李衛(wèi)先，李福元，李 達(dá)，王議憶，管 弦

（湖南中醫(yī)藥高等?？茖W(xué)校，湖南 株洲 412012）

不同中藥炮制品組成的參苓白術(shù)散對腸道菌群影響對比研究

李衛(wèi)先，李福元，李 達(dá)，王議憶，管 弦

（湖南中醫(yī)藥高等?？茖W(xué)校，湖南 株洲 412012）

目的：觀察不同中藥炮制品組成的參苓白術(shù)散對小鼠模型腸道菌群影響。方法：小鼠用100%大黃水浸液灌胃造脾虛證模型，然后用不同中藥炮制品組成的參苓白術(shù)散煎液。結(jié)果：模型小鼠腸道雙歧桿菌、乳桿菌及類桿菌等厭氧菌含量顯著下降（P＜0.01），用土炒白術(shù)、土炒山藥或麩炒白術(shù)、麩炒山藥組成的參苓白術(shù)散灌胃后，3種厭氧菌含量均恢復(fù)正常，且雙歧桿菌明顯超過造模前水平（P＜0.05）。需氧菌菌群中，腸球菌含量造模前后無顯著性差異，而用土炒白術(shù)、土炒山藥或麩炒白術(shù)、麩炒山藥組成的參苓白術(shù)散后則下降了1個數(shù)量級。大腸桿菌在造模完成時含量明顯上升（P＜0.01），用土炒白術(shù)、土炒山藥組成的參苓白術(shù)散后含量恢復(fù)造模前水平。造模后及用中藥后葡萄球菌含量變化不明顯。結(jié)論：土炒白術(shù)、土炒山藥或麩炒白術(shù)、麩炒山藥組成的參苓白術(shù)散能促進(jìn)雙歧桿菌并抑制腸球菌，并且可以用黨參代替人參。黨參、土炒白術(shù)、土炒山藥等組成的參苓白術(shù)散抑制大腸桿菌效果較好。

不同炮制品；參苓白術(shù)散；小鼠；厭氧菌群；需氧菌群

參苓白術(shù)散來源于《太平惠民和劑局方》，由人參、炒白術(shù)、茯苓、甘草、炒山藥、炒白扁豆、蓮子肉、炒薏苡仁、砂仁、桔梗組成，棗湯調(diào)服。臨床用其治療脾虛泄瀉時大多用黨參代替人參。為觀察中藥炮制對其藥效的影響，筆者用大黃脾虛造模［1］，然后選用不同中藥炮制品組方的參苓白術(shù)散進(jìn)行干預(yù)，探討苦寒瀉下藥物對腸道菌群的影響，以及不同中藥炮制品組方的參苓白術(shù)散的微生態(tài)調(diào)節(jié)作用，為完善脾虛證實質(zhì)研究及中藥復(fù)方微生態(tài)調(diào)整的藥效機(jī)制提供實驗依據(jù)。

1 材 料

大腸桿菌、雙歧桿菌、葡萄球菌、乳酸桿菌、類桿菌、腸球菌的培養(yǎng)基，購自中國藥品生物制品鑒定所。

實驗動物：昆明種小鼠，清潔級，體質(zhì)量18～22g，雌雄各半，由湖南省實驗動物中心提供，動物合格證號SCXK（湘）2009-0012。SD大鼠，雌雄各半，由湖南省實驗動物中心提供，動物合格證號SCXK（湘）2009-0012。動物養(yǎng)于湖南中醫(yī)藥高等?？茖W(xué)校動物實驗中心，自由飲用濾過凈化處理水。

藥材：人參、茯苓、白術(shù)、山藥、白扁豆、蓮子、薏苡仁、砂仁、桔梗、甘草、黨參、大黃等均由湖南中醫(yī)藥高等?？茖W(xué)校附屬一醫(yī)院提供，按《中國藥典》（2010，一部）鑒定為合格藥材。

樣品分組：①A組：各組成成分均生品的參苓白術(shù)散的水煎液。人參100g，茯苓100g，白術(shù)100g，山藥100g，白扁豆75g，蓮子肉50g，薏苡仁150g，砂仁50g，桔梗50g，甘草100g，②B組：為參苓白術(shù)散中白術(shù)、山藥的土炒品、薏苡仁麩炒、甘草蜜炙時參苓白術(shù)散水煎液、其他各藥及用量同A組。③C組：為白術(shù)、山藥、薏苡仁的麩炒品、甘草蜜炙時參苓白術(shù)散水煎液、其他各藥及用量同A組。④D組：黨參代人參且各組成成分均為生品、其他各藥及用量同A組參苓白術(shù)散水煎液。⑤E組：黨參代人參且白術(shù)、山藥的土炒品、薏苡仁麩炒、甘草蜜炙、其他各藥及用量同A組參苓白術(shù)散水煎液。⑥F組：黨參代人參且白術(shù)、山藥、薏苡仁的麩炒品、甘草蜜炙、其他各藥及用量同A組參苓白術(shù)散水煎液。

