康喆恒 曾貴全

(四川省鄧崍市農(nóng)村發(fā)展局畜牧獸醫(yī)服務(wù)中心,四川鄧崍 611530)

頸側(cè)和尾根結(jié)核菌素皮內(nèi)試驗(yàn)在奶牛結(jié)核病監(jiān)測(cè)中的應(yīng)用探討

康喆恒 曾貴全

(四川省鄧崍市農(nóng)村發(fā)展局畜牧獸醫(yī)服務(wù)中心,四川鄧崍 611530)

結(jié)核病是由結(jié)核分枝桿菌引起的一種古老的、危害嚴(yán)重的且防控難度大的人畜共患慢性傳染病。牛是最易感染結(jié)核病的動(dòng)物，牛結(jié)核病被世界動(dòng)物衛(wèi)生組織（OIE）定為B類(lèi)傳染病，我國(guó)將其列入二類(lèi)動(dòng)物疫病。牛結(jié)核病和人結(jié)核病可以相互傳染，約10.6%的人結(jié)核病是由牛結(jié)核桿菌引起的，約7%的牛結(jié)核病是由人結(jié)核桿菌引起的[1]，由此可見(jiàn)攜帶結(jié)核桿菌的牛是人結(jié)核病的最大傳染源之一。隨著現(xiàn)代社會(huì)對(duì)牛奶制品的消費(fèi)量越來(lái)越大，人的結(jié)核病發(fā)病率也在上升，社會(huì)流行病學(xué)研究顯示二者呈明顯的流行病學(xué)相關(guān)性[2]，食用消毒不徹底的牛奶制品已經(jīng)成為人類(lèi)感染結(jié)核病的一大潛在重要途徑。

因此，奶牛結(jié)核病的監(jiān)測(cè)是動(dòng)物疫病預(yù)防控制機(jī)構(gòu)每年度必須認(rèn)真開(kāi)展的一項(xiàng)重要工作。但是基層動(dòng)防機(jī)構(gòu)每年的監(jiān)測(cè)量較大，受人手、設(shè)備、監(jiān)測(cè)成本、監(jiān)測(cè)手段、監(jiān)測(cè)時(shí)間等客觀條件限制，無(wú)法采用細(xì)菌學(xué)、血清學(xué)、動(dòng)物試驗(yàn)等檢測(cè)方法來(lái)監(jiān)測(cè)，而主要采用動(dòng)物結(jié)核病診斷技術(shù)（GB/T 18645-2002）中規(guī)定的牛型結(jié)核分枝桿菌PPD皮內(nèi)變態(tài)反應(yīng)試驗(yàn)來(lái)監(jiān)測(cè)。這個(gè)試驗(yàn)經(jīng)過(guò)大家多年的探索，目前有頸側(cè)皮試和尾根皮試兩種方法。

1 操作方法及判定標(biāo)準(zhǔn)

（1）頸側(cè)皮試的操作方法及判定標(biāo)準(zhǔn)：

①注射部位及術(shù)前處理：將牛只編號(hào)后在頸側(cè)中部上三分之一處剪毛（或提前一天剃毛），三個(gè)月以內(nèi)的犢牛，也可在肩胛部進(jìn)行，直徑約10cm。用卡尺測(cè)量術(shù)部中央皮皺厚度，作好記錄。注意，術(shù)部應(yīng)無(wú)明顯的病變。

②注射劑量：不論大小牛只，一律皮內(nèi)注射0.1ml（含2000IU）。即將牛型結(jié)核分枝桿菌PPD稀釋成含2萬(wàn)IU/ml后，皮內(nèi)注射0.1ml。凍干PPD稀釋后當(dāng)天用完。

③注射方法：先以75%酒精消毒術(shù)部，然后皮內(nèi)注射定量的牛型結(jié)核分枝桿菌PPD，注射后局部應(yīng)出現(xiàn)小皰，如對(duì)注射有疑問(wèn)時(shí)，應(yīng)另選15cm以外的部位或?qū)?cè)重作。

