包汝潑， 梁 偉

（寧波天衡藥業(yè)股份有限公司， 浙江 寧波 315201）

垂盆草片提取工藝及制劑處方的研究

包汝潑， 梁 偉

（寧波天衡藥業(yè)股份有限公司， 浙江 寧波 315201）

目的 優(yōu)化垂盆草片提取工藝及制劑處方。方法 采用正交設(shè)計法，以提取物中的槲皮素、山柰素和異鼠李素總量作指標(biāo)，考察加水量、煎煮次數(shù)、煎煮時間對提取效果的影響；通過垂盆草中間體顆粒的引濕性和片劑的質(zhì)量差異及崩解限度等質(zhì)量指標(biāo)選擇制劑處方。 結(jié)果 優(yōu)選的提取工藝為加 10 倍量水煎煮 3 次， 每次 60 min； 處方組成為浸膏粉、微晶纖維素、聚維酮、微粉硅膠和硬脂酸鎂。結(jié)論 所選提取工藝及制劑處方科學(xué)合理，質(zhì)量穩(wěn)定。

垂盆草片；正交試驗；槲皮素；引濕性

垂盆草片收載在 《中國藥典》 1977 年版一部， 以景天科垂盆草經(jīng)提取制備而成，具有清熱解毒、活血利濕之功效［1］。 本公司生產(chǎn)該品 種多年， 但因 原有標(biāo)準(zhǔn)要求比較低，中間浸膏粉無有效成分的控制，生產(chǎn)處方和參數(shù)設(shè)置也以經(jīng)驗為主，沒有具體的量化，為了更好保證質(zhì)量，使工藝流程更趨科學(xué)合理，本實驗對藥材提取和處方工藝進(jìn)行優(yōu)化，獲取最佳工藝條件。

1 儀器與試藥

1.1 儀器 Agilent1260 高效液相色譜系統(tǒng) （ 美國安捷倫科技有限公司）， RE-85Z旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀 （ 上海醫(yī)械專 機(jī)廠），SHL-3 型高速攪拌濕法造粒機(jī) （ 上海美陽機(jī)械發(fā)展有限公司）； ZPS008 旋轉(zhuǎn)壓片機(jī) （上海天祥健臺制藥機(jī)械有限公司）； AE240 型電子天平 （中國梅特勒-托利多儀器廠）。

1.2 試藥 槲皮素對照品 （100081-200406）、 山柰素對照品 （0861-200002） 、 異 鼠 李 素 對 照 品 （110860-200205 ） 均為中國食品藥品檢定研究院提供，供含量測定用；垂盆草購自寧波市藥材股份有限公司，經(jīng)檢驗符合 《中國藥典》2010 年版一部有關(guān)標(biāo)準(zhǔn)， 輔料購自正規(guī)醫(yī)藥企業(yè)， 乙腈等試劑符合色譜要求。

2 實驗方法和結(jié)果

2.1 垂盆草浸膏和藥材中成分測定［2］

2.1.1 色 譜條 件 diamonsil ODS 色 譜 柱 （ 250 mm×4.6 mm， 5 μm）； 流動相為甲醇-0.4%磷酸 （48 ∶52）； 檢測波長 360 nm； 體積流量 1.0 mL/min； 柱溫 30 ℃； 進(jìn)樣量 10 μL。 此條件下， 垂盆草片中3 種指標(biāo)性成分達(dá)到較好的分離效果， 分離度大于 1.5， 理論板數(shù)按槲皮素峰計算不低于3 000， 典型圖譜如圖 1。

圖1 混合對照品溶液 （A） 和樣品溶液（B） 的 HPLC色譜圖

2.1.2 對照品溶液的制備 取槲皮素、 山柰素、 異鼠李素對照品適量， 精密稱定， 加甲醇制成每 1 mL各含 20 μg、 5 μg、 5 μg的混合溶液， 即得。

2.1.3 供試品溶液的制備 取浸膏或藥材約 0.5 g， 精密稱定， 加入甲醇-25%鹽酸溶液 （4 ∶1） 混合溶液 25 mL，稱定質(zhì)量， 加熱回流 1 h， 放冷， 再稱定質(zhì)量， 用甲醇-25%鹽酸溶液 （4 ∶1） 混合溶液補(bǔ)足減失的質(zhì)量， 搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得。

2.1.4 線性關(guān)系考察 分別取 18.22 μg/mL的槲皮素、4.805 μg/mL的山柰素和 4.628 μg/mL的異鼠李素對照品溶液各 2.0、 5.0、 10.0、 20.0、 50.0 μL注入液相色譜儀測定， 以峰面積 A為縱坐標(biāo)， 進(jìn)樣量 C（μg） 為橫坐標(biāo)，求得槲皮素、山柰素和異鼠李素回歸線性方程分別為：A槲皮素=4 250.4C-22.656 （r2=0.999 9）， A山柰素=4 337.5 C-8.388 （ r2=0.999 5）， A異鼠李素=4 156.5C-13.146（r2=0.997 1）， 結(jié) 果表明槲 皮 素在進(jìn)樣量 為0.036 44 ～0.911 1 μg范 圍 內(nèi) 線 性 良 好、 山 柰 素 在 進(jìn) 樣 量 為0.009 610 ～0.240 2 μg范圍內(nèi)線性良好、 異鼠李素在進(jìn)樣量為0.009 256 ～0.462 8 μg范圍內(nèi)線性良好。

