呂興萍， 胡容峰， 葉 蕾， 丁領(lǐng)振

（1.安徽中醫(yī)學(xué)院， 安徽合肥 230038； 2.江蘇農(nóng)林職業(yè)技術(shù)學(xué)院，江蘇 鎮(zhèn)江 212400）

高效液相色譜法測(cè)定六味地黃丸的溶出度

呂興萍1，2， 胡容峰1*， 葉 蕾1， 丁領(lǐng)振1

（1.安徽中醫(yī)學(xué)院， 安徽合肥 230038； 2.江蘇農(nóng)林職業(yè)技術(shù)學(xué)院，江蘇 鎮(zhèn)江 212400）

目的 建立以丹皮酚、 馬錢(qián)苷為指標(biāo)成分， 測(cè)定六味地黃丸溶出度的方法。 方法 照 《中國(guó)藥典》 2010 年版二部溶出度測(cè)定法中的小杯法， 以 200 mL脫氣人工胃液 （ 無(wú)酶） 為溶出介質(zhì)， 轉(zhuǎn) 速 100 r/min， 溫度 （37.0 ± 0.5） ℃。 采用高效液相色譜法外標(biāo)法定量， Hypersil C18色譜柱 （250 mm×4.6 mm， 5 μm） ； 流動(dòng)相 A為 0.05%磷酸溶液， B為乙腈梯度洗脫； 體積流量 1.0 mL/min； 檢測(cè)波長(zhǎng)為 234 nm （馬錢(qián)苷）、 274 nm （丹皮酚）。 結(jié)果 丹皮酚、馬錢(qián)苷分別在 4.03 ～36.27 μg/mL（r=0.999 4）、 3.02 ～27.18 μg/m L（r=0.999 5） 范圍內(nèi)呈良好線(xiàn)性關(guān)系， 平均回收率分別為 99.60%、 98.47%， RSD分別為 1.51%、 1.82%。 結(jié)論 本方法簡(jiǎn)便可靠， 精密度高， 重復(fù)性好， 可用于六味地黃丸溶出度的測(cè)定。

六味地黃濃縮丸；高效液相色譜；溶出度

六味地黃丸是被譽(yù)為 “補(bǔ)陰方藥之祖” 六味地黃方的一種制劑，由熟地黃、山藥、山茱萸、牡丹皮、澤瀉、茯苓六味中藥組成，千百年來(lái)受到廣大醫(yī)家和患者的推崇［1］。 溶出度是模擬口服固體制劑在胃腸道崩解和溶出的體外試驗(yàn)方法，不僅能反應(yīng)丸劑的質(zhì)量情況還能反應(yīng)體內(nèi)的吸收和藥效情況，因此建立溶出度的測(cè)定方法具有一定意義?，F(xiàn)行版藥典中尚未收載對(duì)六味地黃丸的溶出考察［2］， 另外到目前為止只有極少數(shù)關(guān)于六味地黃丸溶出度研究的報(bào)道， 且都是針對(duì)單一成分的考察［3-6］。 本實(shí)驗(yàn)是在參考文獻(xiàn)［7-11］基礎(chǔ)上采用高效液相色譜法以代表性水溶性成分馬錢(qián)苷［12-14］和代表性難溶性成分丹皮酚［15-16］為指標(biāo)測(cè)定了六味地黃丸的體外溶出度，為評(píng)價(jià)和控制六味地黃丸的質(zhì)量提供了依據(jù)。

1 儀器與試藥

六味地黃丸 （1071071， 北京同仁堂）， 丹皮酚對(duì)照品（paeonol， 中國(guó)藥品生物制品檢定所提供， 批號(hào)為 110708-200506） ； 馬錢(qián)苷對(duì)照品 （ loganin， 中國(guó)藥品生物制品檢定所提供， 批號(hào) 111640-201005）； 乙腈為色譜純； 島津 LC-10ATvp 高效液 相 色 譜 儀， Agilent 1100 高 效 液 相 色 譜 儀 及其工作站， 浙 江 智 達(dá) N2000 工 作 站； Hypersil C18（ 5μm，250mm×4.6mm） 色譜柱， ZRS-8G智能溶出試驗(yàn)儀 （ 天津大學(xué)無(wú)線(xiàn)電廠） ； 十萬(wàn)分之一電子天平 （ 德國(guó) Sartorius公司）； TU-1901 雙光束紫外可見(jiàn)分光光度計(jì) （北京普析通過(guò)儀器有限公司）。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件 流動(dòng)相 A為 0.05%磷酸溶液， B為乙腈，梯度洗脫 0 ～15 min， 86%A； 15 ～40 min， 50%A。 柱溫25 ℃， 體積流量 1.0 mL/min， DAD檢測(cè)器， 馬錢(qián)苷檢測(cè)波長(zhǎng)為 234 nm， 丹皮酚為 274 nm。 在上述色譜條件下， 取對(duì)照品和樣品溶出液進(jìn)樣，結(jié)果表明兩個(gè)成分能與其他成分達(dá)到較好的分離， 且理論塔板數(shù)均大于3 000， 結(jié)果見(jiàn)圖1、 圖2。

2.2 溶液的制備

2.2.1 對(duì)照品溶液 精密稱(chēng)取丹皮酚對(duì)照品 4mg、 馬錢(qián)苷對(duì)照品3mg， 分別置于 100mL量瓶中， 加甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻即得對(duì)照品貯備液。

