秦紅霖 李永申

·實(shí)驗(yàn)研究·

特征圖譜技術(shù)在中藥質(zhì)量分析中的應(yīng)用

秦紅霖 李永申

綜述特征圖譜技術(shù)在中藥材和中藥制劑質(zhì)量控制方面的應(yīng)用, 目前, 以色譜法建立的特征圖譜是中藥化學(xué)特征圖譜的常用方法, 目的是為進(jìn)一步研制全面、綜合、準(zhǔn)確、有效的質(zhì)量控制方法提供參考。

特征圖譜技術(shù)；中藥；質(zhì)量控制

中藥特征圖譜是一種多指標(biāo)的質(zhì)量控制模式, 它可以比較全面的反映所含化學(xué)成分的種類和數(shù)量, 從而能夠全面、綜合地反映和控制中藥的質(zhì)量。

目前中藥特征圖譜的測(cè)定方法種類較多,主要采用色譜法和光譜法為主,色譜法主要包括薄層色譜法［1］、氣相色譜法［2］、高效液相色譜法［3］、毛細(xì)管電泳法［4］、蛋白質(zhì)電泳法［5］等。光譜法主要包括紫外光譜法［6］、紅外光譜法［7］、熒光光譜法［8］等。其他還有核磁共振法［9］、X射線衍射法［10］等。其中, 高效液相色譜法以強(qiáng)大的分離功能、快捷的分析速度、廣泛的樣品適用性和多種類的檢測(cè)器配置多而成為目前研究中藥化學(xué)特征圖譜常用的方法。

1 薄層色譜法

薄層色譜(TLC)法是一種經(jīng)典的平面色譜法。由于該方法在中藥材及中藥制劑的品種鑒定、含量測(cè)定等方面能提供直觀形象的可見光或熒光圖譜, 并能進(jìn)一步配合色譜掃描或數(shù)碼處理得到不同層次輪廓圖譜和相應(yīng)的積分?jǐn)?shù)據(jù)等特點(diǎn),成為了中藥成分分析的一個(gè)主要方法。蔣軼倫等［11］利用薄層色譜技術(shù)對(duì)中藥材丹參的有效成分進(jìn)行了特征圖譜分析,以不同等級(jí)的中江丹參和不同采收期的丹參、南丹參為分析對(duì)象, 在254 nm波長(zhǎng)下獲取脂溶性和水溶性成分共7個(gè)共有特征峰, 并進(jìn)行了主成分分析和聚類分析, 表明丹參藥材主要指標(biāo)成分含量分布情況十分相似, 可用于考察不同等級(jí)丹參的歸屬。楊先國(guó)等［12］對(duì)玉竹的黃酮類成分進(jìn)行薄層色譜特征圖譜研究, 建立了由10個(gè)特征熒光斑點(diǎn)構(gòu)成的玉竹黃酮類成分的薄層特征圖譜, 該特征圖譜不僅能反映玉竹的特征性成分, 同時(shí)還能反映不同來(lái)源藥材之間的差異, 可以用于玉竹藥材的質(zhì)量控制。

2 氣相色譜法

氣相色譜法是一種以氣體為流動(dòng)相的分離技術(shù)。主要用于中藥中揮發(fā)油成分、極性較小的成分的特征圖譜研究,具有樣品用量少、分析速度快、靈敏度高等特點(diǎn)。劉東輝等［13］采用氣相色譜法測(cè)定10批薄荷飲片揮發(fā)油成分, 標(biāo)示出13個(gè)共有峰, 相似度分析表明, 不同批次樣品的相似度較高, 對(duì)于薄荷飲片的質(zhì)量控制、臨床應(yīng)用均有較大的指導(dǎo)意義。閻正等［14］建立了東樂(lè)膏GC特征圖譜, 東樂(lè)膏是由大黃、乳香、沒藥、冰片等中藥材加工提取制成的橡膠膏劑, 作者測(cè)定了11批樣品, 共標(biāo)示出8個(gè)共有峰, 可作為東樂(lè)膏生產(chǎn)的輔助質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)。劉紅等［15］采用氣相色譜法測(cè)定來(lái)自10個(gè)不同產(chǎn)地的益智揮發(fā)油成分, 并進(jìn)行聚類分析和相似度分析, 結(jié)果表明該方法可用于益智藥材的質(zhì)量評(píng)價(jià)。黃天來(lái)等［16］研究了生姜所含揮發(fā)油成分的氣相特征圖譜,結(jié)果顯示生姜揮發(fā)油GC特征圖譜由五組峰組成,分離度較好,為生姜的質(zhì)量控制提供了依據(jù)。馬麗端等［17］建立了感冒清熱顆粒揮發(fā)油成分的氣相特征圖譜, 作者共標(biāo)定了6個(gè)特征峰, 并對(duì)復(fù)方制劑中的薄荷酮和胡薄荷酮進(jìn)行了含量測(cè)定,作者建立的氣相色譜特征圖譜及含量測(cè)定方法可從定性和定量?jī)煞矫婵刂聘忻扒鍩犷w粒中的揮發(fā)性成分, 方法準(zhǔn)確、可行、可作為該制劑的質(zhì)量控制方法。聶小妮等［2］建立了不同產(chǎn)地土荊芥揮發(fā)油氣相色譜特征圖譜, 分別按相關(guān)系數(shù)和夾角余弦法對(duì)12個(gè)產(chǎn)地土荊芥揮發(fā)油的特征圖譜進(jìn)行了相似度計(jì)算, 結(jié)果表明12個(gè)產(chǎn)地的土荊芥揮發(fā)油特征圖譜與共有模式特征圖譜具有非常好的相似度。

