， ，，，，，，，，

（廣州市動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心，廣東廣州 510440）

Duan Xiaodong，Shen Dan，Zhang Haiming，Zhang Haibing，Zheng Lilan，Yang Suijuan，Zhong Zhuoling，Yang Qiufei，Zhong Jinhui，Zhu Jiancui

（Guangzhou Animal Disease Prevention and Control Center，Guangzhou，Guangdong 510440）

2013年廣州市活禽農(nóng)貿(mào)市場(chǎng)禽流感流行病學(xué)調(diào)查

段曉冬，沈丹，張海明，張海冰，鄭麗蘭，楊穗娟，鐘卓玲，楊秋菲，鐘錦輝，朱建翠

（廣州市動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心，廣東廣州 510440）

[目的]了解廣州市活禽農(nóng)貿(mào)市場(chǎng)禽流感病毒的分布和流行情況，科學(xué)制定禽流感的防控措施，于2013年3-11月對(duì)廣州市91個(gè)次的活禽農(nóng)貿(mào)市場(chǎng)進(jìn)行了禽流感監(jiān)測(cè)，[方法]調(diào)查共采集了1064份活禽口咽/泄殖腔棉拭子和環(huán)境拭子，并用熒光RT-PCR方法進(jìn)行了檢測(cè)，[結(jié)果]發(fā)現(xiàn)通用型、H7N9和H9亞型禽流感陽(yáng)性率分別為46.05%、0.09%和19.83%。其中，鴨棉拭子樣品中通用型禽流感陽(yáng)性率最高，達(dá)到了58.14%，其次為雞棉拭子、鵝棉拭子和環(huán)境棉拭子樣品，分別為46.28%、42.85%和35.19%；H9亞型禽流感陽(yáng)性率最高的是雞源樣品，達(dá)到了28.88%，其次為鴨棉拭子和環(huán)境棉拭子樣品，分別為12.56%和5.58%；僅從1份雞棉拭子樣品中檢測(cè)到H7N9亞型禽流感病毒陽(yáng)性。[結(jié)論]本次調(diào)查顯示，廣州地區(qū)活禽農(nóng)貿(mào)市場(chǎng)存在較為嚴(yán)重的禽流感污染情況，需立即采取有效的防控措施以降低本地區(qū)發(fā)生禽流感以及人感染禽流感的風(fēng)險(xiǎn)。

廣州；活禽農(nóng)貿(mào)市場(chǎng)；禽流感；流行病學(xué)調(diào)查

2013年2月，我國(guó)上海地區(qū)曾發(fā)生全球首例人感染H7N9亞型流感事件[1]。截至2014年2月14日，我國(guó)十多個(gè)省市共有240人感染H7N9禽流感病毒，其中60人死亡，這不僅造成了重大的公共安全問(wèn)題[2，3]，也給我國(guó)禽業(yè)造成了巨大的經(jīng)濟(jì)損失[4]。與H5N1、H7N7等亞型禽流感病毒感染家禽后會(huì)表現(xiàn)明顯的臨床癥狀并造成死亡的情況不同，H7N9亞型禽流感病毒感染家禽后不表現(xiàn)或只表現(xiàn)極其輕微的臨床癥狀[5]，這意味著H7N9禽流感可以在家禽中一直存在而不被發(fā)現(xiàn)，并可通過(guò)各種途徑感染人。H9N2亞型禽流感雖然是低致病性禽流感，但由于其分布廣泛并能引起家禽的免疫抑制，一旦其與其他病原混合感染或造成繼發(fā)感染，也可引起禽類的高發(fā)病率和高死亡率[6]。而且，H9N2除感染禽類外，還可以突破種間屏障感染人類[7，8]。另外，研究顯示，H9N2禽流感病毒為1997年首次感染人的香港H5N1禽流感病毒和本次的H7N9禽流感病毒等提供了內(nèi)部基因[1，9]，提示H9N2在禽流感遺傳、演化過(guò)程中起了十分重要的作用。

活禽市場(chǎng)一直被認(rèn)為在禽流感病毒的存留、繁殖以及傳播過(guò)程中扮演著十分重要的角色[10，11]，并且是人感染 H5N1、H7N9 等禽流感的高風(fēng)險(xiǎn)區(qū)域[12-14]。廣州所在的華南地區(qū)是“世界流感中心”之一[15]，所在地居民喜歡在活禽農(nóng)貿(mào)市場(chǎng)挑選現(xiàn)宰活禽的消費(fèi)習(xí)慣，更進(jìn)一步增加了人通過(guò)活禽市場(chǎng)感染禽流感的風(fēng)險(xiǎn)。有鑒于此，筆者通過(guò)對(duì)2013年廣州市部分活禽農(nóng)貿(mào)市場(chǎng)的家禽和環(huán)境進(jìn)行的禽流感監(jiān)測(cè)，分析了該地區(qū)禽流感的分布和流行狀況，以期能為科學(xué)制定禽流感防控措施提供技術(shù)依據(jù)。