2.1.5 重復(fù)性試驗 稱取浸膏 （批號為 20120501） 樣品 6份， 按 “2.1.3” 項下制備供試品， 分別測定， 計算 RSD，結(jié)果槲皮素質(zhì)量分?jǐn)?shù)為 1.47 mg/g（RSD=0.9%）， 山柰素質(zhì)量分?jǐn)?shù)為 0.19 mg/g（RSD=1.3%）， 槲皮素質(zhì)量分?jǐn)?shù)為0.090mg/g（RSD=2.9%）， 說明方法重復(fù)性良好。

2.1.6 加樣回收率試驗 以浸膏粉為例， 取 6 份 0.25 g左右的浸膏 （批號為 20120501）， 精密稱定， 各加入槲皮素對照 品 （0.070 23 mg/mL）、 山 柰 素 對 照 品 （0.010 01 mg/mL） 和異鼠李素對照品 （0.004 628mg/mL） 混合液 5 mL， 混勻， 依法測定， 計算回收率和 RSD， 結(jié)果顯示槲皮素的平均回收率為 97.7% （RSD=0.8%）， 山柰素平均回收率為 101.87% （RSD=2.2%）， 異鼠李素的平均回收率為98.8% （RSD=2.3%）， 表明本法符合定量測定的要求。

2.1.7 樣品的測定 按上述供試品制備方法制備后， 精密吸取溶液 10 μL， 注入液相色譜儀測定， 即得。

2.2 片重差異的測定 取藥片 20 片， 精密稱定， 求得平均片重后，再分別精密稱定每片的質(zhì)量，每片重與平均片重相比較，計算超出質(zhì)量的最大限度。

2.3 崩解時限和引濕性試驗的測定 參考 《中國藥典》2010 年版一部附錄崩解時限檢查法 （附錄 XIIA）， 取素片6 片置吊籃玻璃管中， 于 （37 ±1）℃的恒溫水中， 按每 1 min 作 30 ～32 次上下移動， 記錄各片崩解成碎粒全部通過篩網(wǎng)的時間。

參考 《中國藥典》 2010 年版二部附錄引濕性試驗指導(dǎo)原則 （附錄 XIX J）， 將混合好的粉末干燥至恒重后， 在已恒重的稱量瓶底部放入厚約1 mm的粉末，放置在溫度為（25 ±1）℃， 相對濕度為 64% ±2%的恒溫培養(yǎng)箱中保持 24 h后取出稱量，按該指導(dǎo)原則公式計算增重百分率。

2.4 提取工藝條件的篩選［3］

2.4.1 提取工藝的正交設(shè)計 根據(jù)大部分有效成分具有水溶性特點［4］及藥品注冊法規(guī)要求， 確定以水為提取溶媒，采用煎煮法提取， 并用 L9（34） 正交表安排試驗， 因素水平見表1。

表1 因素水平

2.4.2 實驗安排及結(jié)果 根據(jù)實驗方案， 稱取處方量藥材， 先浸泡 30 m in， 然后按正交試驗表項下設(shè)計的試驗條件進(jìn)行提取， 合并溶液， 減壓濃縮至浸膏相對密度 1.08 g/mL， 靜置 24 h， 離心， 取上清液濃縮至浸膏相對密度1.12 g/mL， 減壓干燥， 再按 “2.1” 項方法測定槲皮素、山柰素、 異鼠李素量，計算得率 （得率為浸膏中總量占投料藥材中總量的比例，按百分比計算），相同條件重復(fù)兩次實驗， 取平均值。 結(jié)果見表 2， 方差分析見表 3。

由方差分析表可知， 主次因素為 B＞A＞C，提取次數(shù)對成分提取有顯著性影響， 提取效果 B3＞B3＞B1， 由直觀分析得出最佳工藝為 A3B3C3， 考慮煎煮時間每次 80min 與每次 60min 相差不大， 煎煮時間太長一方面消耗能源， 一方面易破壞其他不穩(wěn)定成分，所以最終確定提取工藝為A3B3C2， 即 加 10 倍量 水 ， 提取 3 次， 每次煎煮 60 min。

