李雪茹，劉虹，姜佳，郝彧，張德芹

（天津中醫(yī)藥大學(xué)中醫(yī)藥研究院，教育部方劑學(xué)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，天津 300193）

·學(xué)生園地·

不同廠家D101大孔樹脂對(duì)赤芍提取物純化工藝考察*

李雪茹，劉虹，姜佳，郝彧，張德芹

（天津中醫(yī)藥大學(xué)中醫(yī)藥研究院，教育部方劑學(xué)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，天津 300193）

[目的]考察相同型號(hào)（D101）不同廠家生產(chǎn)的大孔吸附樹脂對(duì)芍藥苷的富集工藝比較。[方法]以芍藥苷為指標(biāo)，對(duì)樹脂的靜態(tài)和動(dòng)態(tài)吸附、解吸附性能進(jìn)行了考察。[結(jié)果]A、B兩個(gè)廠家靜態(tài)吸附和解吸附性能較好，而B、D、E 3個(gè)廠家的動(dòng)態(tài)吸附和解吸附性能較好。[結(jié)論]不同廠家生產(chǎn)的D101大孔樹脂在對(duì)芍藥苷的吸附和解吸附性能上存在一定的差異。

赤芍；芍藥苷；D101大孔樹脂

根據(jù)國(guó)家食品藥品監(jiān)督管理局《應(yīng)用大孔吸附樹脂分離純化生產(chǎn)的保健食品申報(bào)與審評(píng)規(guī)定（試行）》中對(duì)保健食品生產(chǎn)工藝要求的規(guī)定，在應(yīng)用大孔樹脂進(jìn)行分離純化時(shí)要對(duì)樹脂的型號(hào)進(jìn)行選擇[1]。本課題組關(guān)于大孔樹脂純化工藝的在先研究也表明對(duì)樹脂型號(hào)進(jìn)行選擇是必要的[2-3]。而大孔樹脂作為一種具有大孔網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)的高分子吸附劑，由于骨架的不同使樹脂具有不同的極性。不同極性和含不同官能團(tuán)的樹脂對(duì)各類有效成分的吸附性能具有明顯的差異，因此，在對(duì)中藥有效成分或有效部位進(jìn)行富集純化時(shí)，對(duì)樹脂型號(hào)的選擇也是必不可少的[4-5]。在實(shí)際生產(chǎn)過程中即便選擇相同型號(hào)的樹脂，但是由于市售大孔樹脂缺乏嚴(yán)格統(tǒng)一的標(biāo)準(zhǔn)，因此不同廠家生產(chǎn)的相同型號(hào)的大孔樹脂在性能規(guī)格參數(shù)上具有一定的差異[6-7]，如樹脂孔徑、比表面積等，這些差異有可能對(duì)有效成分的富集產(chǎn)生影響。此類研究在文獻(xiàn)中的相關(guān)報(bào)道較少，因此本文以芍藥苷的富集為例，對(duì)不同廠家生產(chǎn)的相同型號(hào)D101大孔樹脂進(jìn)行了比較。

利用大孔樹脂對(duì)赤芍提取物進(jìn)行純化的工藝方法已有大量文獻(xiàn)報(bào)道[8-11]。本課題組的前期實(shí)驗(yàn)也確立了一套合理的赤芍提取、純化工藝路線[12-14]。因此本實(shí)驗(yàn)以原工藝為基礎(chǔ)，以赤芍中主要有效成分之一芍藥苷為指標(biāo)，對(duì)相同型號(hào)不同廠家（A、B、C、D、E）生產(chǎn)的D101大孔樹脂進(jìn)行了吸附和解吸附性能比較。

1 儀器和試藥

1.1 儀器Aglient1260液相色譜儀，EYEA旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀（東京理化），TD5G臺(tái)式過濾離心機(jī)（湖南湘儀），分析天平（METTLERTOLEDOXS205），SB25-12DTN超聲波清洗機(jī)（500 W）。