1 材料和方法

1.1 主要試劑

5×MagMAXTM96 RNA提取試劑盒和A型動(dòng)物流感熒光RT-PCR檢測(cè)試劑盒購(gòu)自Ambion公司；一步法熒光RT-PCR試劑盒Super Script Ⅲ Platinum one-step qRT-PCR購(gòu)自Invitrogen公司；H9亞型禽流感熒光RT-PCR檢測(cè)試劑盒購(gòu)自深圳太太基因工程有限公司；H7N9亞型禽流感病毒檢測(cè)用引物由美國(guó)Invitrogen生命技術(shù)公司合成。

1.2 樣品采集

按隨機(jī)抽樣的方式，對(duì)活禽農(nóng)貿(mào)市場(chǎng)的雞、鴨、鵝、鴿等活禽及環(huán)境樣品進(jìn)行采集，其中每只活禽同時(shí)采集口咽和泄殖腔拭子并放入同一個(gè)EP管中，環(huán)境樣品采集于飲水槽、污水、糞便、砧板、垃圾箱等區(qū)域。所有棉拭子放入裝有滅菌PBS的2ml EP管中，-20℃凍存?zhèn)溆谩?/p>

1.3 檢測(cè)方法

通用型禽流感病毒檢測(cè)采用A型動(dòng)物流感熒光RT-PCR檢測(cè)試劑盒；H7N9亞型禽流感病毒檢測(cè)采用世界衛(wèi)生組織公布的H7N9亞型禽流感病毒檢測(cè)引物結(jié)合一步法熒光RT-PCR檢測(cè)試劑盒進(jìn)行檢測(cè)；H9亞型禽流感病毒檢測(cè)采用H9亞型禽流感熒光RT-PCR檢測(cè)試劑盒。首先對(duì)采集的樣品進(jìn)行通用型禽流感病毒的檢測(cè)，再對(duì)陽(yáng)性樣品進(jìn)行H7N9和H9亞型禽流感病毒的檢測(cè)。

1.4 數(shù)據(jù)分析和統(tǒng)計(jì)

數(shù)據(jù)以Excel、SPSS 20和Epi Info 6.0進(jìn)行分析和統(tǒng)計(jì)，其中發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)比以pearson卡方進(jìn)行計(jì)算。

2 結(jié)果

2.1 總體檢測(cè)情況

自2013年3—11月，我們對(duì)廣州地區(qū)11個(gè)區(qū)縣活禽農(nóng)貿(mào)市場(chǎng)進(jìn)行了91個(gè)次的采樣調(diào)查，共采集1064份活禽口咽/泄殖腔棉拭子和環(huán)境拭子，檢測(cè)到通用型禽流感病毒490份，陽(yáng)性率為46.05%；H7N9亞型禽流感病毒1份，陽(yáng)性率為0.09%；H9亞型禽流感病毒211份，陽(yáng)性率為19.83%。

2.2 空間分布

所采集的1064份樣品分布于廣州市的11個(gè)區(qū)縣，各區(qū)之間檢測(cè)陽(yáng)性率差異較大，其中通用型禽流感和H9亞型禽流感陽(yáng)性率最高的分別為番禺和白云，具體各區(qū)縣的采樣情況和陽(yáng)性率見(jiàn)表1。

表1 不同區(qū)縣通用型禽流感和H9亞型禽流感陽(yáng)性率

2.3 時(shí)間分布

在3—8月和11月分別采集活禽口咽/泄殖腔棉拭子以及環(huán)境棉拭子，分別進(jìn)行通用型禽流感病毒、H7N9和H9亞型禽流感病毒的檢測(cè)，結(jié)果不同月份的通用通用型禽流感和H9亞型禽流感陽(yáng)性率差異較大，其中通用型禽流感和H9亞型禽流感陽(yáng)性率最高的月份分別為6月和7月，具體見(jiàn)表2。

