劉麗麗，李曉霞，陳玥，孫瑾，劉二偉，張祎

（天津市中藥化學(xué)與分析重點實驗室，天津 300193）

槐米中酚酸類化學(xué)成分的研究*

劉麗麗，李曉霞，陳玥，孫瑾，劉二偉，張祎

（天津市中藥化學(xué)與分析重點實驗室，天津 300193）

[目的]對國槐（Sophora japonica L.）米中的酚酸類成分進行研究，為進一步開發(fā)利用該植物資源提供依據(jù)。[方法]采用正相硅膠、反相ODS、Sephadex LH-20等柱色譜及高效液相色譜法等方法進行分離純化，并通過理化性質(zhì)及光譜分析鑒定化合物的結(jié)構(gòu)。[結(jié)果]從國槐米70%的乙醇提取物中分離鑒定了5個酚酸類化合物，分別為3，4-二羥基苯甲酸（1）、原兒茶酸甲酯（2）、沒食子酸（3）、4-甲氧基-3，5-羥基苯甲酸（4）、枸櫞苦素（5）。[結(jié)論]2、3、5為從槐屬中首次分離得到的化合物。

槐米；酚酸類成分；結(jié)構(gòu)鑒定

國槐（Sophora japonica L.）是豆目蝶形花科槐屬植物，別稱槐樹、槐蕊、豆槐、白槐、細(xì)葉槐、金藥材、護房樹及家槐，在中國主產(chǎn)于河北、河南、江蘇、廣東、廣西等地。其干燥花蕾被稱為國槐米，性微寒、味苦，具有涼血、止血，清肝瀉火等功效，用于便血、痔血、血痢、崩漏、吐血、衄血、肝熱目赤、頭痛眩暈[1]。主要含有黃酮類化合物。筆者在對其化學(xué)成分研究的過程中，分離得到了5個酚酸類單體化合物（1～5），利用與文獻類似的方法對結(jié)構(gòu)進行了鑒定[2-3]。其中，2、3、5為從槐屬中首次分離得到的化合物。

1 儀器與材料

安捷倫6520 Q-TOF LC/MS；Bruker 500 MR超導(dǎo)核磁共振波譜儀（德國Bruker公司）。柱層析硅膠（200-300目）、薄層層析硅膠H（青島海洋化工廠），薄層色譜硅膠預(yù)板、高效色譜用硅膠GF254（天津思利達(dá)科技有限公司），ODS（日本FujiSilisiaChemical公司），Sephadex LH-20（瑞典Ge Healthcare Bio-Sciences AB公司），D101大孔吸附樹脂（天津海光化工有限公司），Cosmosil 5 C18-MS-II分析柱及制備柱（日本Nacalai Tesque公司）。旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀（德國IKA公司，IKA RV10、上海亞榮生化儀器廠，RE52CS），高速離心機（美國Beckman Coulter有限公司，ALLEGRA-64R）。

實驗所用試劑（色譜純或分析純）均為天津康科德科技有限公司產(chǎn)品。

所用藥材國槐米于2010年10月購自安國市場，由天津中醫(yī)藥大學(xué)中藥標(biāo)本館李天祥副教授鑒定為國槐（Sophora japonica L.）的干燥花蕾。植物標(biāo)本存放于天津中醫(yī)藥大學(xué)中醫(yī)藥研究中心。

2 提取分離

取干燥的槐米8.0 kg，用5、3、3倍量體積分?jǐn)?shù)70%的乙醇溶液加熱回流提取3次，每次分別為2、2、1.5 h，減壓回收溶劑，得到浸膏2.3 kg。取浸膏670 g，用EtOAc-H2O萃取，得到EtOAc、EtOAc層沉淀及H2O層萃取物分別為78、197、385 g。取上述EtOAc萃取物（50 g）經(jīng)硅膠柱層析[CHCl3-MeOH（100∶0→100∶2→100∶3→100∶5，V/V）→CHCl3-MeOH-H2O（10∶3∶1，V/V/V，下層）→MeOH]，共得7個組分（Fr.1～7）。Fraction 5（7.0 g）經(jīng)ODS柱層析[MeOH-H2O（30∶70→40∶60→50∶50→60∶40→70∶30→80∶20→100∶0，V/V）]，得到12個組分（Fr.5-1～12）。Fraction 5-2（152.1 mg）經(jīng)制備高效液相色譜法（PHPLC）分離制備，得到3，4-二羥基苯甲酸（1，104.1 mg）及4-甲氧基-3，5-羥基苯甲酸（4，5.0 mg）。Fraction 5-6經(jīng)Sephadex LH-20及硅膠柱層析，得到枸櫞苦素（5，7.9 mg）。Fraction 6（7.5 g）經(jīng)ODS柱層析[MeOH-H2O（10∶90→45∶55→50∶50→60∶40→70∶30→80∶20→100∶0，V/V）]得到12個組分（Fr.6-1～12）。Fraction 6-1（139.8 mg）經(jīng)PHPLC [MeOH-H2O（12∶88，V/V）]分離制備，得到?jīng)]食子酸（3，7.3 mg）。Fraction 7（7.0 g）經(jīng)ODS柱層析[MeOHH2O（10∶90→45∶55→50∶50→60∶40→70∶30→80∶20→100∶0，V/V）]共得到12個組分（Fr.7-1～12）。Fraction 7-3（1 318.7 mg）經(jīng)PHPLC制備，得到原兒茶酸甲酯（2，7.3 mg）。