1.2 試藥赤芍飲片（北京同仁堂天津藥店有限公司）經(jīng)天津中醫(yī)藥大學(xué)生藥教研室李天祥副教授鑒定為毛茛科植物芍藥（Paeonia Lactiflora Pall）的干燥根；芍藥苷對(duì)照品（中國(guó)藥品生物制品檢定所110736-200525）；D101型大孔吸附樹脂分別來自五個(gè)不同的廠家（A、B、C、D、E）且均為凈品級(jí)；乙腈（美國(guó)MREDA THCHNOLOG公司，色譜純），水（Milli-Q制純水）。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件Hypersil ODS（250 mm×4.6 mm）色譜柱，流動(dòng)相為乙腈-水（14∶86），流速1.0 mL/min，柱溫25℃，檢測(cè)波長(zhǎng)230 nm，理論塔板數(shù)按芍藥苷計(jì)算不少于3 000。

2.2 線性關(guān)系考察

2.2.1 對(duì)照品溶液的配制精密稱取芍藥苷對(duì)照品適量于10 mL容量瓶中，用14%乙腈水溶液配成濃度為0.319 g/L的對(duì)照品溶液，備用。

2.2.2 標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制取“2.2.1”項(xiàng)下配制好的對(duì)照品溶液用相同溶劑稀釋至不同濃度后按“2.1”項(xiàng)下的色譜條件進(jìn)樣。以進(jìn)樣量M為橫坐標(biāo)，峰面積A為縱坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。結(jié)果顯示芍藥苷在0.319～9.570 μg范圍內(nèi)，峰面積A與進(jìn)樣量M有良好的線性關(guān)系。標(biāo)準(zhǔn)曲線方程為A=1 293.115 04M+ 40.573 477，r=0.999 94（n=6）。

2.3 精密度實(shí)驗(yàn)取“2.2.1”項(xiàng)下對(duì)照品溶液，按上述色譜條件，重復(fù)進(jìn)樣6次，記錄峰面積。峰面積的RSD為0.47%，結(jié)果表明本方法精密度良好。

2.4 供試品溶液的制備將上樣液、靜態(tài)吸附后余液、醇洗脫液，適度稀釋后，以0.45 μm微孔濾膜過濾，備用。

2.5 大孔樹脂柱上樣液的制備取赤芍藥材4.73kg，第1次加水10倍量，第2次加水8倍量煎煮，每次2 h。赤芍水提液減壓濃縮至1∶1（W/V），加2倍量80%乙醇，醇沉過夜，過濾去除沉淀，清液減壓濃縮回收乙醇至1∶1（W/V），加水使含生藥0.5g/mL，即得。

2.6 靜態(tài)吸附、解吸附實(shí)驗(yàn)取5個(gè)廠家生產(chǎn)的D101大孔樹脂各20 mL（大孔樹脂在水中沉降后的體積）于三角瓶中，精密加入上樣液100 mL，不時(shí)振搖，放置過夜后抽濾。按照上述供試品的制備方法和色譜條件，對(duì)吸附后余液中芍藥苷的總量進(jìn)行測(cè)定。計(jì)算5種樹脂對(duì)芍藥苷的靜態(tài)吸附力。靜態(tài)吸附力（g/L）=（上樣液中芍藥苷總量-吸附余液中芍藥苷總量）÷樹脂體積。靜態(tài)解吸率（%）=醇洗脫液中芍藥苷總量÷（上樣液中芍藥苷總量-吸附余液中芍藥苷總量）×100%。

將上述已飽和吸附的大孔樹脂，分別加入100mL 70%的乙醇，不時(shí)振搖，4 h后抽濾，測(cè)定濾液中芍藥苷的總量，計(jì)算5個(gè)廠家大孔樹脂對(duì)芍藥苷的靜態(tài)解吸率，結(jié)果見表1。

表1 不同廠家D101大孔樹脂對(duì)芍藥苷的靜態(tài)吸附力和靜態(tài)解吸率的比較（n=2）

由表1可以看出，靜態(tài)吸附力，B＞C＞A＞E＞D。靜態(tài)解吸率，E＞D＞B＞A＞C。適宜的樹脂應(yīng)對(duì)被吸附的指標(biāo)成分同時(shí)具有良好的吸附能力和良好的洗脫能力。綜合考慮A、B樹脂的效果較好。

2.7 動(dòng)態(tài)吸附回收率實(shí)驗(yàn)