表2 不同采樣時(shí)間的通用型禽流感和H9亞型禽流感陽(yáng)性率

2.4 種間分布

對(duì)不同種類活禽以及環(huán)境樣品進(jìn)行了采樣檢測(cè)，結(jié)果通用型禽流感和H9亞型禽流感陽(yáng)性率最高的分別為鴨棉拭子和雞棉拭子，其中未從鴿子和鵝棉拭子中檢出通用型禽流感病毒和H9亞型禽流感病毒。另外，分別以雞棉拭子通用型禽流感和H9亞型禽流感檢測(cè)結(jié)果為參考，分別對(duì)其他種類活禽以及環(huán)境樣品的陽(yáng)性率進(jìn)行發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)比分析，結(jié)果鴨棉拭子中存留通用型禽流感病毒的風(fēng)險(xiǎn)是雞的1.26倍，而且差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，其他發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)比具體見(jiàn)表3和表4。

表3 不同種類活禽通用型禽流感陽(yáng)性率和發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)比

表4 不同種類活禽H9亞型禽流感陽(yáng)性率和發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)比

3 討論

活禽農(nóng)貿(mào)市場(chǎng)是各種禽類的聚集地，不同種類的活禽以及不同來(lái)源、不同批次的活禽在農(nóng)貿(mào)市場(chǎng)的檔口內(nèi)混養(yǎng)，再加上活禽農(nóng)貿(mào)市場(chǎng)衛(wèi)生條件較差，不僅有利于禽流感病毒的繁殖，也為其演化和變異提供了有利條件[16]。而我國(guó)南方地區(qū)的居民又喜歡在活禽農(nóng)貿(mào)市場(chǎng)挑選活禽、現(xiàn)場(chǎng)宰殺的習(xí)慣，又增加了人通過(guò)活禽農(nóng)貿(mào)市場(chǎng)感染禽流感的風(fēng)險(xiǎn)[17]。目前的研究也認(rèn)為[18，19]，活禽市場(chǎng)是人感染禽流感一個(gè)非常重要的危險(xiǎn)因素，而活禽市場(chǎng)的關(guān)閉使人感染H7N9禽流感病例的下降又從另一方面證明了活禽市場(chǎng)與人感染禽流感的直接聯(lián)系[20]。但是，目前國(guó)內(nèi)特別是華南地區(qū)對(duì)活禽農(nóng)貿(mào)市場(chǎng)的禽流感監(jiān)測(cè)相對(duì)較少，為了解本地區(qū)活禽農(nóng)貿(mào)市場(chǎng)活禽以及環(huán)境的禽流感污染情況并提出有針對(duì)性的防控措施，我們開(kāi)展了本次調(diào)查。

本研究對(duì)廣州地區(qū)11個(gè)區(qū)縣的91個(gè)次活禽農(nóng)貿(mào)市場(chǎng)進(jìn)行了監(jiān)測(cè)采樣，并對(duì)采集的不同種類的活禽棉拭子以及環(huán)境樣品進(jìn)行了通用型禽流感病毒、H7亞型和H9亞型禽流感病毒的病原學(xué)檢測(cè)，結(jié)果通用型和H9亞型禽流感病毒總陽(yáng)性率分別達(dá)到了46.05%和19.83%，比以往的報(bào)道[17，21]要高，可能與調(diào)查的地區(qū)、時(shí)間和對(duì)象不同等因素相關(guān)。在監(jiān)測(cè)采樣過(guò)程中，我們也對(duì)采樣的活禽農(nóng)貿(mào)市場(chǎng)進(jìn)行了活禽來(lái)源的調(diào)查，發(fā)現(xiàn)這些市場(chǎng)的活禽大部分來(lái)自于廣州市幾大批發(fā)市場(chǎng)?；钋蒉r(nóng)貿(mào)市場(chǎng)如此高的禽流感陽(yáng)性率，與我們2013年對(duì)廣州市幾大活禽批發(fā)市場(chǎng)的禽流感監(jiān)測(cè)結(jié)果基本一致，提示廣州市的活禽農(nóng)貿(mào)市場(chǎng)存在較高的發(fā)生禽流感以及人通過(guò)活禽市場(chǎng)感染禽流感的風(fēng)險(xiǎn)。另外，我們只在1個(gè)活禽農(nóng)貿(mào)市場(chǎng)的1份雞棉拭子中檢測(cè)到H7亞型禽流感病毒，提示我市雖然存在人通過(guò)活禽農(nóng)貿(mào)市場(chǎng)感染H7N9的風(fēng)險(xiǎn)，但風(fēng)險(xiǎn)較低，這與2013年我市未發(fā)生人感染H7N9禽流感的情況一致。