表2 提取工藝正交試驗方案及結(jié)果

表3 結(jié)果的方差分析

2.5 設(shè)備的改造［5］垂盆草浸膏粉制粒時黏合劑加入過度集中易致局部過濕，會產(chǎn)生大量團(tuán)塊不能整粒過篩，如果通過加高乙醇體積分?jǐn)?shù)，既提高了生產(chǎn)成本又降低了生產(chǎn)安全性，非最佳方法，本實驗采用噴霧法造粒，將噴嘴安裝到造粒鍋頂部，用壓力罐將黏合劑以噴霧形式噴入造粒鍋中，溶液被霧化分散到物料上，制粒過程沒有成團(tuán)現(xiàn)象，顆粒的均勻性和流動性都有很大的改善。

2.6 處方的篩選［6］按表 4 處方比例稱取浸膏粉與輔料共2 kg左 右 ， 倒入 高 速攪拌濕 法 造 粒 機(jī) 中 混 勻， 加 入 80%乙醇的 PVP黏合劑， 按規(guī)定時間攪拌制軟材， 20 目篩濕整，60 ℃烘箱干燥后整粒， 外加硬脂酸鎂混合 （取一部分做引濕性實驗） ， 壓片 （ 以 浸 膏 粉 計 算 為 0.32 g/片） ， 檢 查 素片的重量差異和崩解度， 記錄數(shù)據(jù)， 統(tǒng)計結(jié)果見表5。

表4 不同處方組成

表5 不同處方的樣品質(zhì)量數(shù)據(jù)比較

從表5各組試驗數(shù)據(jù)可見，處方1加了交聯(lián)聚維酮增加了引濕性，并且在壓片中出現(xiàn)了粘沖現(xiàn)象，不利于大規(guī)模生產(chǎn)， 處方2崩解時限最長， 易致崩解不合格， 處方3、4都符合質(zhì)量要求，考慮到中藥糖衣片服用量比較多，處方4在保證質(zhì)量的前提下，相對片重比較輕，服用量小，生產(chǎn)成本也降低，因此確定處方4為最終處方。

2.7 工藝驗證 根據(jù)試驗篩選結(jié)果， 進(jìn)行 3 批 40 萬片規(guī)模的生產(chǎn)驗證生產(chǎn)，結(jié)果3批浸膏的黃酮提取率分別為38.9%、 40.2%和 38.2%， 片劑生產(chǎn)過程中各項指標(biāo)符合要求，沒有出現(xiàn)粘沖和崩解不合格等現(xiàn)象，表明優(yōu)化所得工藝穩(wěn)定、可靠。

3 討論

3.1 垂盆草苷具有明顯的保肝作用， 常作為垂盆草質(zhì)量指標(biāo)成分［7］， 本實驗也曾以垂盆草苷作為含量測定成分， 但實踐中發(fā)現(xiàn)其作為水溶性氰苷類化合物，極不穩(wěn)定，受熱易分解， 各批提取物中含量相差達(dá)10倍， 很難客觀反映制劑的質(zhì)量。 后據(jù)文獻(xiàn)報道［8］垂盆草中黃酮類成分也有保肝作用，性質(zhì)相對穩(wěn)定，檢測方法也被藥典收錄，所以采用黃酮成分作為質(zhì)量控制指標(biāo)。

3.2 在進(jìn)行提取工藝優(yōu)化時， 為了減少各種不明原因及儀器操作引起的誤差，提高實驗結(jié)果的精度和可信度，在盡量平衡的操作基礎(chǔ)上各試驗做兩次，數(shù)據(jù)取兩者均值。同時在實驗中發(fā)現(xiàn)浸膏粉對片劑崩解影響也較大，主要是提取液濃縮時，表面產(chǎn)生的藥液膜一定要過濾去除，否則易造成片劑崩解不合格。

3.3 制粒工序是中藥片劑工藝的關(guān)鍵步驟， 粘沖、 崩解時限超標(biāo)和壓片頂裂等現(xiàn)象往往與制備的顆粒好壞有關(guān)［9］，本實驗對制粒的關(guān)鍵因素如黏合劑的種類、用量和攪拌時間等因素也進(jìn)行了優(yōu)化。

3.4 本品目前還是糖漿包衣， 生產(chǎn)工藝復(fù)雜， 操作過程中大多依賴操作者憑手感控制包衣質(zhì)量， 與 GMP精神不符，糖衣中的蔗糖成分同時限制了一部分患者的服用［10］， 本部門正在做相關(guān)研究擬用薄膜包衣來取代糖衣，以解決上述問題。

［ 1 ］ 宋玉華， 李春雨， 鄭 艷.垂盆草的研究進(jìn)展［J］.中藥材， 2010， 33（12）： 1973-1975.

［ 2 ］ 國家藥典委員會.中華人民共和國藥典： 2010 年版一部［S］.北京： 中國醫(yī)藥科技出版社， 2010： 198-199.

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R284.2

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： 1001-1528（2014）03-0646-04

10.3969/j.issn.1001-1528.2014.03.048

2013-04-12

包汝潑 （1976—） ， 男， 碩士， 高級工程師， 從事新藥研究。 E-mail： brp168@163.com