段雪艷 王介東 寧美英

國(guó)家人口計(jì)生委科學(xué)技術(shù)研究所（北京，100081）

米非司酮是孕激素受體拮抗劑。臨床上廣泛應(yīng)用于緊急避孕，以及腫瘤、子宮肌瘤、乳腺癌的治療［1］等。目前市售均為口服制劑，其缺點(diǎn)是具有顯著的“首過(guò)效應(yīng)”［2］，且若需要長(zhǎng)期用藥，則患者的順應(yīng)性較差。為了提高藥物的生物利用度和患者的依從性［3－4］，擴(kuò)大臨床用藥范圍，本實(shí)驗(yàn)室制備了緩釋長(zhǎng)效的米非司酮陰道避孕環(huán)［5］（簡(jiǎn)稱陰道環(huán)），即以硅橡膠彈性體為藥物載體，先將藥物研細(xì)過(guò)篩，再和硅橡膠顆粒充分混勻，通過(guò)模具壓制和高溫硫化，藥物均一分布于陰道環(huán)內(nèi)。米非司酮陰道環(huán)的硬度為60HA，外徑為50mm，橫截面直徑為4.6mm。為了對(duì)米非司酮陰道環(huán)的質(zhì)量進(jìn)行控制，本文建立了米非司酮陰道環(huán)含量測(cè)定的紫外－可見(jiàn)分光光度法。

1 材料與方法

1.1 儀器與材料

Lambder 35紫外－可見(jiàn)分光光度計(jì)（美國(guó)Perkin Elmer公司）；米非司酮陰道環(huán)（自制，3批批號(hào)：20111102，20111117，20111122）；米非司酮對(duì)照品（北京紫竹天工科技有限公司，批號(hào)：20100701，含量99.2%，高效液相色譜法測(cè)定）；甲醇為色譜純。

1.2 試驗(yàn)方法

1.2.1 溶液制備方法 對(duì)照品溶液制備：精密稱取米非司酮對(duì)照品25mg于50ml量瓶中，用甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，即得濃度為0.5mg／ml的米非司酮對(duì)照品溶液。精密量取2ml于100ml量瓶中，用甲醇稀釋至刻度，搖勻，即得濃度為10μg／ml的米非司酮對(duì)照品溶液。供試品溶液制備：取米非司酮陰道環(huán)，切碎（厚度約0.5mm），精密稱取1.0g（相當(dāng)于米非司酮12.5mg），置于100ml錐形中，加入25ml甲醇，室溫下磁力攪拌12h，濾過(guò)，取續(xù)濾液1ml于50ml量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，作為供試品溶液。陰性對(duì)照為不含米非司酮的陰道環(huán)，陰性供試品溶液制備同供試品溶液。

1.2.2 最大吸收波長(zhǎng)及線性范圍 分別取米非司酮對(duì)照品溶液、供試品溶液和陰性供試品溶液，以甲醇為空白，在200～400nm波長(zhǎng)范圍內(nèi)掃描，根據(jù)吸光度曲線判斷最大吸收波長(zhǎng)。分別精密量取0.5 mg／ml米非司酮對(duì)照品溶液1.0、1.6、2.0、2.4、3.0 ml于100ml量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，在310nm波長(zhǎng)處測(cè)吸收度，以吸收度（A）對(duì)濃度（C）計(jì)算線性回歸方程，考察米非司酮的線性范圍。

1.2.3 精密度及穩(wěn)定性試驗(yàn) 分別精密量取0.5 mg／ml米非司酮對(duì)照品溶液適量，配制高、中、低濃度溶液（5.0、10.0和15.0μg／ml），每個(gè)濃度平行3份樣品，分別進(jìn)樣，考察日內(nèi)和日間精密度。取10.0μg／ml米非司酮對(duì)照品溶液，分別于0、1、2、4、8、24h測(cè)定其吸光度，考察米非司酮溶液的穩(wěn)定性，即相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差［RSD%＝（標(biāo)準(zhǔn)偏差／平均測(cè)定值）×100%］。

1.2.4 回收率 每批稱取3份1.0g米非司酮陰道環(huán)碎片，置于100ml錐形瓶中，加入米非司酮對(duì)照品7.5、12.5和17.5mg，研磨均勻，加25ml甲醇，密封，室溫下磁力攪拌提取12h。濾過(guò)，取續(xù)濾液1 ml于100ml量瓶中，用流動(dòng)相稀釋至刻度，搖勻，在310nm波長(zhǎng)處進(jìn)行測(cè)定，計(jì)算回收率。

