樂可鑫, 蔣霞敏, 彭瑞冰, 羅 江, 唐 鋒, 王春琳

(寧波大學(xué) 海洋學(xué)院， 浙江 寧波 315211)

虎斑烏賊(Sepiapharaonis)屬于軟體動物門(Mollusca)、頭足綱(Cephalopoda)、十腕目(Decapoda)、烏賊科(Sepiidae)、烏賊屬(Sepia)，主要分布在印度洋以及西太平洋，包括紅海海域和阿拉伯海域，從安達(dá)曼海到中國南海、東海、臺灣地區(qū)沿海及日本沿海、印度尼西亞南部和澳大利亞北部沿海均有分布[1-2]。其個體較大(最大體重可達(dá)5 kg以上)，口味鮮美，具有餌料轉(zhuǎn)換率高、生長快、抗病力強(qiáng)、適合高密度養(yǎng)殖等優(yōu)點，是一種具有養(yǎng)殖前景的經(jīng)濟(jì)貝類[3]。

關(guān)于虎斑烏賊的研究，國外Minton等[3]成功繁殖了5代虎斑烏賊，Md等[4]研究了過氧化氫和芬頓試劑對虎斑烏賊外皮明膠膜性能的影響。而國內(nèi)報道較少，僅見劉建勇等[5]研究了溫度對其受精卵孵化率及幼體耐受性的影響；譚永勝等[6]研究了高錳酸鉀對其胚胎及幼體的毒性；黃建盛等[7]研究了鹽度對虎斑烏賊受精卵孵化及幼體耐受性的影響。關(guān)于虎斑烏賊幼體人工育苗的適宜理化因子及餌料未見詳細(xì)報道，本文研究了溫度、鹽度及餌料對幼體生長的影響，旨在為虎斑烏賊幼體的人工育苗與養(yǎng)殖提供理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料

試驗于2013.03—2013.07 在浙江舟山市水產(chǎn)研究所朱家尖基地進(jìn)行，虎斑烏賊幼體為本課題組工廠化人工育苗所得。本試驗選取同一時間出膜，規(guī)格整齊、活力好、健康的幼體。實驗用自然海水，經(jīng)過暗沉淀與沙濾，水溫 15.3～25.5 ℃，鹽度 24.0～27.0(ATAGO鹽度折光儀)，pH值7.80～8.10(pH計)，COD 6.15～8.40 mg/L(YSI溶氧測定儀)；淡水取自自來水，水溫15.3～25.3 ℃，pH值6.80～6.97，COD 4.05～5.80 mg/L。

1.2 方法

1.2.1 溫度試驗

設(shè)置6個溫度梯度：18、21、24、27、30和33 ℃，每組3個平行，每個平行放50個初孵烏賊幼體(胴長：0.92 cm±0.09 cm，體質(zhì)量：0.30 g±0.01 g)，培養(yǎng)容器為白色泡沫箱(規(guī)格 50 cm× 35 cm×25 cm)，培養(yǎng)水位20 cm。用電子電熱棒(型號AT-380)調(diào)節(jié)溫度，緩緩提升水溫至各試驗組設(shè)計要求，保持溫度穩(wěn)定(±0.5 ℃)，隔天100%等溫?fù)Q水。每天9:00與16:00投喂等量餌料糠蝦(Acanthomysisbrevirostis)(2 g)，每日觀察記錄死亡個體數(shù)，測量死亡個體大小。試驗周期為21 d，培養(yǎng)條件：pH值7.80～8.10，鹽度24～27，COD 6.15～8.40 mg/L，適當(dāng)遮陽，連續(xù)微充氣。