樣品提?。焊鹘M藥按量稱取各藥后常溫浸泡（25℃）0.5h，加蒸餾水2 000m L，煮沸后文火煎30min，過濾藥液，藥渣加蒸餾水再煎煮25min，合并兩次濾液，濃縮至875mL，制成參苓白術(shù)散（g）與水煎液（m L）的比例為1︰1水煎液。100%生大黃制劑，將生大黃粉碎，用5倍量水浸泡30min后煎煮15min，過濾，靜置，取上清液，用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀在50℃下回收水，即得。

2 方 法

造模：將雌雄小白鼠隨機(jī)分成造模組與治療組共9組，每組雌雄各10只。灌胃大黃煎汁造模8天，獲得脾虛證模型［1］。然后按成人單位體質(zhì)量25倍量給各治療組灌胃不同炮制品的各種參苓白術(shù)散煎液7天。造模組同期灌胃生理鹽水，使其成為自然恢復(fù)組。

標(biāo)本采集與培養(yǎng)：給藥10天后每只小鼠被迫排便，接于事先稱重帶有玻璃珠的無菌小瓶內(nèi)，再次稱重，按標(biāo)本質(zhì)量，然后用無菌生理鹽水（0.85%）作對數(shù)稀釋，取10-6、10-7、10-8稀釋液，用微量移液器取20μL滴于培養(yǎng)基表面。每個稀度滴3滴，同一培養(yǎng)皿上滴種3個稀釋度。然后迅速置于厭養(yǎng)培養(yǎng)箱中培養(yǎng)72h。腸道需氧菌群檢測時糞便標(biāo)本依預(yù)試結(jié)果選取10-4、10-5、10-6（EC、SP）或10-5、10-6，10-7（EMB）稀釋度，接種后在需氧條件下37℃培養(yǎng)24h之后計數(shù)典型菌落。計算出1g標(biāo)本中的菌含量（CFU/g標(biāo)本），CFU/g標(biāo)本=50×稀釋倍數(shù)×1/標(biāo)本質(zhì)量。結(jié)果均取常用對數(shù)值LgCFU/g。

3 結(jié) 果

一般體征：小鼠在給予大黃水煎劑灌胃第2d，出現(xiàn)便溏，以后逐漸出現(xiàn)腹瀉、納呆、體質(zhì)量減輕、畏寒、四肢無力、活動減少、毛枯槁等脾虛癥狀。隨著造模的進(jìn)行，上述癥狀逐漸加重。造模1周后自然恢復(fù)鼠的脾虛證狀基本保持不變。各治療組隨著治療的進(jìn)行，B、E組即由人參或黨參代人參與白術(shù)、山藥的土炒品組方的參苓白術(shù)散組脾虛證狀明顯改善，至服藥完畢時一般體征恢復(fù)正常。

厭氧菌檢測結(jié)果見表1。

表1 參苓白術(shù)散對小鼠脾虛模型腸道厭氧菌的影響 （±s）

表1 參苓白術(shù)散對小鼠脾虛模型腸道厭氧菌的影響 （±s）

注：與造模前比較，*P＜0.05、**P＜0.01；與造模后比較，△P＜0.05、△△P＜0.01。

菌種 檢測時間 平均含量/（lgCFU/g）菌種檢測時間 平均含量/（lgCFU/g）雙歧桿菌菌種檢測時間 平均含量/（lgCFU/g）12.45±0.63 11.11±0.50*11.26±0.48 11.31±0.73 12.40±0.69△△12.40±0.60△△11.30±0.58 12.68±0.63△△12.47±0.60△△造模前造模后自然恢復(fù)后A組治療后B組治療后C組治療后D組治療后E組治療后F組治療后12.31±0.61 11.16±0.53*11.20±0.49 11.30±0.53 12.86±0.60*△△12.81±0.68*△△11.32±0.59 12.98±0.37△△12.88±0.38*△△乳桿菌造模前造模后自然恢復(fù)后A組治療后B組治療后C組治療后D組治療后E組治療后F組治后12.61±0.81 11.10±0.43*11.49±0.51 11.60±0.63 12.43±0.65△△12.39±0.68△△11.62±0.48 12.63±0.58△△12.58±0.63△△類桿菌造模前造模后自然恢復(fù)后A組治療后B組治療后C組治療后D組治療后E組治療后F組治后

