王曉煒，張成鴻

（大連醫(yī)科大學(xué)，遼寧 大連 116044）

細(xì)胞培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)課的課前準(zhǔn)備與課堂實(shí)施

王曉煒，張成鴻

（大連醫(yī)科大學(xué)，遼寧 大連 116044）

細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)廣泛應(yīng)用于科研、教學(xué)及臨床研究試驗(yàn)，是醫(yī)學(xué)生必須掌握的一項(xiàng)技術(shù)。只有實(shí)驗(yàn)課前充分準(zhǔn)備，課堂上合理實(shí)施，才能讓學(xué)生在有限的課時(shí)內(nèi)對(duì)細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)有一個(gè)全面了解，進(jìn)而為以后的科學(xué)研究打下良好基礎(chǔ)。

細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)；實(shí)驗(yàn)課；實(shí)驗(yàn)準(zhǔn)備；課堂實(shí)施

實(shí)驗(yàn)教學(xué)在現(xiàn)代高等教育中是連接理論知識(shí)與實(shí)踐的一個(gè)重要橋梁。細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)又是生命科學(xué)研究領(lǐng)域的基本技術(shù)，細(xì)胞培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)課有其特殊性，要求有嚴(yán)格的無(wú)菌操作環(huán)境，并且相關(guān)實(shí)驗(yàn)有長(zhǎng)期的連續(xù)性觀察等特點(diǎn)。因而只有課前準(zhǔn)備充分、課堂合理實(shí)施，才能使細(xì)胞培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)教學(xué)順利進(jìn)行，取得良好教學(xué)效果。

1 課前準(zhǔn)備

1.1 準(zhǔn)備實(shí)驗(yàn)所需，合理安排時(shí)間

細(xì)胞培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)課的實(shí)驗(yàn)需求繁雜，包括清洗、消毒實(shí)驗(yàn)器材，配制、分裝實(shí)驗(yàn)試劑，準(zhǔn)備復(fù)蘇、傳代、凍存實(shí)驗(yàn)細(xì)胞等，而這一切還要根據(jù)實(shí)驗(yàn)人數(shù)、實(shí)驗(yàn)輪次做相應(yīng)調(diào)整。因此，在實(shí)驗(yàn)開(kāi)始前一個(gè)月左右就應(yīng)該著手準(zhǔn)備。先進(jìn)行實(shí)驗(yàn)器皿的清洗和消毒，包括離心管、培養(yǎng)瓶、凍存管、濾器等，并分組放于細(xì)胞間儲(chǔ)物柜，詳細(xì)備注；接著在實(shí)驗(yàn)前10天左右，配制藥品，根據(jù)組數(shù)分裝實(shí)驗(yàn)試劑，包括培養(yǎng)基、PBS、胰蛋白酶、Hanks液、凍存液等，分組放于細(xì)胞間冰箱儲(chǔ)存，做好標(biāo)記；最后在實(shí)驗(yàn)前一周左右，復(fù)蘇細(xì)胞，擴(kuò)大培養(yǎng)，按照組數(shù)準(zhǔn)備充分的細(xì)胞。

為了讓學(xué)生更加理解無(wú)菌觀念，可以在實(shí)驗(yàn)室開(kāi)放時(shí)間組織學(xué)生在教師指導(dǎo)下進(jìn)行實(shí)驗(yàn)準(zhǔn)備。學(xué)生通過(guò)實(shí)驗(yàn)用品的準(zhǔn)備、試劑的配制，提高對(duì)細(xì)胞培養(yǎng)所用物品清潔度的認(rèn)識(shí)，增強(qiáng)無(wú)菌觀念，學(xué)習(xí)各種無(wú)菌處理方法[1]。

1.2 提供教學(xué)課件，掌握實(shí)驗(yàn)要點(diǎn)