④注射次數(shù)和觀察反應(yīng)：皮內(nèi)注射后經(jīng)72h判定，仔細(xì)觀察局部有無(wú)熱痛、腫脹等炎性反應(yīng)，并以卡尺測(cè)量皮皺厚度，作好詳細(xì)記錄。對(duì)疑似反應(yīng)牛應(yīng)立即在另一側(cè)以同一批PPD同一劑量進(jìn)行第二回皮內(nèi)注射，再經(jīng)72h觀察反應(yīng)結(jié)果。

對(duì)陰性牛和疑似反應(yīng)牛，于注射后96h和120h再分別觀察一次，以防個(gè)別牛出現(xiàn)較晚的遲發(fā)型變態(tài)反應(yīng)。

結(jié)果判定

①陽(yáng)性反應(yīng)：局部有明顯的炎性反應(yīng)，皮厚差大于或等于4.0mm。

②疑似反應(yīng)：局部炎性反應(yīng)不明顯，皮厚差大于或等于2.0mm、小于4.0mm。

③陰性反應(yīng)：無(wú)炎性反應(yīng)。皮厚差在2.0mm以下。

凡判定為疑似反應(yīng)的牛只，于第一次檢疫60d后進(jìn)行復(fù)檢，其結(jié)果仍為疑似反應(yīng)時(shí)，經(jīng)60d再?gòu)?fù)檢。如仍為疑似反應(yīng)，應(yīng)判為陽(yáng)性。

（2）尾根皮試的操作方法及判定標(biāo)準(zhǔn)：

①注射部位及術(shù)前處理：操作者站在牛身后，一只手抓住牛尾巴往上翹，手離尾根部約30cm，使其與水平線成45°～60°，不用測(cè)量術(shù)部皮皺厚度。注意此時(shí)握牛尾的手拇指在上，使牛尾自然抬起，不要在中間彎曲或偏向一側(cè)，否則牛會(huì)因疼痛而不安，影響正常操作。

②注射劑量：同頸側(cè)皮試。

③注射方法：同頸側(cè)皮試，一律注射于尾根左側(cè)便于觀察。

④注射次數(shù)和觀察反應(yīng)：皮內(nèi)注射后經(jīng)72h判定，仔細(xì)觀察局部有無(wú)熱痛、腫脹等炎性反應(yīng)，不用測(cè)量皮皺厚度，對(duì)疑似反應(yīng)牛應(yīng)立即在另一側(cè)以同一批PPD同一劑量進(jìn)行第二回皮內(nèi)注射，再經(jīng)72h觀察反應(yīng)結(jié)果。

結(jié)果判定

a）陽(yáng)性反應(yīng)：有任何程度可摸到或可見(jiàn)的熱、痛、皮膚增厚、腫脹等炎性反應(yīng)均判為疑似反應(yīng)[5]。

b）陰性反應(yīng)：無(wú)炎性反應(yīng)。

凡判為疑似反應(yīng)的牛只，按GB/T18645—2002的規(guī)定進(jìn)行復(fù)檢。

2 頸側(cè)皮試和尾根皮試的比較

（1）共同點(diǎn)：兩種方法的判定標(biāo)準(zhǔn)都是按照GB/T18645—2002的規(guī)定在注射結(jié)核菌素72h后觀察是否有炎性反應(yīng)，注射量不足或誤注入皮下都將影響檢測(cè)結(jié)果。

（2）不同點(diǎn)：頸側(cè)皮試要求高，需要特別保定牛頭并剃毛，測(cè)量皮皺厚度，前期耗時(shí)較長(zhǎng)，在基層大量監(jiān)測(cè)時(shí)需要多人協(xié)助，操作麻煩，效率偏低，且可能給人和牛都帶來(lái)危險(xiǎn)，造成不必要的損失，但是在后期觀察時(shí)非常方便，腫脹一眼可見(jiàn)，速度很快。這個(gè)方法和判定標(biāo)準(zhǔn)是完全按照GB/T18645—2002的規(guī)定進(jìn)行的，有據(jù)可依。

