王麗華 孫翠翠 鮑 健

（遼寧省錦州市中心醫(yī)院病理科，121000）

漿膜腔積液細(xì)胞塊Calretinin Ber-EP4 CEA表達(dá)分析

王麗華 孫翠翠 鮑 健

（遼寧省錦州市中心醫(yī)院病理科，121000）

目的 探討漿膜腔積液腺癌細(xì)胞和間皮細(xì)胞中Calretinin、Ber-EP4、CEA的表達(dá)及其意義。方法 應(yīng)用細(xì)胞塊技術(shù)對42例漿膜腔積液標(biāo)本進(jìn)行處理，并行免疫組化染色，觀察Calretinin、Ber-EP4、CEA在腺癌細(xì)胞及間皮細(xì)胞的表達(dá)。結(jié)果 Calretinin、Ber-EP4、CEA在腺癌細(xì)胞的陽性表達(dá)率與在間皮細(xì)胞的陽性表達(dá)率差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.01）。結(jié)論 細(xì)胞塊切片結(jié)合免疫組化是鑒別腺癌細(xì)胞與增生間皮細(xì)胞的有效方法，Calretinin、Ber-EP4及CEA的抗體組合，具有較高的臨床應(yīng)用價值。

漿膜腔積液；腺癌細(xì)胞；增生間皮細(xì)胞；免疫組化

漿膜腔積液中反應(yīng)性增生的間皮細(xì)胞常具有一定異型性，與某些分化較好的轉(zhuǎn)移性腺癌細(xì)胞形態(tài)極其相似，難以鑒別。我科運用常規(guī)細(xì)胞涂片、細(xì)胞塊切片結(jié)合免疫組化的方法，為二者的鑒別提供了較可靠依據(jù)?，F(xiàn)報告如下。

1 資料與方法

1.1 標(biāo)本來源 收集我院2013年1—12月細(xì)胞含量豐富的漿膜腔積液（胸腔積液/腹腔積液）標(biāo)本42例，其中腹腔積液24例、胸腔積液18例。

1.2 試劑及實驗方法 免疫組化試劑Calretinin、Ber-EP4、CEA及二步法免疫組化試劑盒均購于北京中杉金橋生物技術(shù)有限公司。

1.3 檢測方法 收集的漿膜腔積液標(biāo)本全部離心，2 500轉(zhuǎn)/min，離心5 min。常規(guī)涂片，另取沉渣固定，包埋，常規(guī)脫水，石蠟包埋切片。免疫組化檢測采用二步法，用已知陽性切片作為陽性對照，磷酸緩沖鹽溶液代替一抗作為陰性對照。

1.4 結(jié)果判斷 Ber-EP4蛋白陽性表達(dá)產(chǎn)物定位于胞膜，Calretinin蛋白陽性表達(dá)產(chǎn)物定位于胞核和胞質(zhì)，CEA蛋白陽性表達(dá)產(chǎn)物定位于胞膜和部分胞質(zhì)，呈明顯棕黃色或棕褐色顆粒為陽性細(xì)胞，陽性細(xì)胞數(shù)＞10%為陽性表達(dá)，陽性細(xì)胞數(shù)≤10%為陰性表達(dá)。由兩位有經(jīng)驗的病理醫(yī)師在不知臨床和細(xì)胞學(xué)診斷的情況下作出判斷。

1.5 統(tǒng)計分析 采用SPSS 11.5統(tǒng)計分析軟件，計數(shù)資料以率表示，組間比較采用χ2檢驗，P＜0.05表示差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 細(xì)胞涂片與細(xì)胞塊切片形態(tài)學(xué)比較 同細(xì)胞涂片比較，細(xì)胞塊切片具有組織像清晰，細(xì)胞集中，制片背景干凈，便于觀察的優(yōu)點，且容易獲得具有特征性的組織結(jié)構(gòu)。42例漿膜腔積液標(biāo)本中，診斷為腺癌細(xì)胞23例、反應(yīng)性間皮增生14例、可疑腺癌5例。

表1 Ber-EP4、Calretinin、CEA在漿膜腔積液腺癌細(xì)胞和間皮細(xì)胞中的表達(dá)情況[例(%)]

2.2 免疫組化結(jié)果 各抗體在腺癌細(xì)胞和間皮細(xì)胞中的表達(dá)情況見表1。三者在腺癌細(xì)胞和間皮細(xì)胞中的表達(dá)差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.01）。Calretinin在增生的間皮細(xì)胞中表達(dá)陽性率為88.9%(15/17)，在腺癌細(xì)胞中1例出現(xiàn)部分表達(dá)陽性，特異性為94.1%。Ber-EP4和CEA在腺癌細(xì)胞中陽性表達(dá)率分別為92.0%（23/25）和84.0%（21/25）。在5例可疑腺癌病例中，2例出現(xiàn)Ber-EP4和（或）CEA陽性表達(dá)，診斷為轉(zhuǎn)移性腺癌；3例僅出現(xiàn)Calretinin陽性，診斷為增生的間皮細(xì)胞。