細(xì)胞培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)需在無(wú)菌環(huán)境中進(jìn)行，要穿上無(wú)菌衣進(jìn)入無(wú)菌細(xì)胞間工作，對(duì)于經(jīng)驗(yàn)不豐富的醫(yī)學(xué)生來(lái)說(shuō)有一定的神秘感，他們很容易興奮，而細(xì)胞培養(yǎng)的操作過(guò)程又很復(fù)雜，要獲得良好效果，實(shí)驗(yàn)課上簡(jiǎn)單的口頭講解，學(xué)生印象不深刻，也提不起興趣[2]。為了避免學(xué)生操作的盲目性，同時(shí)減輕教師工作量，可以為學(xué)生提供細(xì)胞培養(yǎng)的教學(xué)課件。課件內(nèi)容包括實(shí)驗(yàn)中使用的器皿、儀器和試劑的展示，講解實(shí)驗(yàn)用具的正確使用方法，每一步操作并近距離演示實(shí)驗(yàn)操作手法，歸納總結(jié)以往學(xué)生實(shí)驗(yàn)課中容易出現(xiàn)的錯(cuò)誤，讓學(xué)生在實(shí)驗(yàn)課開(kāi)始之前能自行預(yù)習(xí)實(shí)驗(yàn)內(nèi)容，熟悉操作步驟，掌握操作要點(diǎn)。

1.3 提出問(wèn)題，自行查閱資料

預(yù)習(xí)過(guò)程中，教師提出一些問(wèn)題，比如實(shí)驗(yàn)用具滅菌的方法，超凈臺(tái)內(nèi)物品的擺放，培養(yǎng)基顏色改變的原因，培養(yǎng)箱中CO2濃度為什么是5%，細(xì)胞消化時(shí)間的控制等，讓學(xué)生從課件中找尋答案，或到圖書(shū)館查閱相關(guān)資料。同時(shí)，讓學(xué)生總結(jié)不明白的問(wèn)題并提前上交，使教師能提前分析學(xué)生所遇到的共性問(wèn)題，從而在課堂上有針對(duì)性地講解。

2 課堂實(shí)施

2.1 播放課件，教師示范，樹(shù)立無(wú)菌觀念

無(wú)菌操作是整個(gè)細(xì)胞培養(yǎng)過(guò)程中的關(guān)鍵步驟，能直接導(dǎo)致實(shí)驗(yàn)的成功與失敗，因而細(xì)胞培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)教學(xué)必須讓學(xué)生明確無(wú)菌操作的概念[3]。課堂上先檢查學(xué)生課前觀看課件情況，再播放課件再現(xiàn)實(shí)驗(yàn)操作過(guò)程中的注意事項(xiàng)。進(jìn)入細(xì)胞培養(yǎng)間前要了解無(wú)菌區(qū)和有菌區(qū)，穿好無(wú)菌衣，做好進(jìn)入細(xì)胞培養(yǎng)間的準(zhǔn)備；進(jìn)入細(xì)胞培養(yǎng)間后，教師親自示范超凈臺(tái)前的具體操作，讓學(xué)生直觀感受無(wú)菌情境，繼而在自己的操作過(guò)程中更加深刻地理解無(wú)菌觀念。

實(shí)驗(yàn)中雖然要注意無(wú)菌，但也要減少不必要的操作。因?yàn)閾?dān)心污染，有的學(xué)生可能不停地用酒精棉球擦手，會(huì)多次灼燒試管口、試劑瓶口、培養(yǎng)瓶口等，甚至灼燒要繼續(xù)使用的吸管、槍頭等，這些不必要的操作步驟反而會(huì)有后患。比如反復(fù)擦拭酒精棉的皮膚會(huì)粗糙；多次灼燒的瓶口容易裂開(kāi)，產(chǎn)生危險(xiǎn)；繼續(xù)使用的吸管、槍頭可能會(huì)因?yàn)闅埩粑锉粺?，形成?duì)細(xì)胞生長(zhǎng)有害的物質(zhì)，再取液體時(shí)帶入培養(yǎng)液后容易對(duì)細(xì)胞產(chǎn)生毒害作用[4]。

2.2 實(shí)驗(yàn)分組，分工合作，增強(qiáng)團(tuán)隊(duì)意識(shí)