1.2.2 鹽度試驗

設(shè)置6個鹽度梯度：18、21、24、27、30和33，每組3個平行，各組分別放在藍(lán)色玻璃鋼瓦圓桶(Φ1 m，高0.6 m)培養(yǎng)，培養(yǎng)水位高0.5 m，每個平行用塑料筐(Φ35 m，高12 cm)分養(yǎng)，周圍用泡沫懸浮水表面，各放50個烏賊幼體(胴長：1.32 cm±0.08 cm，體質(zhì)量：0.56 g±0.03 g)。試驗用水為沙濾的天然海水，加入粗鹽或經(jīng)曝氣的淡水，緩緩調(diào)節(jié)鹽度至試驗要求，隔3 d 100%等鹽、等溫?fù)Q水。培養(yǎng)條件：水溫22～23 ℃，其他條件同1.2.1。

1.2.3 餌料種類試驗

設(shè)置7種投餌種類：A蝦糜(Minced shrimp)、B：活糠蝦、C：鹵蟲無節(jié)幼體(Artemianauplii)、D：橈足類(Copepods)、E：死糠蝦、F：混合(蝦糜和強(qiáng)化鹵蟲后無節(jié)幼體)(Minced shrimp and StrongArtemianauplii)、G：強(qiáng)化鹵蟲后無節(jié)幼體(StrengthenArtemianauplii)。其中強(qiáng)化鹵蟲后無節(jié)幼體是初孵鹵蟲無節(jié)幼體投喂小球藻(Chlorella)，培養(yǎng)5～7 d ； 鹵蟲無節(jié)幼體體長為0.25～0.35 mm，糠蝦體長為4.5～6.0 mm，橈足類體長為0.8～0.9 mm，強(qiáng)化鹵蟲后無節(jié)幼體體長為4.0～5.0 mm，蝦糜長為2.0～3.0 mm。每組3個平行，每個平行放50個烏賊幼體(胴長：0.94 cm±0.07 cm，體質(zhì)量：0.31 g±0.01 g)。隔天100%換水，每天9:00和16:00投喂足量的餌料，觀察記錄死亡個體數(shù)和死亡個體大小，并將上次剩余的餌料撈出，試驗周期為21 d。培養(yǎng)條件：水溫22～23 ℃，鹽度24～27，其他培養(yǎng)條件同1.2.1。

1.2.4 投餌量試驗

以糠蝦為餌料，進(jìn)行投餌量試驗。設(shè)置6個投餌量梯度：0、2、4、6、8和10 g/d，每組3個平行，每個平行放50個烏賊幼體(胴長：1.34 cm±0.08 cm，體質(zhì)量：0.57 g±0.01 g)。每天9:00和16:00投餌，投喂量為日總投餌量的1/2，并將上次剩余的餌料撈出，觀察記錄死亡個體數(shù)和死亡個體大小，并在各組的剩余餌料為0時，稱量該組與后一組烏賊幼體的重量。隔天100%換水，試驗周期為21 d。其他培養(yǎng)條件同1.2.2。

1.3 數(shù)據(jù)處理與統(tǒng)計

特定生長率：SGR(%)=(lnWt-lnW0)/t×100

存活率：SR(%)=(Nt/N0)×100

攝食量：FA=M-M0

餌料系數(shù)：FC=M/(Wt-W0)

式中：Wt、W0分別試驗?zāi)?、初的平均體質(zhì)量(g)；Nt、N0分別表示試驗?zāi)?、初幼體數(shù);M、M0分別為總投喂量與剩余量。

運用SPSS 17.0統(tǒng)計分析軟件對各生態(tài)因子與其下各分析指標(biāo)的數(shù)據(jù)進(jìn)行相關(guān)分析和ANOVA單因素分析。R為相關(guān)系數(shù)。當(dāng)r的絕對值為0～0.33為弱相關(guān)，0.33～0.67為中等相關(guān)，0.67～1為強(qiáng)相關(guān)。

2 結(jié)果與分析

2.1 溫度試驗

不同溫度對幼體的存活率影響顯著(P<0.05)，溫度在18～33 ℃范圍內(nèi)，虎斑烏賊幼體的存活率為22.2%～91.1%，當(dāng)溫度為18～27 ℃時，幼體的存活率隨著溫度的升高而增大，27 ℃組最高(91.1%)。存活率(y)與溫度(x)的回歸方程為y=-0.15x3+30.637x-447.002(r2=0.923)(表1)。