3 討論

漿膜腔積液中的轉(zhuǎn)移性腺癌細(xì)胞與增生間皮細(xì)胞形態(tài)學(xué)存在交叉，二者鑒別是病理日常工作中常見的細(xì)胞學(xué)診斷難題之一。常規(guī)細(xì)胞涂片的優(yōu)點是快速、簡便易行，但準(zhǔn)確性有限，對惡性漿膜腔積液的診斷敏感度為50%～78%[1]。本組漿膜腔積液常規(guī)涂片有5例可疑腺癌，需要進(jìn)一步明確診斷。

細(xì)胞塊結(jié)合免疫組化是一種重要的漿膜腔積液輔助診斷方法，其背景著色低，結(jié)果易于判斷，染色模式與組織學(xué)標(biāo)本相似，而且可以同時制作多張切片，利于抗體組合應(yīng)用。本組42例標(biāo)本最終都得到了明確診斷，大大提高了惡性漿膜腔積液的診斷準(zhǔn)確率。

1997年，Calretinin首次用于漿膜腔積液的鑒別診斷。文獻(xiàn)報道，Calretinin在間皮及其腫瘤組織中表達(dá)率較高（80%～100%），而在腺癌中表達(dá)率較低（0～9%）[2]。Chhieng等[3]研究發(fā)現(xiàn)，Calretinin在間皮及其腫瘤組織中的表達(dá)強度和部位與腺癌不同，前者在胞核和胞質(zhì)表達(dá)，可伴有較強的胞膜著色，呈“煎蛋樣”外觀。而在腺癌中表達(dá)強度較弱，且僅胞質(zhì)陽性。本研究采用上述判斷標(biāo)準(zhǔn)，Calretinin對間皮細(xì)胞的特異性達(dá)96.0%，對與腺癌鑒別具有很好的輔助作用。

Ber-EP4對癌細(xì)胞的敏感性為32%～100%，假陽性率僅為0～2.5%[4]。本研究中，Ber-EP4的敏感性和特異性分別為92%和94.1% ，陽性反應(yīng)呈胞漿、胞膜或胞漿胞膜清晰著色。CEA在腺癌，尤其是消化道腺癌和肺腺癌中有較高的表達(dá)[5]，而間皮瘤和反應(yīng)增生的間皮細(xì)胞不表達(dá)或低表達(dá)。本實驗CEA在25例腺癌中陽性表達(dá)率為84%，而17例增生性間皮細(xì)胞中僅2例出現(xiàn)灶狀陽性，特異性為88.2%。在實際觀察中，腺癌的CEA陽性表達(dá)為彌漫性，而間皮細(xì)胞的陽性表達(dá)較為散在或呈灶狀，因此CEA彌漫陽性對腺癌鑒別很有幫助。

本研究結(jié)果表明，Ber-EP4和CEA呈現(xiàn)互補作用，二者結(jié)合對癌細(xì)胞的敏感性提高，而特異性不變。采用這兩種抗體與間皮源性抗體Calretinin組合應(yīng)用，使?jié){膜腔積液的鑒別診斷獲得了正反兩方面的證實，進(jìn)一步提高了診斷的準(zhǔn)確性。因此，Ber-EP4、Calretinin、CEA抗體組合對鑒別漿膜腔積液中腺癌細(xì)胞和增生的間皮細(xì)胞具有較高的臨床應(yīng)用價值。我們在臨床實踐過程中，針對不同的漿膜腔積液結(jié)合臨床情況，在這三種抗體基礎(chǔ)上配合如TTF-1、CDX-2、CA125、CK7、CK20等，還可以進(jìn)一步明確腺癌的組織來源,為臨床治療方案的確立提供重要參考依據(jù)。

[1] 斯向東，李慶．細(xì)胞塊切片及免疫組化在惡性漿膜腔積液診斷中的應(yīng)用[J]．中國現(xiàn)代醫(yī)生，2011，49(28)：114-115．

[2] Murugan P, Siddaraju N, Habeebullah S, et al. Immunohistochemical distinction between mesothelial and adenocarcinoma cells in serous effusions∶ a combination panel-based approach with a brief review of the literature[J]. Indian J Pathol Microbiol, 2009, 52(2)∶ 175-181.

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[4] Dinu M, Ciurea RN, Stefan M, et al. The role of immunohistochemistry in the diagnosis of neoplastic pleural effusions[J]. Rom J Morphol Embryol, 2012, 53(3)∶817-820.

1672-7185（2014）24-0052-02 doi∶10.3969/j.issn.1672-7185.2014.24.025

2014-05-21)

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