尾根皮試的好處是不需要完全保定，減少了牛的應(yīng)激反應(yīng)，對(duì)產(chǎn)奶量和生產(chǎn)性能影響較小，減少了不必要的步驟，操作簡(jiǎn)便易掌握，縮短了操作時(shí)間，使工作效率得到大幅提高，一個(gè)人即可完成操作，也更安全。但是在后期觀察時(shí)需要再次抬起牛尾，耗時(shí)較多，且注射部位離肛門(mén)較近，在環(huán)境中存在大量抗酸桿菌的氣候潮濕地區(qū)或衛(wèi)生狀況欠佳易發(fā)生注射感染的牧場(chǎng)，檢測(cè)結(jié)果可能會(huì)受到干擾。此外還有觀點(diǎn)認(rèn)為尾根皮膚對(duì)結(jié)核菌素的敏感性比頸側(cè)皮膚低，漏檢率可能偏高。這個(gè)方法和判定依據(jù)是是近年來(lái)從實(shí)踐中摸索出來(lái)的，其科學(xué)性還有待相關(guān)部門(mén)的確定。

由以上情況可見(jiàn)，頸側(cè)和尾根皮試都不是完全理想的皮試方法，實(shí)際操作中應(yīng)視現(xiàn)實(shí)條件來(lái)決定選擇哪個(gè)部位，并靈活采用一些調(diào)整措施來(lái)降低操作難度，適當(dāng)縮短操作時(shí)間，提高檢測(cè)準(zhǔn)確性，筆者認(rèn)為選擇注射部位的條件和可以采用的調(diào)整措施如下：

注射前做好皮膚消毒；準(zhǔn)確地將結(jié)核菌素說(shuō)明書(shū)上標(biāo)明的1頭份注進(jìn)皮內(nèi)，誤注入皮下或注入量不足須重打；

做頸側(cè)皮試時(shí)，接種前后都由同一名熟練操作者測(cè)量皮厚以盡量避免人為的讀數(shù)偏差；針對(duì)尾根皮膚比頸側(cè)皮膚敏感性低的問(wèn)題，做尾根皮試時(shí)可適當(dāng)將劑量提高至頸側(cè)皮試注射量的1.5～2倍；

監(jiān)測(cè)量小而人手充足、時(shí)間充裕時(shí)可在頸側(cè)做初檢，監(jiān)測(cè)量大時(shí)可在尾根做初檢；凡判為疑似反應(yīng)的牛應(yīng)按GB/T18645—2002的規(guī)定進(jìn)行復(fù)檢；

氣候潮濕地區(qū)或衛(wèi)生狀況不佳的牧場(chǎng)可在頸側(cè)做初檢，氣候干燥地區(qū)或衛(wèi)生狀況良好的牧場(chǎng)可在尾根做初檢；凡判為疑似反應(yīng)的牛處理同（3）。

需要說(shuō)明的是，由于動(dòng)物個(gè)體差異、結(jié)核桿菌菌型差異等原因，不論是頸部還是尾根皮試都不一定能檢出全部陽(yáng)性牛，有時(shí)可能會(huì)出現(xiàn)非特異性反應(yīng)，因此，基層機(jī)構(gòu)檢出的疑似反應(yīng)牛如有必要需采樣送上級(jí)機(jī)構(gòu)復(fù)檢，結(jié)合流行病學(xué)調(diào)查、臨床癥狀觀察、病理學(xué)檢驗(yàn)和微生物學(xué)檢驗(yàn)等方法進(jìn)行綜合分析，才能做出更可靠、更準(zhǔn)確的診斷。為撲殺陽(yáng)性牛提供有力證據(jù)，讓牛主心服口服，避免因錯(cuò)殺造成不必要的經(jīng)濟(jì)損失而使牛主抵觸以后的監(jiān)測(cè)工作。

[1] 李金嶺，郭宏軍，王麗艷，等.國(guó)內(nèi)外牛結(jié)核病的防制現(xiàn)狀及檢測(cè)手段[J].獸醫(yī)導(dǎo)刊，2007，（12）：18-37.

[2] 王云霞，于三科，瞿軍軍.牛結(jié)核病的現(xiàn)狀及診斷研究進(jìn)展[J].動(dòng)物醫(yī)學(xué)進(jìn)展，2006，27（6）：38-41.

[3] 靳善寧，馬 杰，韓冰毅，等．牛尾根靜脈采血技術(shù)[J].中國(guó)畜牧獸醫(yī)文摘，2011，27（4）：126-127.

[4] 衛(wèi)龍興，成建忠.牛結(jié)核病流行病學(xué)與診斷技術(shù)研究進(jìn)展[J].現(xiàn)代農(nóng)業(yè)科技，2010，（21）：345-348.