不同溫度對幼體的特定生長率影響顯著(P<0.05)，在18～33 ℃的溫度范圍內(nèi)，虎斑烏賊幼體的特定生長率為2.42%～6.13%。18 ℃組最低(2.42%)，溫度27 ℃組特定生長率最高(6.13%)，且其后維持于5%左右。特定生長率(y)與溫度(x)的回歸方程為y=-0.028x2+1.637-18.118(表1)。

表1 虎斑烏賊幼體生長與溫度的回歸分析

圖1溫度對虎斑烏賊幼體生長的影響

Fig 1 Effect of temperature on larval growth ofSepiapharaonis(mean±SD)

SGR—特定生長率；SR—存活率。

2.2 鹽度試驗

不同鹽度對幼體的存活率影響顯著(P<0.05)，雖然各組鹽度均逐漸升高或淡化，高鹽對幼體影響不顯著，但幼體對低鹽比較敏感，特別是當(dāng)鹽度降至18時，幼體明顯表現(xiàn)不適，停止攝食，逐漸淘汰，于試驗第3 d全部死亡。鹽度21～33組，存活率為37.3%～90.0%，鹽度21～27組，幼體的存活率隨著鹽度升高而增大，鹽度27組存活率最大(90.0%),存活率(y)與鹽度(x)的回歸方程為y=-0.963x2+53.867x-669.2(P<0.01,r2=0.893)。

不同鹽度對幼體的特定生長率影響顯著(P<0.05)，在鹽度21～33范圍內(nèi)，虎斑烏賊幼體的特定生長率為2.65%～3.71%，鹽度27時最高(3.71%)。

圖2 鹽度對虎斑烏賊幼體生長的影響

SGR—特定生長率；SR—存活率。

2.3 餌料種類試驗

試驗14 d時測得，不同種類的餌料對烏賊幼體的存活率影響顯著(P<0.05)，投喂7種餌料，幼體的存活率為60.4%～96.7%。其中活糠蝦組與強(qiáng)化鹵蟲后無節(jié)幼體組的存活率最高，分別為96.7%與95.5%，且幼體活力強(qiáng)，體色黑亮，攝食欲旺盛。蝦糜組存活率最差(60.4%)，幼體活力差，體色發(fā)白。

不同種類的餌料對烏賊幼體的特定生長率影響顯著(P<0.05)，投喂活糠蝦效果最佳，特定生長率為3.77%，投喂強(qiáng)化鹵蟲后無節(jié)幼體效果次之，特定生長率為2.54%；其余各組效果均不理想，且在第21 d時，全部死亡。

圖3 餌料種類對虎斑烏賊幼體生長的影響

SGR—特定生長率；SR—存活率；A—蝦糜；B—活糠蝦；C—鹵蟲無節(jié)幼體；D—橈足類；E—死糠蝦；F—混合(蝦糜和強(qiáng)化鹵蟲幼體)；G—強(qiáng)化鹵蟲幼體。

2.4 投餌量試驗

糠蝦不同的投餌量，對其末平均體重影響顯著差異(P<0.05)，存活率隨著投餌量的增加而提高，日投喂量為8～10 g/d組存活率無差異，達(dá)到最大(92.7±2.3)% ～(94±3.5)%；對照組(不投餌)出現(xiàn)大量死亡的時間為第7 d。特定生長率各組差異顯著(P<0.05)，日投喂2～4 g/d無差異，特定生長率為(3.94±0.37)～(3.95±0.13)；日投喂6 g/d以上各組也無差異，特定生長率為(5.04±0.13)～(5.20±0.27)。烏賊幼體的攝食量隨著個體重的增長隨之增加，攝食量(y)與個體重(x)的回歸方程為y=0.227x-0.063(r2=0.921)，攝食量占體重的15.76%±1.79%(圖4)。