2.7.1 動(dòng)態(tài)吸附回收率實(shí)驗(yàn)根據(jù)課題組在先研究[10]確定的赤芍純化工藝條件，用D101大孔樹脂230 mL裝柱（徑高比約為1∶4），水洗至無醇味后按1∶1上樣，即樹脂處理生藥1 g/mL。取2倍樹脂床體積的上樣液（含生藥0.5 g/mL），上樣。上樣后，先以3倍樹脂床體積的水洗滌，棄去水洗液，再用4倍樹脂床體積的70%乙醇洗脫，收集醇洗脫液，按照“2.4”項(xiàng)下供試品溶液的制備方法制備供試品，并按“2.1”項(xiàng)下的色譜條件進(jìn)高效液相色譜儀測(cè)定洗脫液中的芍藥苷總量，計(jì)算動(dòng)態(tài)吸附回收率。動(dòng)態(tài)吸附回收率（%）=醇洗脫液中芍藥苷總量÷上樣液中芍藥苷總量×100%。不同樹脂廠家A、B、C、D、E的D101大孔吸附樹脂對(duì)芍藥苷的動(dòng)態(tài)吸附回收率分別為95.3%、99.0%、95.7%、99.2%、99.0%，D＞B、E＞C＞A。

2.7.2 動(dòng)態(tài)放大實(shí)驗(yàn)選取了A、B兩個(gè)廠家的大孔樹脂各裝2根柱，樹脂體積均為650 mL。實(shí)驗(yàn)操作如“2.7.1”，醇洗脫液按照“2.4”項(xiàng)下供試品溶液的制備方法制備供試品，并按“2.1”項(xiàng)下的色譜條件進(jìn)高效液相色譜儀測(cè)定洗脫液中的芍藥苷總量，計(jì)算動(dòng)態(tài)吸附回收率。結(jié)果見表2。

表2 A、B廠家大孔樹脂對(duì)芍藥苷的吸附回收率比較（n=2）%

由以上實(shí)驗(yàn)結(jié)果可以看出，在富集芍藥苷的過程中，相同型號(hào)不同廠家的D101大孔樹脂的吸附和解吸附性能有一定差異。樹脂體積增大時(shí)，這種差異有減小的趨勢(shì)。

3 討論

本實(shí)驗(yàn)中所用到的樹脂分別為寶恩（A）、海光（B）、南大（C）、光復(fù)（D）、歐瑞（E）D101大孔樹脂。

在進(jìn)行樹脂型號(hào)選擇時(shí)，樹脂的靜態(tài)吸附、解吸附實(shí)驗(yàn)是較為方便的方法。但是，如果樹脂取用量太少，則容易造成實(shí)驗(yàn)結(jié)果的較大偏差。另外因?yàn)椴煌瑥S家生產(chǎn)的樹脂含水量不同，按質(zhì)量取用樹脂也是不合理的。因此本實(shí)驗(yàn)中對(duì)靜態(tài)實(shí)驗(yàn)樹脂的取用是樹脂在水中沉降后的體積。同時(shí)，在進(jìn)行動(dòng)態(tài)吸附、洗脫實(shí)驗(yàn)時(shí)，建議做放大實(shí)驗(yàn)增加樣本量以便選擇更適宜的樹脂。

大孔吸附樹脂型號(hào)較多，不同型號(hào)的樹脂對(duì)同一成分有不同的吸附，同一型號(hào)的樹脂由于參數(shù)、生產(chǎn)工藝的不同對(duì)有效成分也有不同程度的吸附。而中藥化學(xué)成分又極其復(fù)雜，因此必須根據(jù)功能主治明確其有效成分的類別和性質(zhì)，選擇合適的樹脂。在工業(yè)化生產(chǎn)的過程中，生產(chǎn)成本也是選擇樹脂的考慮因素之一，課題組在樹脂的購(gòu)買過程中發(fā)現(xiàn)，相同型號(hào)的樹脂在價(jià)格上具有很大的差異性，因此應(yīng)兼顧樹脂性能和生產(chǎn)成本，在兩者之間確定一個(gè)合適的平衡點(diǎn)。

[1]國(guó)家食品藥品監(jiān)督管理局.應(yīng)用大孔吸附樹脂分離純化工藝生產(chǎn)的保健食品申報(bào)與審評(píng)規(guī)定（試行）[J].中國(guó)食品衛(wèi)生雜志,2005,17(4):373-374.

