王曙東劉文雅王爭葉永富

（1.南京軍區(qū)南京總醫(yī)院，江蘇 南京 210002；2.解放軍73096部隊(duì)醫(yī)院，江蘇 南京 210049）

紅茴香揮發(fā)油和水提物鎮(zhèn)痛抗炎作用比較的實(shí)驗(yàn)研究

王曙東1劉文雅1王爭1葉永富2

（1.南京軍區(qū)南京總醫(yī)院，江蘇 南京 210002；2.解放軍73096部隊(duì)醫(yī)院，江蘇 南京 210049）

目的：研究比較紅茴香揮發(fā)油和水提物的鎮(zhèn)痛抗炎作用，優(yōu)化紅茴香提取工藝。方法：通過小鼠尾壓痛試驗(yàn)，觀察紅茴香揮發(fā)油和水提物的鎮(zhèn)痛作用；采用二甲苯致小鼠耳廓腫脹和角叉菜膠致大鼠足跖腫脹模型，比較紅茴香揮發(fā)油和水提物的抗炎作用。結(jié)果：紅茴香水提物能提高小鼠尾壓痛閾值，揮發(fā)油未見顯著提高作用；揮發(fā)油和水提物均能顯著減輕二甲苯所致小鼠耳廓腫脹，且揮發(fā)油對角叉菜膠所致大鼠足跖腫脹有顯著的抑制作用。結(jié)論：紅茴香水提部位的鎮(zhèn)痛作用優(yōu)于揮發(fā)油部位，但揮發(fā)油對于炎癥的抑制作用強(qiáng)于水提部位，紅茴香揮發(fā)油和水提部位均為鎮(zhèn)痛抗炎的有效部位。

紅茴香 揮發(fā)油 水提物 藥理學(xué)

紅茴香系木蘭科八角屬植物莽草（Illicium lanceolatum A.C Sm ith）干燥的根或莖的皮，具有止痛、消腫、抗炎等功效，常用于跌打損傷、風(fēng)濕類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎的治療[1-4]。常用劑型目前除民間偶有粉劑、酒劑口服或外用外，現(xiàn)有泰康藥業(yè)獨(dú)家生產(chǎn)紅茴香注射液，為紅茴香根、皮經(jīng)水提醇沉制成的水溶液，提取過程損失了揮發(fā)油部分，而揮發(fā)油部位也可能為藥用有效部位。我們對紅茴香揮發(fā)油部位和水提部位的鎮(zhèn)痛抗炎作用進(jìn)行了比較研究，以期為改進(jìn)紅茴香注射液的制備工藝提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 實(shí)驗(yàn)材料

1.1 藥物與試劑紅茴香揮發(fā)油（南京軍區(qū)南京總醫(yī)院制劑科自制，0.1g/mL，批號：20120816），紅茴香水提物（南京軍區(qū)南京總醫(yī)院制劑科自制，0.1g/mL，批號：20120817），扶他林軟膏（主要成分雙氯酚酸二乙胺，10mg/g，北京諾華制藥有限公司，批號：X2758），云南白藥氣霧劑（85g/瓶，云南白藥集團(tuán)有限公司，批號：2012006），角叉菜膠（Sigma公司，批號：9000-07-1），二甲苯（分析純，上海凌峰化學(xué)試劑有限公司，批號：050403）。

1.2 動(dòng)物SPF級大鼠（180～220g），SPF級小鼠（18～22g），由南京江寧青龍山動(dòng)物養(yǎng)殖場提供，動(dòng)物合格證號：SCXK（浙）20080033。1.3儀器YLS-7B大鼠足跖容積測量儀（濟(jì)南益延科技發(fā)展有限公司），YSD-4G型藥理生理多用儀（安徽蚌埠醫(yī)學(xué)院無線電二廠），ZH-YLS-3E型電子鼠尾壓痛儀（淮北正華生物儀器設(shè)備有限公司），YLS-Q4型鼠耳打孔器（濟(jì)南益延科技發(fā)展有限公司），F(xiàn)A1104N型電子天平（上海精密科學(xué)儀器有限公司）。

2 實(shí)驗(yàn)方法

2.1 紅茴香揮發(fā)油和水提物的制備紅茴香揮發(fā)油提?。喝〖t茴香根皮粉碎成粗粉，加水適量浸泡12h，以磨口水蒸氣蒸餾提取裝置，用水蒸氣蒸餾法提取，至揮發(fā)油不再增多為止，收集揮發(fā)油；提取的油水混合物用乙醚萃取，經(jīng)無水硫酸鈉干燥，離心后取上清液，得紅茴香揮發(fā)油。紅茴香水提物提?。喝]發(fā)油提取后的殘留蒸餾液，過濾，濃縮，即得。