表2 不同投餌密度對虎斑烏賊幼體的影響

圖4虎斑烏賊幼體個體攝食量

Fig 4 Individual feed intake ofSepiapharaonis(mean±SD)

3 討論

3.1 溫度對虎斑烏賊幼體生長與存活率的影響

溫度是生物幼體存活的重要環(huán)境因子之一，且不同生物對溫度的適宜范圍不同。尹飛等[8]曾報道曼氏無針烏賊(Sepiellamaindron)幼體的適溫為22～28℃，焦海峰等[9]報道過嘉庚蛸(Octopustankahkeei)的適溫為12.0～31.0℃，蔡文飛[10]等報道擬目烏賊(Sepialycidas)的最適溫度為29.5～32.3 ℃。本實驗結(jié)果表明，虎斑烏賊幼體的適溫為21～30 ℃。不同溫度對虎斑烏賊幼體的存活率影響顯著，當(dāng)水溫由18 ℃升至27 ℃，幼體存活率由22.2%提高至91.1%。但由于試驗條件設(shè)定，27～30 ℃是否存在更為適宜的溫度，還有待進(jìn)一步試驗證明。

溫度會影響生物的新陳代謝，溫度過高或過低都不利于生長[11-12]。溫度過高，代謝加快，能量無法有效儲存，溫度過低，活動遲緩，甚至休眠，無法大量攝入食物?；邽踬\幼體在18～27 ℃，特定生長率從2.42%提高至6.13%，在水溫18 ℃時，幼體體色發(fā)白，行動遲緩，應(yīng)急后不易噴墨；當(dāng)水溫大于27 ℃時，攝食活動頻繁，極易噴墨，其存活率明顯下降，但其特定生長率仍保持在5%左右，這可能是由于溫度過高，加速了幼體的新陳代謝速率，為此需通過大量攝食，為細(xì)胞的生長、分裂提供能量和物質(zhì)基礎(chǔ)。

3.2 鹽度對虎斑烏賊生長與存活率的影響

鹽度是海水養(yǎng)殖中最重要的環(huán)境因子之一，與水產(chǎn)動物的各種生理活動密切相關(guān)。水生生物對鹽度都有一定的適宜范圍。超出適宜范圍可導(dǎo)致其自身與外界水體的滲透壓出現(xiàn)差異，需要消耗更多能量來維持滲透壓平衡，以至于用于其它方面的能量減少，影響其生長性能，超過自身調(diào)節(jié)能力時可導(dǎo)致死亡[8,13-14]。長蛸(Octopusvariabilis)最適鹽度18.3～24.3[15]、金烏賊(S.esculenta)最適鹽度29～34[16]、曼氏無針烏賊最適鹽度20～30[17]。本實驗表明虎斑烏賊幼體的適宜鹽度為24～33，最適鹽度為27～30，存活率為73.3%～90.0%，特定生長率為2.73%～3.71%。鹽度為27時，存活率與特定生長率最高，由此可見，虎斑烏賊幼體的等滲點較接近27。當(dāng)鹽度過低時(鹽度18)，烏賊在攝食后，容易出現(xiàn)快速旋轉(zhuǎn)，噴墨，類似抽搐等現(xiàn)象，且大多數(shù)不可復(fù)原，直接死亡，而當(dāng)鹽度33時，幼體也會出現(xiàn)類似現(xiàn)象，但是一般能通過自我調(diào)節(jié)復(fù)原。

