粗蛋白質(zhì)是飼料最重要的常規(guī)營養(yǎng)指標(biāo)之一，目前主要測(cè)定方法是凱氏定氮法。該方法操作簡單，但過程比較復(fù)雜，如果不注意細(xì)節(jié)，往往會(huì)導(dǎo)致結(jié)果準(zhǔn)確度不高。

1 采樣及制備

試樣采集必須具有代表性，這是準(zhǔn)確測(cè)定飼料粗蛋白質(zhì)的基礎(chǔ)。樣品制備也很關(guān)鍵，粉碎后要能全部通過40目分樣篩并立即放入密封容器。

2 稱樣

國家標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定稱取試樣0.5～1 g，濃縮飼料可稱取0.5±0.05 g，配合飼料可稱取0.7±0.05 g，這樣能保證滴定時(shí)消耗鹽酸標(biāo)準(zhǔn)溶液的體積較為一致，有利于提高測(cè)定的準(zhǔn)確度。

3 消煮

國家標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定用消煮爐或電爐，建議選擇帶程序升溫的凱氏專用消煮爐，能保證升溫均勻，重復(fù)性好，準(zhǔn)確度高。國家標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定使用五水硫酸銅和無水硫酸鉀，消煮液容易結(jié)晶，建議使用商品化硫酸鉀和硒粉，產(chǎn)品為片狀，使用方便，沒有干擾、負(fù)反應(yīng)發(fā)生，消煮時(shí)間短，反應(yīng)徹底，能提高測(cè)定準(zhǔn)確度。最好用程序升溫，開始時(shí)低溫（200～300℃）消煮，防止試樣起泡向上溢時(shí)碳化后的顆粒附于消化管壁上，消煮不完全；泡沫消失后使溫度上升到420℃，保持1 h。

4 空白測(cè)定

因?yàn)榭瞻诇y(cè)定消耗鹽酸標(biāo)準(zhǔn)溶液的體積值直接帶入計(jì)算公式，所以空白測(cè)定這一步驟對(duì)于提高測(cè)定結(jié)果的準(zhǔn)確度至關(guān)重要。測(cè)定時(shí)的步驟要完全和試樣測(cè)定步驟一致，所用硫酸、蒸餾水、鹽酸標(biāo)準(zhǔn)滴定溶液、氫氧化鈉溶液、硼酸吸收液等要為同一批次產(chǎn)品并配制足夠一批試驗(yàn)使用，否則要重新測(cè)定空白值。

5 標(biāo)準(zhǔn)滴定溶液

鹽酸標(biāo)準(zhǔn)滴定溶液的濃度直接影響結(jié)果的準(zhǔn)確度，配制和標(biāo)定一定要嚴(yán)格按照GB/T 601的規(guī)定。配制時(shí)使用分析純或優(yōu)級(jí)純鹽酸，標(biāo)定時(shí)做到雙人八平行，工作基準(zhǔn)試劑無水碳酸鈉按規(guī)定溫度灼燒至恒重，同時(shí)做空白試驗(yàn)。

6 質(zhì)控實(shí)驗(yàn)

凱氏定氮的質(zhì)控實(shí)驗(yàn)是測(cè)定分析純硫酸銨的含氮量。國標(biāo)要求精確稱取硫酸銨0.2 g代替試樣，按氨的蒸餾步驟進(jìn)行操作，沒有提到加硫酸，為了更準(zhǔn)確測(cè)定硫酸銨含氮量、更好和試樣測(cè)定時(shí)的酸堿度保持一致，可添加和試樣同樣量的硫酸。為了提高測(cè)定準(zhǔn)確度，在試劑批次改變時(shí)都做質(zhì)控實(shí)驗(yàn)。質(zhì)控實(shí)驗(yàn)測(cè)得硫酸銨的含氮量應(yīng)為21.19±0.2%，否則應(yīng)檢查加減、蒸餾和滴定各步驟是否正確。

7 滴 定

滴定是提高測(cè)定準(zhǔn)確度的關(guān)鍵所在。用移液器加入硼酸吸收液的混合指示劑0.1mL，能保證滴定終點(diǎn)時(shí)顏色變化一致，便于把握滴定終點(diǎn)；吸收液的體積以達(dá)到100mL為宜，這也是為了把握滴定終點(diǎn)的顏色；滴定速度保持6～8mL·min-1，和標(biāo)定時(shí)的滴定速度保持一致，滴定近終點(diǎn)時(shí)要緩慢加入，待顏色變化和空白測(cè)定顏色一致時(shí)停止；讀數(shù)時(shí)要從滴定臺(tái)上取下滴定管，讓滴定管自然垂直，雙眼平視凹液面，記錄滴定消耗體積。