2.2 紅茴香揮發(fā)油和水提物的鎮(zhèn)痛作用實(shí)驗(yàn)觀察藥物對小鼠尾壓痛痛閾值的影響[5-6]。將小鼠置于固定器內(nèi)，尾部和四肢暴露在固定器外，待動(dòng)物安靜后進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。測痛前在小鼠尾部距尾尖1/3處作為施壓點(diǎn)標(biāo)記，施壓時(shí)以小鼠出現(xiàn)掙扎或嘶叫作為疼痛反應(yīng)指標(biāo)，此壓力值即為該鼠痛閾值，連測2次，取平均值作為對照值。共挑選50只小鼠，隨機(jī)分成5組（10只/組），雌雄各半，即空白組、云南白藥組（5mL/kg）、扶他林組（50mg/kg）、紅茴香揮發(fā)油組（500mg/kg）、紅茴香水提物組（500mg/kg）。給藥時(shí)用微量注射器將藥物涂抹于小鼠尾部受壓點(diǎn)，5mL/kg，測定給藥后15min、30min小鼠痛閾值，計(jì)算Δ痛閾（Δ痛閾=藥后痛閾值-藥前痛閾值）。

2.3 紅茴香揮發(fā)油和水提物的抗炎作用實(shí)驗(yàn)

2.3.1 對二甲苯所致小鼠耳廓腫脹的影響取雄性KM小鼠，隨機(jī)分為5組（10只/組），即空白組、云南白藥組（5mL/kg）、扶他林組（50mg/kg）、紅茴香揮發(fā)油組（500mg/kg）、紅茴香水提物組（500mg/kg）。給藥時(shí)用微量注射器將藥物涂抹于小鼠左右耳廓，5mL/kg。耳廓給藥30min后，利用微量注射器將0.05mL二甲苯分別滴于右耳兩側(cè)，保證所滴位置一致，左耳作對照。3h后將小鼠脫頸椎處死，沿耳廓基線剪下兩耳，用直徑9mm的打孔器分別在左、右耳同一部位打下圓形耳片，稱重，求左右耳片重量之差作為腫脹度（mg），與空白組比較組間差異。[7]

2.3.2 對角叉菜膠所致大鼠足跖腫脹的影響取SPF級雄性大鼠，隨機(jī)分為5組（10只/組），即空白組、云南白藥組（1mL/kg）、扶他林組（10mg/kg）、紅茴香揮發(fā)油組（100mg/kg）、紅茴香水提物組（100mg/kg）。于右后足踝關(guān)節(jié)處標(biāo)記，利用足跖容積測量儀先測大鼠正常右后足跖體積。利用微量注射器將藥物涂抹于右后足跖部，1mL/kg。足趾給藥30min后，每只鼠右后足跖皮下注射1%角叉菜膠0.1mL，并于給角叉菜膠后30、60、120、240、360min再測大鼠右后足跖體積（mL），并計(jì)算腫脹度（mL）。足跖腫脹度=給角叉菜膠后不同時(shí)間足跖體積-給角叉菜膠前同側(cè)足跖體積。[8-9]

3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果

3.1 紅茴香揮發(fā)油和水提物對小鼠尾壓痛痛閾值的影響見表1。結(jié)果表明：紅茴香水提物在給藥后15min能顯著提高小鼠尾壓痛閾值（P＜0.05），紅茴香揮發(fā)油未見顯著增加小鼠尾壓痛閾值的作用。

表1 紅茴香揮發(fā)油和水提物對小鼠壓痛痛閾值的影響（±s）kg

表1 紅茴香揮發(fā)油和水提物對小鼠壓痛痛閾值的影響（±s）kg

注：與同時(shí)期空白組比較，*P＜0.05。

組別空白組動(dòng)物數(shù)（只）10給藥前痛閾值0.60±0.33給藥后15min痛閾值Δ痛閾痛閾值0.70±0.31 0.10±0.29 0.59±0.25給藥后30min Δ痛閾-0.02±0.41云南白藥組10 0.67±0.15扶他林組10 0.52±0.27 0.77±0.35 0.25±0.42 0.95±0.35 0.42±0.36*紅茴香揮發(fā)油組10 0.59±0.27 0.86±0.27 0.28±0.46 0.94±0.37 0.35±0.48紅茴香水提物組10 0.59±0.30 1.05±0.35 0.46±0.42*0.95±0.42 0.36±0.47 0.81±0.19 0.13±0.22 0.95±0.30 0.27±0.25