[2]郝彧,劉虹,吳帥,等.大孔樹脂純化山楂葉提取物的工藝考察[J].天津中醫(yī)藥,2009,26(4):335-337.

[3]劉虹,楊虹,王萌,等.大孔樹脂純化香加皮提取物的工藝考察[J].天津中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報(bào),2006,25(3):188-190.

[4]屠鵬飛,賈存秦,張洪全.大孔吸附樹脂在中藥新藥研究和生產(chǎn)中的應(yīng)用[J].世界科學(xué)技術(shù)—中藥現(xiàn)代化,2004,6 (3):22-28.

[5]劉鄂湖,鄢丹,蔡光明,等.大孔吸附樹脂技術(shù)在中藥中應(yīng)用現(xiàn)存問題分析與探討[J].中草藥,2007,38(5):附3-5.

[6]張英,李衛(wèi)民,賴愛芬.大孔樹脂型號(hào)與規(guī)格的規(guī)范化探討[J].高分子通報(bào),2009,21(11):44-48.

[7]郭麗冰,王蕾.常用大孔吸附樹脂的主要參數(shù)和應(yīng)用情況[J].中國(guó)現(xiàn)代中藥,2006,8(4):26-30.

[8]竇志華,羅琳,盧丹.芍藥內(nèi)酯苷、芍藥苷雙指標(biāo)考察赤芍總苷大孔樹脂純化工藝[J].中藥材,2009,32（8）：1282-1284.

[9]劉帥英,徐文崢,李水福.赤芍中芍藥苷的大孔吸附樹脂純化研究[J].中草藥,2010,41(9):1480-1482.

[10]徐先祥,周麗,馬燕,等.大孔吸附樹脂提取赤芍總苷工藝條件研究[J].中成藥,2009,31(4):623-625.

[11]桂雙英,周亞球,柯仲成.D101型樹脂對(duì)芍藥苷吸附分離性能的研究[J].中藥實(shí)驗(yàn)方劑學(xué)雜志,2006,12(2):25-27.

[12]劉虹,王萌,郝彧,等.大孔樹脂純化赤芍提取物的工藝考察[J].天津中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報(bào),2009,28(3):142-145.

[13]皮佳鑫，高旭，于悅，等.赤芍提取物的吸濕性及不同提取工藝和輔料對(duì)其吸濕性的影響[J].天津中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報(bào)，2012，31（4）：221-224.

[14]趙啟鐸，舒樂新.酸棗仁總皂苷的含量測(cè)定[J].天津中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報(bào)，2013，32（4）：229-231.

Study on effect of D101macroporous resin produced by different manufacturers in Paeoniae extract purification

LI Xue-ru,LIU Hong,JIANG Jia,HAO Yu,ZHANG De-qin
（Institute of Traditional Chinese Medcine,Tianjin University of TCM,Key Laboratory of Pharmacology of Traditional Chinese Medical Formulae,Tianjin 300193,China）

[Objective]To perform a comparative study about the same type of macroporous resins from different manufactures on peoniflorin enriching.[Methods]Peoniflorin was taken as the index to investigate the resins’static and dynamic absorbtion and desorption performance.[Results]D101macroporous resin from A and B manufactures had a high static absorbtion and desorption performance,but B,D and E had a high performance in dynamic absorption and desorption.[Conclusion]There are some differences on the enrichment of peoniflorin by the same type of macroporous resins from different manufactures.

Radix paeoniae rubra;Peoniflorin;D101macroporous resin

R285.5

A

1673－9043（2014）01－0049-03

10.11656/j.issn.1673-9043.2014.01.17

2013－09－16）

“重大新藥創(chuàng)制”科技重大專項(xiàng)基金項(xiàng)目（2012ZX 09101212）。

李雪茹（1989-），女，碩士研究生，研究方向?yàn)橹兴幮滤庨_發(fā)。

劉虹，E-mail:liuhong2292@126.com。