3 結(jié)構(gòu)鑒定

從槐米中分離得到的化合物結(jié)構(gòu)鑒定見圖1。

圖1 從槐米中分離得到的化合物

化合物1：白色粉末。高分辨電噴霧四極桿飛行時間質(zhì)譜（Q-TOF-ESI-MS）給出其準(zhǔn)分子離子峰m/z 153.019 8[M-H]-，確定其分子式為C7H6O4（calcd for C7H5O4，153.019 3）。1H-NMR（CD3OD，500 MHz）δ：7.57（1H，br.s，H-2），6.91（1H，d，J=8.0 Hz，H-5），7.55（1H，br.d，ca.J=8 Hz，H-6）。13C-NMR（CD3OD，125 MHz）δ：123.0（C-1），117.8（C-2），145.9（C-3），151.5（C-4），115.9（C-5），124.2（C-6），170.6（C-7）。上述1H-NMR和13C-NMR譜數(shù)據(jù)與文獻[4]中報道的3，4-二羥基苯甲酸的數(shù)據(jù)基本一致，故鑒定化合物1為3，4-二羥基苯甲酸。通過異核單量子關(guān)系（HSQC）譜的測定，糾正了文獻[4]中該化合物C-2位（δC115.7）及C-5位（δC117.7）的化學(xué)位移值。

化合物2：白色粉末。高分辨Q-TOF-ESI-MS給出其準(zhǔn)分子離子峰m/z 167.035 2[M-H]-，確定其分子式為C8H8O4（calcd for C8H7O4，167.035 0）。1HNMR（CD3OD，500 MHz）δ：7.42（1H，br.s，H-2），6.80（1H，d，J=8.0 Hz，H-5），7.41（1H，br.d，ca.J=8 Hz，H-6），3.83（3H，s，7-OCH3）。13C-NMR（CD3OD，125 MHz）δ：122.6（C-1），117.5（C-2），146.2（C-3），151.8（C-4），115.9（C-5），123.7（C-6），168.9（C-7），52.3（7-OCH3）。上述1H-NMR和13C-NMR譜數(shù)據(jù)與文獻[5]中報道的原兒茶酸甲酯的數(shù)據(jù)基本一致，故鑒定化合物2為原兒茶酸甲酯。通過HSQC譜的測定，糾正了文獻[5]中該化合物C-2位（δC115.9）及C-5位（δC117.5）的化學(xué)位移值。

化合物3：白色粉末。高分辨Q-TOF-ESI-MS給出其準(zhǔn)子分離子峰m/z 169.013 4[M-H]-，確定其分子式為C7H6O5（calcd for C7H5O5，169.014 2）。1HNMR（CD3OD，500 MHz）δ：7.06（2H，s，H-2,6）。13CNMR（CD3OD，125 MHz）δ：122.2（C-1），110.4（C-2,6），146.4（C-3,5），139.6（C-4），170.6（C-7）。上述1H-NMR譜數(shù)據(jù)與文獻[6]中報道的沒食子酸的數(shù)據(jù)基本一致，故鑒定化合物3為沒食子酸。

化合物4：白色粉末。高分辨Q-TOF-ESI-MS給出其準(zhǔn)分子離子峰m/z 183.031 2[M-H]-，確定其分子式為C8H8O5（calcd for C8H7O5，183.029 9）。1HNMR（CD3OD，500 MHz）δ：7.04（2H，s，H-2，6），3.85（3H，s，4-OCH3）。13C-NMR（CD3OD，125 MHz）δ：128.1（C-1），110.4（C-2，6），151.6（C-3，5），140.9（C-4），170.5（C-7），60.8（4-OCH3）。通過與化合物3的13C-NMR譜數(shù)據(jù)相對照，羧基碳的數(shù)據(jù)沒有發(fā)生明顯的變化，提示該羧基沒有甲酯化。同時，結(jié)合甲氧基碳的化學(xué)位移值[δ 60.8，明顯低于甲酯化甲氧基碳的化學(xué)位移值（～53）]，推測甲氧基與4位相連。上述1H-NMR和13C-NMR譜數(shù)據(jù)與文獻[7]中報道的4-甲氧基-3，5-羥基苯甲酸的數(shù)據(jù)基本一致，故鑒定化合物4為4-甲氧基-3，5-羥基苯甲酸。