1.3 含量測(cè)定

制備米非司酮對(duì)照品溶液和3批供試品溶液，每批平行3份樣品，分別在310nm波長(zhǎng)處測(cè)定吸收度，采用外標(biāo)一點(diǎn)法計(jì)算米非司酮陰道環(huán)含量。

2 結(jié)果

2.1 最大吸收波長(zhǎng)

對(duì)照品溶液和供試品溶液均在310nm波長(zhǎng)處有最大吸收，而空白輔料（PVP和空白硅橡膠載體）在此波長(zhǎng)下無(wú)吸收，故選擇310nm作為檢測(cè)波長(zhǎng)。

2.2 線性范圍

米非司酮在5.0～15.0μg／ml的濃度范圍內(nèi)時(shí)吸光度與濃度有良好的線性關(guān)系?；貧w方程為A＝0.0523C－0.0231，r＝0.9999。米非司酮的最低檢測(cè)限（LOD）為2μg／ml，最低定量限（LOQ）為5μg／ml。

2.3 精密度

日內(nèi)、日間精密度均＜2%，說(shuō)明本方法在低、中、高3個(gè)濃度的精密度良好。見(jiàn)表1。

2.4 穩(wěn)定性

米非司酮在24h內(nèi)穩(wěn)定，RSD為0.72%。

2.5 回收率

結(jié)果見(jiàn)表2，其平均回收率為（100.23±0.38）%。表明本方法的回收率符合要求，即RSD＜2%。

表1 樣品的日內(nèi)和日間精密度

表2 米非司酮的加樣回收率

表2 米非司酮的加樣回收率

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2.6 含量測(cè)定

3批陰道環(huán)的米非司酮含量分別為（90.67±0.50）%、（91.78±0.72）%和（93.17±0.34）%，平均含量為（91.87±1.25）%，均符合要求（藥審中心制定的藥品研發(fā)標(biāo)準(zhǔn)為90%～110%）。

3 討論

米非司酮不僅具有避孕作用，同時(shí)也可以治療其他婦科疾病，如子宮肌瘤和子宮內(nèi)膜異位癥等，其口服制劑具有嚴(yán)重的“首過(guò)效應(yīng)”，生物利用度低，且患者長(zhǎng)期使用的耐受性較差，因此本課題組開(kāi)發(fā)了一種低劑量的緩釋或控釋米非司酮陰道環(huán)，預(yù)防女性非意愿妊娠和治療婦科疾病等。米非司酮陰道環(huán)是以硅橡膠為載體的一種長(zhǎng)效緩釋制劑，它能夠緩慢、長(zhǎng)期、近恒速地釋放藥物，從而避免了肝臟的“首過(guò)效應(yīng)”，并維持了血藥濃度的相對(duì)穩(wěn)定，具有安全、可靠、有效、依從性好等特點(diǎn)。

為了對(duì)米非司酮陰道環(huán)的質(zhì)量進(jìn)行控制，本文建立了紫外－可見(jiàn)分光光度法（對(duì)照品法）。經(jīng)過(guò)線性范圍、精密度、穩(wěn)定性和回收率等的考察，結(jié)果證實(shí)本方法可以用于米非司酮陰道環(huán)的含量測(cè)定。文獻(xiàn)中報(bào)道的米非司酮含量測(cè)定方法包括非水滴定法、高效液相色譜法、旋光法和紫外－可見(jiàn)分光光度法（吸收系數(shù)法）［6－10］。與這些方法相比較，本文建立的紫外－可見(jiàn)分光光度法（對(duì)照品法）具有經(jīng)濟(jì)環(huán)保、操作簡(jiǎn)便、測(cè)定快速和結(jié)果準(zhǔn)確的特點(diǎn)，可用于米非司酮陰道環(huán)的快速質(zhì)量檢驗(yàn)，尤其適用于基層檢驗(yàn)所與制藥廠，可以用于米非司酮陰道環(huán)的質(zhì)量控制與檢驗(yàn)，以及米非司酮陰道環(huán)生產(chǎn)過(guò)程的質(zhì)量監(jiān)督。

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