2.2.2 供試品溶液 參照 《中國(guó)藥典》 2010 年版二部溶出度測(cè)定法 （附錄 XC第三法）， 以 200 mL 0.1 mol/L HCl為釋放介質(zhì)， 轉(zhuǎn)速 100 r/m in， 溫度 （37.0 ±0.5）℃。 分別于一定時(shí)間點(diǎn)取樣5 mL（每次取樣結(jié)束補(bǔ)充同溫同體積的釋放介質(zhì)）， 用 0.45 μm微孔濾膜過(guò)濾， 取續(xù)濾液作為供試品溶液。

圖1 對(duì)照品的色譜圖

圖2 六味地黃丸溶出液的色譜圖

2.3 線(xiàn)性關(guān)系的考察 精密吸取丹皮酚對(duì)照品貯備液 1、3、 5、 7、 9mL和馬錢(qián)苷對(duì)照品貯備液 1、 3、 5、 7、 9 mL分別置于 10 mL量瓶中加甲醇溶解并稀釋至刻度， 進(jìn)樣 20 μL， 測(cè)定峰面積， 以峰面積 A為縱坐標(biāo)， 質(zhì)量濃度 C為橫坐標(biāo)進(jìn)行線(xiàn)性回歸，得兩成分的的回歸方程及相關(guān)系數(shù)，見(jiàn)表1。

表1 各組分線(xiàn)性關(guān)系測(cè)定結(jié)果

2.4 精密度試驗(yàn) 取丹皮酚和馬錢(qián)苷混合標(biāo)準(zhǔn)溶液連續(xù)進(jìn)樣 6 次， 每次 20 μL。 結(jié)果： 丹皮酚的 RSD為 0.67%， 馬錢(qián)苷的 RSD為 1.11%。

2.5 穩(wěn)定性試驗(yàn) 取溶出時(shí)間為 4 h 的六味地黃丸的溶出液于0、 1、 2、 4、 8、 12 h 進(jìn)樣測(cè)定。 結(jié)果： 丹皮酚的 RSD為 0.96%， 馬錢(qián)苷的 RSD為 1.99%。

2.6 加樣回收率試驗(yàn) 精密稱(chēng)定已知含有量的六味地黃丸粉6份 ，分別精密稱(chēng)定加入丹皮酚、馬錢(qián)苷對(duì)照品，分別置于50mL量瓶中， 加甲醇充分溶解并稀釋至刻度， 過(guò)濾，取續(xù)濾液1mL加甲醇稀釋至10mL， 混勻， 取20 μL進(jìn)樣，測(cè)定峰面積，根據(jù)回歸方程計(jì)算馬錢(qián)苷和丹皮酚的量及回收率。 結(jié)果見(jiàn)表2、 表3。

表 2 丹皮酚加樣回收試驗(yàn)結(jié)果 （n=6）

表 3 馬錢(qián)苷加樣回收試驗(yàn)結(jié)果 （n=6）

2.7 溶出度的測(cè)定 取已知樣品含量 （按 《中國(guó)藥典》丹皮酚和馬錢(qián)苷項(xiàng)下含量測(cè)定方法測(cè)定） 的樣品8丸6份，進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。 按 “2.2.2” 項(xiàng)下操作， 分別于 2、 4、 6、 12、24 h 取 樣 5 mL， 用 0.45 μm微孔濾 膜過(guò)濾， 隨 即補(bǔ) 充 等 量的溶出介質(zhì)， 取續(xù)濾液 20 μL進(jìn)樣， 測(cè)定峰面積， 求算藥物質(zhì)量濃度并換算成不同時(shí)間的累積溶出百分率，取平均值。 各時(shí)間點(diǎn)均獲得滿(mǎn)意結(jié)果， 結(jié)果見(jiàn)表4。

表4 樣品測(cè)定結(jié)果 （n=6）

3 結(jié)論與討論

六味地黃丸為一中藥復(fù)方制劑，是通過(guò)中藥中多種成分的共同或協(xié)調(diào)作用起效的，且各成分間理化性質(zhì)差異大，釋放情況各不相同，所以在本實(shí)驗(yàn)中分別以丹皮中難溶性成分丹皮酚、山茱萸中水溶性成分馬錢(qián)苷為指標(biāo)成分，建立了六味地黃丸的溶出度測(cè)定方法。從實(shí)驗(yàn)結(jié)果可以看出，各成分分離效果好，方法簡(jiǎn)單、準(zhǔn)確，重現(xiàn)性好，穩(wěn)定性強(qiáng)，可以作為六味地黃丸的溶出度測(cè)定方法。

在本實(shí)驗(yàn)中檢測(cè)波長(zhǎng)的選擇是分別取丹皮酚和馬錢(qián)苷對(duì)照品貯備液于200 ～400 nm之間掃描， 結(jié)果丹皮酚在274 nm波長(zhǎng)處有最大吸收， 馬錢(qián)苷在 234 nm波長(zhǎng)處有最大吸收， 故選擇274 nm為丹皮酚的測(cè)定波長(zhǎng)， 234 nm為馬錢(qián)苷的測(cè)定波長(zhǎng)。

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R927

： B

： 1001-1528（2014）03-0652-03

10.3969/j.issn.1001-1528.2014.03.050

2013-02-12

國(guó)家自然科學(xué)基金資助項(xiàng)目 （81173556）

呂興萍 （1981—） ， 女， 講師， 碩士生， 研究方向： 中藥新劑型。 Tel：（0511）87290303， E-mail： xingping8702007@sohu.com

*通信作者： 胡容峰， 女， 教授， 碩士生導(dǎo)師， 研究方向： 中藥新劑型與新制劑。 Tel：（0551）5169225， E-mail： hurongfeng@163.com