化合物5：白色粉末。高分辨Q-TOF-ESI-MS給出其準(zhǔn)分子離子峰m/z 361.107 6[M+Cl]-，確定其分子式為C16H22O7（calcd for C16H22O7Cl，361.106 0）。1H-NMR（CD3OD，500 MHz）δ：6.82（1H，br.s，H-2），7.08（1H，d，J=8.0 Hz，H-5），6.72（1H，br.d，ca.J=8 Hz，H-6），3.32（2H，m，H2-7），5.95（1H，m，H-8），[5.02（1H，br.d，ca.J=11 Hz）、5.05（1H，br.d，ca.J=17 Hz），H2-9]，4.84（1H，d，J=7.5 Hz，H-1'），3.48（1H，dd，J=7.5、9.0 Hz，H-2'），3.47（1H，dd，J=9.0、9.0 Hz，H-3'），3.39（1H，dd，J=9.0、9.0 Hz，H-4'），3.38（1H，m，H-5'），[3.68（1H，dd，J=4.0、12.0 Hz），3.86（1H，br. d，ca.J=12 Hz），H2-6']。13C-NMR（CD3OD，125 MHz）δ：136.5（C-1），114.2（C-2），150.8（C-3），146.4（C-4），118.3（C-5），122.1（C-6），40.8（C-7），139.0（C-8），115.9（C-9），103.1（C-1'），75.0（C-2'），77.9（C-3'），71.4（C-4'），78.2（C-5'），62.6（C-6'）。上述1HNMR和13C-NMR譜數(shù)據(jù)與文獻[8]中報道的枸櫞苦素的數(shù)據(jù)基本一致，故鑒定化合物5為枸櫞苦素。

參考文獻：

[1]國家藥典委員會．中華人民共和國藥典(一部)[S].北京:化學(xué)工業(yè)出版社,2010：83.

[2]吳帥,劉二偉,張祎,等.川續(xù)斷中化學(xué)成分的研究[J].天津中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報,2010,29(3):147-150.

[3]吳克磊,康利平,熊呈琦,等.蒺藜全草中甾體皂苷類化學(xué)成分研究[J].天津中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報,2012,31(4):225-228.

[4]劉軒,張彬鋒,侴桂新,等.白茅根的化學(xué)成分研究[J].中國中藥雜志,2012,37(15):2296-2230.

[5]李奕星,左文健,王輝,等.異葉三寶木枝條的化學(xué)成分研究[J].中國藥物化學(xué)雜志,2012,22(2):120-123.

[6]梁耀光,徐巧林,謝海輝,等.芒果核仁的化學(xué)成分及其抑菌活性[J].熱帶亞熱帶植物學(xué)報,2010,18(4):445-448.

[7]章為,徐康平,周應(yīng)軍,等.兩色紫金?；瘜W(xué)成分研究[J].中南藥學(xué),2007,5(5):444-448.

[8]尹永芹,沈志濱,孔令義.番薯塊根化學(xué)成分研究[J].中藥材,2012,35(6):913-917.

Study on phenolic acids from Flos Sophorae

LIU Li-li,LI Xiao-xia,CHEN Yue,SUN Jin,LIU Er-wei,ZHANG Yi
（Key Laboratory of Traditional Chinese Medicinal Chemistry and Analytical Chemistry of Tianjin, Tianjin 300193,China）

[Objective]To investigate the phenoic acids of Flos Sophorae for further research and development. [Methods]The chemical components were obtained by using chromatographies such as silica gel,ODS,Sephadex LH-20 and HPLC,and identified by the chemical and physical methods,especially spectral analysis.[Results]Five phenoic acids were obtained and identified as 3,4-dihydroxybenzoic acid(1),protocatechuic acid methyl ester(2), gallic acid(3),4-methoxy-3,5-dihydroxybenzoic acid(4),and citrusin C(5),respectively.[Conclusion]Compounds 2,3,and 5 are obtained from sophora genus firstly.

Flos Sophorae;phenolic acid;structural elucidation

R284.2

A

1673-9043（2014）01-0039-03

10.11656/j.issn.1673-9043.2014.01.13

2013-09-06）

國家自然基金項目（81202995）；國家科技重大專項項目-重大新藥創(chuàng)制（2011ZX09307-002-01）；新世紀(jì)優(yōu)秀人才支持計劃資助項目（NCET-12-1069）。

劉麗麗（1986-），女，碩士研究生，主要從事中藥化學(xué)研究。

張祎，E-mail zhwwxzh@hotmail.com。