3 高效液相色譜法

高效液相色譜法是依據(jù)樣品各成分在流動(dòng)相和固定相之間分配系數(shù)的不同而進(jìn)行分離的。HPLC法不受樣品揮發(fā)性和熱穩(wěn)定性的限制, 整個(gè)分離過(guò)程在相對(duì)封閉的環(huán)境中, 受外界影響較小, 系統(tǒng)穩(wěn)定性好, 是目前研究中藥化學(xué)特征圖譜常用的方法。朱砂等［18］采用HPLC法建立了巫山淫羊藿飲片的特征圖譜, 確定了5個(gè)共有峰, 采用國(guó)家藥典委員會(huì)開發(fā)的《中藥色譜特征圖譜相似度評(píng)價(jià)系統(tǒng)研究版(2004A)》進(jìn)行相似度評(píng)價(jià), 結(jié)果顯示巫山淫羊藿飲片生品和羊油炙品的平均相似度為0.91；巫山淫羊藿飲片與淫羊藿飲片的平均相似度為0.84, 二者特征圖譜差異明顯, 可作為飲片識(shí)別和鑒別的參考方法。黃月純等［19］采用HPLC法對(duì)澤蘭及其精制提取物的特征圖譜進(jìn)行了相關(guān)性研究, 標(biāo)出了20個(gè)共有峰, 相似度分析表明10批澤蘭飲片的相似度為0.961~0.998；10批澤蘭提取物的相似度為0.963~0.998；同批次飲片與提取物之間的相似度為0.9883~0.998。徐曉衛(wèi)等［20］采用HPLC法建立了艾迪注射液高效液相色譜特征圖譜, 確定了6個(gè)共有峰, 各共有峰的相對(duì)保留時(shí)間和峰面積均穩(wěn)定, 10批樣品的相似度均在0.90~1.00之間, 表明不同批號(hào)樣品間具有很高的相似度, 為艾迪注射液的質(zhì)量控制提供了有效依據(jù)。

隨著HPLC設(shè)備的普及以及儀器操作的可控性, HPLC與MS、NMR等技術(shù)聯(lián)用, 成為中藥特征圖譜的重要選擇。劉云飛等［21］采用HPLC-ESI-MS技術(shù)歸屬續(xù)斷特征圖譜中的化學(xué)成分, 通過(guò)正離子模式和負(fù)離子模式獲得精確分子量,推測(cè)出15個(gè)成分, 用對(duì)照品確認(rèn)了8個(gè)成分, 該研究比較全面的闡明了續(xù)斷的化學(xué)組成, 使特征圖譜的特征性更強(qiáng), 為續(xù)斷的鑒別與質(zhì)量評(píng)定奠定了基礎(chǔ)。羅丹等［22］采用HPLCESI-MS法建立當(dāng)歸的特征圖譜并對(duì)其中的8種成分進(jìn)行了定性研究, 為當(dāng)歸化學(xué)成分的進(jìn)一步研究及質(zhì)量控制提供參考。HPLC- MS聯(lián)用技術(shù)可以將液相色譜強(qiáng)大的分離功能和質(zhì)譜的定性優(yōu)勢(shì)相結(jié)合, 獲取更多的化合物結(jié)構(gòu)信息。

4 毛細(xì)管電泳法

毛細(xì)管電泳法適合水溶性或醇溶性成分的分離分析,其具有柱效高、耗能低、對(duì)環(huán)境污染小、樣品前處理簡(jiǎn)單等優(yōu)點(diǎn), 是進(jìn)行中藥質(zhì)量控制的綠色分析方法。鄧光輝［23］等建立了葉下珠藥材中黃酮的毛細(xì)管電泳特征圖譜, 確定了10個(gè)不同產(chǎn)地葉下珠藥材中黃酮的毛細(xì)管電泳特征圖譜為8個(gè), 實(shí)驗(yàn)證明, 各產(chǎn)地葉下珠的毛細(xì)管電泳特征圖譜與標(biāo)準(zhǔn)毛細(xì)管電泳特征圖譜的相似度較好。孫國(guó)祥等［24］建立了連翹藥材的毛細(xì)管電泳的特征圖譜, 將不同產(chǎn)地10批連翹藥材進(jìn)行比較, 按各電泳峰共有率fi≥70%作為選擇電泳指紋峰的依據(jù), 確定了29個(gè)特征峰, 可作為連翹內(nèi)在質(zhì)量評(píng)價(jià)的依據(jù)。

5 蛋白質(zhì)電泳法

高德民等［5］利用蛋白質(zhì)電泳技術(shù)對(duì)藥食兩用植物的5個(gè)生姜品種進(jìn)行了特征圖譜分析, 特征圖譜顯示, 5個(gè)樣品的蛋白質(zhì)PAGE特征圖譜具有一定差異, PAGE特征圖譜可用于生姜品種鑒定與質(zhì)量評(píng)價(jià)。

6 小結(jié)

中藥為多成分的復(fù)雜體系, 測(cè)定一種或幾種指標(biāo)成分,不足以保證其質(zhì)量。中藥特征圖譜具有整體性、特征性及可量化等特點(diǎn), 可用于鑒別中藥真?zhèn)?、評(píng)價(jià)藥材的道地性以及制劑的一致性與穩(wěn)定性, 是一種有效的質(zhì)量控制模式［25］。其中GC和HPLC是目前中藥特征圖譜研究時(shí)的重要選擇。今后中藥特征圖譜的研究應(yīng)與藥效相關(guān)性研究相結(jié)合, 進(jìn)一步闡明指標(biāo)成分的作用機(jī)理, 達(dá)到中藥質(zhì)量控制保證和臨床藥學(xué)的有效對(duì)接, 從而真正達(dá)到應(yīng)用特征圖譜技術(shù)全面控制中藥材及其制劑的質(zhì)量。

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