從活禽農(nóng)貿(mào)市場(chǎng)監(jiān)測(cè)結(jié)果來(lái)看，不同種類活禽樣品之間的通用型禽流感和H9亞型禽流感陽(yáng)性率存在較大的差異，其中雞源樣品中通用型和H9亞型禽流感病毒陽(yáng)性率均很高，與湖南地區(qū)活禽市場(chǎng)的監(jiān)測(cè)結(jié)果基本一致[21]，再加上唯一的1份H7亞型禽流感陽(yáng)性也是在雞源樣品中檢測(cè)到，提示雞在本地區(qū)禽流感存留、傳播甚至遺傳和變異中起著十分重要的作用。我們?cè)邙喢奘米又袡z測(cè)到非常高的通用型禽流感陽(yáng)性率，風(fēng)險(xiǎn)分析發(fā)現(xiàn)，鴨發(fā)生禽流感的風(fēng)險(xiǎn)是雞的1.26倍。值得注意的是，無(wú)論是在鴨還是鵝源樣品中，均存在通用型禽流感陽(yáng)性率較高而H9亞型禽流感陽(yáng)性率較低的情況，提示水禽中存在其他亞型的禽流感病毒。由于包括鴨、鵝在內(nèi)的水禽不僅是禽流感病毒的儲(chǔ)存庫(kù)[22]，還是不同亞型禽流感病毒間基因交換的重要載體[23，24]，其在本地區(qū)禽流感病毒傳播、演化和變異中的作用有待于進(jìn)一步研究。

雖然我們未從鴿子棉拭子中檢測(cè)到任何禽流感病毒，但是由于采樣所限而只進(jìn)行了3份樣品的檢測(cè)，不能說(shuō)明本地區(qū)農(nóng)貿(mào)市場(chǎng)的鴿子中不存在禽流感病毒。另外，我們還從環(huán)境樣品中檢測(cè)到較高數(shù)量的通用型禽流感病毒和H9亞型禽流感病毒，其中通用型禽流感陽(yáng)性率與2011年廣西活禽農(nóng)貿(mào)市場(chǎng)外環(huán)境禽流感監(jiān)測(cè)陽(yáng)性率基本一致[25]，但H9亞型禽流感陽(yáng)性率要低于該調(diào)查的結(jié)果。在目前活禽農(nóng)貿(mào)市場(chǎng)環(huán)境條件較為惡劣、生物安全水平較低以及眾多活禽聚集的情況下，如此高的環(huán)境禽流感陽(yáng)性率，意味著禽流感病毒不僅能在市場(chǎng)內(nèi)一直存留、變異，也能通過(guò)雞籠、車輛、其他工具等傳播給養(yǎng)殖場(chǎng)甚至感染人。因此，需要對(duì)活禽農(nóng)貿(mào)市場(chǎng)實(shí)施更為嚴(yán)格的消毒、休市等生物安全措施以降低禽流感發(fā)生的風(fēng)險(xiǎn)。

另外，在本調(diào)查中發(fā)現(xiàn)，6-8月份采集的樣品中也存在較高的通用型和H9亞型禽流感病毒陽(yáng)性率，這與以往的研究[26]認(rèn)為禽流感病毒在低溫季節(jié)分離率要高于高溫季節(jié)的結(jié)論有一定的差異，但是廣州與廣西地區(qū)監(jiān)測(cè)結(jié)果較為一致[25]，我們分析可能與地區(qū)差異、氣候等有一定的關(guān)系，有必要對(duì)此現(xiàn)象進(jìn)一步研究與分析，以便有針對(duì)性地調(diào)整禽流感防控策略。

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Epidemiological Investigation of Avian Infuenza in Retail Live Poultry Markets in Guangzhou in 2013

To understand the distribution and epidemiology of avian influenza virus in live poultry markets of Guangzhou，investigations were conducted from March to November，2013. 1064 cloacal swabs and environmental swabs were collected and detected with real-time RT-PCR for avian infuenza virus types A，H7N9 and H9. Of all the swabs sampled，the positive rates of avian infuenza virus types A，H7N9 and H9 were 46.05%，0.09% and 19.83% respectively. The positive rate of avian infuenza virus type A in ducks was 58.14%，much higher than that in chicken（46.28%），goose （42.85%） and the environment （35.19%）. The positive rate of H9 subtype in chicken was 28.88%，much higher than that in duck （12.56%） and the environment （5.58%）. H7N9 subtype avian infuenza virus was detected only in one chicken cloacal swab. The results indicated that the prevalence of avian infuenza virus in live poultry markets in Guangzhou was severe and more effective prevention and control measures were needed.

Guangzhou；retail live poultry market；avian infuenza；epidemiological investigation

S858.3

：B

：1005-944X（2014）11-0033-05

Duan Xiaodong，Shen Dan，Zhang Haiming，Zhang Haibing，Zheng Lilan，Yang Suijuan，Zhong Zhuoling，Yang Qiufei，Zhong Jinhui，Zhu Jiancui

（Guangzhou Animal Disease Prevention and Control Center，Guangzhou，Guangdong 510440）