細(xì)胞培養(yǎng)間空間有限，教師要對(duì)學(xué)生合理分組以有效利用空間。標(biāo)準(zhǔn)班級(jí)一般32人，可分為兩大組，由授課教師和實(shí)驗(yàn)教師各帶一大組，然后再按照一個(gè)超凈臺(tái)8人來(lái)分成小組，兩位教師各帶一小組進(jìn)入細(xì)胞培養(yǎng)間，其余兩小組學(xué)生有組織地觀看課件，強(qiáng)化實(shí)驗(yàn)操作技能。

準(zhǔn)備工作就緒進(jìn)入細(xì)胞培養(yǎng)間后，8名學(xué)生自主分工，2名學(xué)生先操作，其余6名學(xué)生分立于超凈臺(tái)兩側(cè)觀看。為了讓每位學(xué)生都有動(dòng)手操作的機(jī)會(huì)，教師可準(zhǔn)備多瓶細(xì)胞或者將實(shí)驗(yàn)再細(xì)分幾個(gè)步驟，讓其余6名學(xué)生也有操作的機(jī)會(huì)，絕對(duì)不能出現(xiàn)一人動(dòng)手大家看的“放羊式”現(xiàn)象，要讓學(xué)生樹(shù)立多動(dòng)手、團(tuán)結(jié)協(xié)作的意識(shí)[5]。教師示范后，讓學(xué)生進(jìn)行獨(dú)立操作，提醒超凈臺(tái)兩側(cè)的學(xué)生仔細(xì)觀察，注意操作學(xué)生的動(dòng)作，并提醒或糾正，發(fā)揮團(tuán)隊(duì)作用。這樣一堂實(shí)驗(yàn)課雖然有時(shí)間和空間的限制，但不僅鍛煉了學(xué)生的獨(dú)立操作能力，掌握了細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)，還增加了學(xué)生的成就感，培養(yǎng)了團(tuán)隊(duì)意識(shí)。

2.3 穿插進(jìn)行，縱向觀察，激發(fā)學(xué)生學(xué)習(xí)興趣

醫(yī)學(xué)院校會(huì)有多個(gè)專業(yè)開(kāi)設(shè)細(xì)胞培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)課，不同專業(yè)學(xué)生可能會(huì)分不同時(shí)間段上課，因此，教師可以利用時(shí)間差使學(xué)生在一堂課中更加形象具體地了解細(xì)胞培養(yǎng)的全過(guò)程。在學(xué)生完成操作后，可以組織其觀察其他已經(jīng)結(jié)束班級(jí)培養(yǎng)的細(xì)胞的生長(zhǎng)狀態(tài)，并與自己培養(yǎng)的結(jié)果相比較，找出異同點(diǎn)，提出問(wèn)題、解決問(wèn)題，使學(xué)生在實(shí)驗(yàn)技能得到全面訓(xùn)練的同時(shí)，獲得更多的理論知識(shí)，真正做到理論與實(shí)踐相結(jié)合。

總之，細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)是一門(mén)實(shí)踐性很強(qiáng)的課程，要想讓學(xué)生在短短的實(shí)驗(yàn)課中完成技能培訓(xùn)，教師就必須課前準(zhǔn)備充分，課堂合理實(shí)施，二者相互結(jié)合，以有效提高細(xì)胞培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)教學(xué)效果。

[1]曾益軍，張放鳴，楊恬.實(shí)驗(yàn)課教學(xué)中的皮膚細(xì)胞原代培養(yǎng)技術(shù)[J].醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)教育，2000（1）：33-34.

[2]奚義寧.如何激發(fā)學(xué)生學(xué)習(xí)《遺傳與優(yōu)生》的興趣[J].現(xiàn)代醫(yī)藥衛(wèi)生，2004，（20）14：1439.

[3]王韻，高強(qiáng)國(guó)，楊恬.研究生細(xì)胞培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)課教學(xué)體會(huì)[J].山西醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào)：基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)教育版，2004，6（6）：628-629.

[4]梁向艷，黃小軍，劉楠楠.研究生細(xì)胞培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)教學(xué)的準(zhǔn)備實(shí)踐[J].基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)教育，2012，14（10）：768-770.

[5]徐海燕，劉斌，安然.研究生細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)課教學(xué)改革與實(shí)踐[J].西北醫(yī)學(xué)教育，2012，20（3）：485-487.

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1671-1246（2014）23-0089-02