白-蛋白交聯(lián)、蛋白-DNA交聯(lián)等。由于大部分的反應(yīng)都在由膜結(jié)構(gòu)提供的平臺(tái)上進(jìn)行，因此，脂質(zhì)過(guò)氧化對(duì)膜的損傷是造成生物體氧化損傷的主要原因，它使膜的通透性增加，膜結(jié)構(gòu)及其功能受到損傷；有研究表明丙烯醛可引起細(xì)胞內(nèi)鈣超載〔4〕，而胞內(nèi)鈣超負(fù)荷是各種原因引起細(xì)胞死亡的最終必經(jīng)之路；以上可能是丙烯醛導(dǎo)致腦細(xì)胞水腫的原因。同時(shí)血清丙烯醛的水平和腦出血患者的病情和預(yù)后有關(guān)，這和以往的研究結(jié)果相同〔5〕，本研究顯示腦出血患者血清丙烯醛水平越高，患者的腦水腫面積越大，腦細(xì)胞損傷越嚴(yán)重，病情就愈嚴(yán)重；高含量丙烯醛持續(xù)時(shí)間越長(zhǎng)，患者預(yù)后越差。本研究還發(fā)現(xiàn)丙烯醛和再出血具有相關(guān)性，腦出血第1天丙烯醛含量高者血腫擴(kuò)大的風(fēng)險(xiǎn)較大，腦卒中后丙烯醛主要來(lái)自多胺的代謝，但丙烯醛還是脂質(zhì)過(guò)氧化的產(chǎn)物，丙烯醛含量高的患者，同時(shí)也說(shuō)明脂質(zhì)過(guò)氧化反應(yīng)較重，脂質(zhì)過(guò)氧化產(chǎn)生丙烯醛，丙烯醛誘導(dǎo)脂質(zhì)過(guò)氧化反應(yīng)，形成惡性循環(huán)，對(duì)血管內(nèi)膜和細(xì)胞膜的損傷就越重，血管就容易破裂。本研究發(fā)現(xiàn)第1天丙烯醛含量>2.3 ng/ml腦出血患者均發(fā)生了血腫擴(kuò)大。總之，腦出血患者血清丙烯醛明顯升高，可以作為腦卒中的血清學(xué)標(biāo)志物〔6，7〕，而且和出血量、腦水腫體積、病情、預(yù)后及血腫擴(kuò)大相關(guān)，這為腦出血的治療和血腫擴(kuò)大的預(yù)防提供新的契機(jī)。

4 參考文獻(xiàn)

1Di Napoli M,Papa F,Bocola V.C-reactive protein in ischemic stroke:an independent prognostic factor〔J〕.Stroke,2001；32(4):917-24.

2Di Napoli M,Papa F,Bocola V.Prognostic influence of increased C-reactive protein and fibrinogen levels in ischemic stroke〔J〕.Stroke,2001；32(1):133-8.

3Di Napoli M,Papa F.Clinical use of C-reactive protein for prognostic stratification in ischemic stroke:has the time come for including it in the patient risk profile〔J〕?Stroke,2003；34(2):375-6.

4Curb JD,Abbott RD,Rodriguez BL,etal.C-reactive protein and the future risk of thromboembolic stroke in healthy men〔J〕.Circulation,2003；107(15):2016-20.

5Muir KW,Weir CJ,Alwan W,etal.C-reactive protein and outcome after ischemic stroke〔J〕.Stroke,1999；30(5):981-5.

6Winbeck K,Poppert H,Etgen T,etal.Prognostic relevance of early serial C-reactive protein measurements after first ischemic stroke〔J〕.Stroke,2002；33(10):2459-64.

7Agrawal A,Shrive AK,Greenhough TJ,etal.Topology and structure of the C1q-binding site on C-reactive protein〔J〕.J Immunol,2001；166(6):3998-4004.