需氧菌檢測結(jié)果見表2。

表2 參苓白術(shù)散對小鼠脾虛模型腸道厭氧菌的影響 （±s）

表2 參苓白術(shù)散對小鼠脾虛模型腸道厭氧菌的影響 （±s）

注：與造模前比較，*P＜0.05、**P＜0.01；與造模后比較，△P＜0.05、△△P＜0.01。

菌種檢測時間平均含量/（lgCFU/g）菌種檢測時間平均含量/（lgCFU/g）大腸桿菌菌種檢測時間平均含量/（lgCFU/g）9.14±0.71 9.43±0.66 9.38±0.71 9.30±0.59 8.31±0.65 8.55±0.48 9.13±0.51 8.18±0.67*△△8.36±0.61造模前造模后自然恢復(fù)后A組治療后B組治療后C組治療后D組治療后E組治療后F組治療后10.35±0.71 11.84±0.63*11.75±0.57 11.66±0.63 11.05±0.70△11.46±0.78△11.54±0.56 10.31±0.67△△11.34±0.58△葡萄球菌造模前造模后自然恢復(fù)后A組治療后B組治療后C組治療后D組治療后E組治療后F組治療后9.52±0.81 9.61±0.67 9.65±0.75 9.43±0.71 9.41±0.70 9.45±0.73 9.50±0.56 9.37±0.64 9.51±0.67腸球菌造模前造模后自然恢復(fù)后A組治療后B組治療后C組治療后D組治療后E組治療后F組治療后

4 討 論

研究顯示，厭氧菌減少是腸道菌群失調(diào)的基本改變之一［2］。值得注意的是，由土炒白術(shù)、土炒山藥，或麩炒白術(shù)及麩炒山藥組方的參苓白術(shù)散對雙歧桿菌這一重要的健康因子表現(xiàn)出明顯的扶植作用。通過扶植益生菌而間接排斥病原菌或條件致病菌，達(dá)到扶正祛邪之功效，是微生態(tài)調(diào)節(jié)劑的基本作用途徑之一。厭氧菌的顯著減少，與大腸桿菌等需氧菌的明顯增加，共同構(gòu)成脾虛證腸道細(xì)菌菌群失調(diào)。大腸桿菌是一種典型的正常需氧菌群成員，但亦是引起菌群失調(diào)癥的重要原因菌，其致病性與其數(shù)量的上升程度有關(guān)。研究發(fā)現(xiàn)，由土炒白術(shù)、土炒山藥，或麩炒白術(shù)及麩炒山藥組方的參苓白術(shù)散能促進(jìn)雙歧桿菌并抑制腸球菌的作用，并且可以用黨參代替人參。使用參苓白術(shù)散抑制大腸桿菌時建議使用由黨參代人參與土炒白術(shù)、土炒山藥等藥物組方的參苓白術(shù)散效果更好。

［1］張印，竇永起.白術(shù)不同炮制品對小鼠小腸運動的影響［J］.國醫(yī)論壇，2005，20（5）：13-14.

［2］任光友，張貴林，盧素琳，等.四君子湯對動物腸菌失調(diào)及正常胃腸功能的藥理研究［J］.中成藥，2000，22（7）：504-506.

Objective: To observe the effect of different processed products of Shenlingbaizhu Powder on intestinal flora of mice models. Method: The mice models of spleen deficiency were induced with 100% liquid rhubarb water extract and taken the decoction of different processed products of Shenlingbaizhu Powder. Result: The content of anaerobic bacteria such as bifidobacterium, lactobacillus, bacteroides etc. in intestine of model mice decreased significantly（P<0.01）. After the mice were treated by intragastric administration with Shenlingbaizhu Powder composed of soil-baked atractylodes macrocephala koidz and soil-baked radix dioscoreae oppositae or composed of stir-baked atractylodes macrocephala koidz and stir-baked radix dioscoreae oppositae, the content of three types of anaerobic bacteria all returned to normal and the level of bifidobacterium was superior to that of pre-model mice（P<0.05）. Among the aerobic bacteria, there was no significant difference in the content of enterococcus between pre modeling and post modeling, but after the mice were treated by intragastric administration with Shenlingbaizhu Powder composed of soil-baked atractylodes macrocephala koidz and soil-baked radix dioscoreae oppositae or composed of stirbaked atractylodes macrocephala koidz and stir-baked radix dioscoreae oppositae, the content of enterococcus decreased 1order of magnitude. After the models were established, the content of escherichia coli increased obviously（P<0.01）. After the mice were treated by intragastric administration with Shenlingbaizhu Powder composed of soil-baked atractylodes macrocephala koidz and soil-baked radix dioscoreae oppositae, the content of scherichia coli returned to the level of pre modeling. The content of staphylococcus didn’t change obviously after the mice models were established or the mice were given Chinese herbs.Conclusion: Shenlingbaizhu Powder composed of soil-baked Atractylodes macrocephala koidz and soil-baked Radix Dioscoreae Oppositae or composed of stir-baked Atractylodes macrocephala koidz and stir-baked Radix Dioscoreae Oppositae could improve bifidobacterium and inhibit enterococci. Gingeng could be replaced by Codonopsis pilosula in Shenlingbaizhu Powder.Shenlingbaizhu Powder composed of Codonopsis pilosula, soil-baked Atractylodes macrocephala koidz and soil-baked Radix Dioscoreae Oppositae has good effect in inhibting escherichia coli.

different processed products；Shenlingbaizhu Powder；mouse; intestinal flora; aerobe flora

R283.1

B

1004-2814（2014）05-0381-03

2013-12-18

觀察與研究