3.2 紅茴香揮發(fā)油和水提物的抗炎作用

3.2.1 對二甲苯所致小鼠耳廓腫脹的影響見表2。結(jié)果表明：與空白組比較，紅茴香水提物和紅茴香揮發(fā)油均能顯著減輕二甲苯所致小鼠耳腫脹程度（P＜0.05）。

表2 紅茴香揮發(fā)油和水提物對小鼠耳腫脹的影響（±s）

表2 紅茴香揮發(fā)油和水提物對小鼠耳腫脹的影響（±s）

注：與空白組比較，*P＜0.05，**P＜0.01。

組別動(dòng)物數(shù)（只）劑量空白組腫脹度（mg）10 5mL/kg 10.07±3.86 10 5mL/kg扶他林組10 50mg/kg 4.71±3.01**紅茴香揮發(fā)油組10 500mg/kg 5.29±3.57*紅茴香水提物組10 500mg/kg 5.47±4.84*云南白藥組5.44±4.89*

3.2.2 對角叉菜膠所致大鼠足跖腫脹的影響見表3。結(jié)果表明：與空白組比較，紅茴香揮發(fā)油于給藥后30min能顯著減輕大鼠足跖腫脹程度（P＜0.05），紅茴香水提物組大鼠足跖腫脹程度未見明顯減輕。

表3 紅茴香揮發(fā)油和水提物對大鼠角叉菜膠足跖腫脹度（mL）的影響（±s）

表3 紅茴香揮發(fā)油和水提物對大鼠角叉菜膠足跖腫脹度（mL）的影響（±s）

注：與空白組比較，*P＜0.05。

組別動(dòng)物數(shù)（只）劑量空白組30min 10 1mL/kg 60min 2.20±0.54 120min 240min 2.30±0.80 360min 1.89±0.59 1.85±0.421.74±0.67 10 1mL/kg扶他林組10 10mg/kg 1.72±0.43*1.67±0.49*1.78±0.39 1.50±0.30*1.58±0.26紅茴香揮發(fā)油組10 100mg/kg 1.66±0.33*1.79±0.45 1.79±0.37 1.76±0.61 1.95±0.77紅茴香水提物組10 100mg/kg 1.81±0.60 1.99±0.72 1.83±0.57 1.89±0.56 2.03±0.80云南白藥組1.92±1.00 2.17±1.54 1.96±1.18 2.08±1.07 2.25±1.31

4 討論

紅茴香可改善局部組織微循環(huán)，加速滲出液的吸收，故而能起到消腫、止痛、散瘀作用；還具有使損傷的局部炎癥消退、組織粘連減輕作用，利于組織損傷的修復(fù)，預(yù)防瘢痕形成。臨床研究也表明，紅茴香具有很好的鎮(zhèn)痛抗炎作用，但未開展其相關(guān)有效成分的研究。紅茴香根皮或莖皮中主含黃酮類、揮發(fā)油等成分，我們對其揮發(fā)油成分進(jìn)行分析發(fā)現(xiàn)，其中有多個(gè)化學(xué)成分具鎮(zhèn)痛抗炎作用，故對紅茴香揮發(fā)油及水提物進(jìn)行藥效試驗(yàn)比較是十分必要的，其具體的作用機(jī)理有待進(jìn)一步研究。

紅茴香揮發(fā)油和水提物的鎮(zhèn)痛抗炎作用比較研究表明：揮發(fā)油和水提物均能顯著減輕二甲苯所致小鼠耳腫脹程度，紅茴香揮發(fā)油給藥后30min能顯著減輕大鼠足跖腫脹程度，而水提物組未見大鼠足跖腫脹程度的明顯減輕，但水提物在給藥后15min能顯著提高小鼠尾壓痛閾值。以上提示紅茴香揮發(fā)油部位對于炎癥的抑制作用強(qiáng)于水提部位，但水提部位的鎮(zhèn)痛作用優(yōu)于揮發(fā)油部位。說明紅茴香揮發(fā)油部位也是鎮(zhèn)痛抗炎的有效部位，應(yīng)予保留。因此，紅茴香注射液的制備工藝有待進(jìn)一步改進(jìn)，以提高藥材的藥用價(jià)值。

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R282.710.5

A

1672-397X（2014）07-0077-02

王曙東（1965-），男，博士，主任藥師，主要從事中藥制劑研究。

葉永富，236991683@qq.com

2014-04-08

編輯：吳寧

南京軍區(qū)醫(yī)學(xué)科技創(chuàng)新基金（10MA102）；南京軍區(qū)醫(yī)學(xué)科技創(chuàng)新重大項(xiàng)目（ZX26）