3.3 餌料種類對虎斑烏賊幼體生長與存活率的影響

餌料是機(jī)體維持生命的營養(yǎng)來源，也是物種人工繁育中最重要的環(huán)節(jié)。餌料的選擇通常從3個方面來綜合考慮：一是可食性，選擇的餌料大小必須是機(jī)體能夠攝取，就烏賊初孵幼體而言，通常選擇適口的浮游動物為開口餌料。二是營養(yǎng)的均衡性，不同的餌料其營養(yǎng)成份的組成不同，這些營養(yǎng)成份是否能完全滿足生物的生長、發(fā)育所需。三是獲得的便利性，一種營養(yǎng)全面的餌料，但在培養(yǎng)或獲取非常困難時，在生產(chǎn)上往往也難以應(yīng)用[18-19]。

從本試驗的結(jié)果可知，虎斑烏賊幼體的餌料以活糠蝦效果最佳，存活率為96.7%，特定生長率3.77%；強(qiáng)化鹵蟲后無節(jié)幼體次之，存活率95.6%，特定生長率2.54%。蝦糜與強(qiáng)化鹵蟲后無節(jié)幼體的混合效果一般，特定生長率僅為0.61%；其余餌料均不理想。分析原因可能是：1)攝食習(xí)性造成?；邽踬\幼體喜食活餌，不喜食死餌，幼體只在餌料沉降的過程中主動攝食，這與羅云云[20]等報道的曼氏無針烏賊喜歡沉降性飼料的結(jié)果相同。同時蝦糜、死糠蝦容易引起腐敗，造成水質(zhì)污染。2)餌料大小的適口性所致。虎斑烏賊幼體主要是靠觸腕捕捉食物，鹵蟲無節(jié)幼體(體長為0.25～0.35 mm)和橈足類(0.8～0.9 mm)可能個體相對偏小，不利于虎斑烏賊幼體捕捉和攝食；而糠蝦體長(4.5～6.0 mm)和強(qiáng)化鹵蟲幼體(體長為4.0～5.0 mm)相對較大，且與其口徑相吻合，利于虎斑烏賊幼體捕捉和攝食。3)營養(yǎng)的均衡性造成。鹵蟲無節(jié)幼體由于缺乏高度不飽和脂肪酸，尤其是DHA[21]，大量投喂易造成烏賊幼體營養(yǎng)不良；用富油微藻強(qiáng)化培養(yǎng)鹵蟲后無節(jié)幼體，就能彌補(bǔ)必需脂肪酸的不足，適合作為虎斑烏賊幼體的餌料；活糠蝦撈于土塘，是天然餌料，營養(yǎng)成分全面均衡，是一種極佳的虎斑烏賊育苗餌料。

3.4 投餌量對虎斑烏賊生長與存活率的影響

餌料的投喂量是育苗生產(chǎn)中的關(guān)鍵問題之一，投喂量多少不僅關(guān)系到育苗成本，還關(guān)系到育苗水體的理化因子等?？肺r不同的投餌量，對其末均體重影響顯著(P<0.05)，存活率隨著投餌量的增加而提高，日投喂量為8、10 g/d組存活率無顯著差異，達(dá)到最大(92.7±2.3)% ～(94±3.5%)；徐海洪[24]等曾報道，擬目烏賊幼體在各個階段能保持穩(wěn)定的增長速率，與本實驗結(jié)果相似(2、4 g/d的特定生長率3.9%左右，6、8、10 g/d特定生長率5.0%左右)。當(dāng)投餌量不足時，虎斑烏賊幼體為保持一定的生長速率，會淘汰其他個體，因此存活率隨著投餌量的減少而降低。投餌量不足，會加劇食物競爭，消耗的能量增多，導(dǎo)致個體體重增長緩慢，特定生長率有差距。不投餌對照組于第7 d開始出現(xiàn)大量死亡，此結(jié)果與謝曉暉[25]等報道虎斑烏賊幼體的PNR為8 d(24℃)接近，說明虎斑烏賊幼體對饑餓的抵抗能力較強(qiáng)。在試驗范圍內(nèi)，隨著幼體體重的增長，其攝食量也隨之增加，且攝食量占體重的15.76%±1.79%，此結(jié)果可作為今后虎斑烏賊人工育苗中投餌量多少的依據(jù)。

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