閔會 吳健 胡江寧 葉劍鋒

摘要 [目的]建立指紋圖譜方法，區(qū)分與鑒別浙貝母、平貝母、川貝母藥材。[方法]采用高效液相色譜法，蒸發(fā)光散射檢測器。[結果]測定方法穩(wěn)定可靠，3種貝母測定精密度、重復性RSD均小于5%，同時色譜峰均具有各自的特征性。[結論]該方法穩(wěn)定可靠，可作為浙貝母、平貝母、川貝母區(qū)分與判定的有效途徑。

關鍵詞 浙貝母;平貝母;川貝母;HPLCELSD;指紋圖譜

中圖分類號 S188 ?文獻標識碼 A ?文章編號 0517-6611（2014）34-12051-02

The Identification of Different Fritillaria Species by Fingerprints

MIN Hui2， WU Jian2， HU Jiangning2， YE JianFeng1

（

1. Zhejiang Conba Drug Discovery & Development Co. Ltd.， Hangzhou， Zhejiang 310052;2. Zhejiang Conba Pharmaceutical Co. Ltd.， Hangzhou， Zhejiang 310052）

Abstract [Objective] To establish a fingerprint determination method to distinguish and identify Fritillariae thunbergii bulbus， Fritillariae cirrhosae bulbus， Fritillariae ussuriensis bulbus.[Method] HPLC and ELSD were adopted. [Result] The method is reliable， the reproducibility and precision of Fritillariae thunbergii bulbus， Fritillariae cirrhosae bulbus， Fritillariae ussuriensis bulbus are all less than 5%， and the chromatographic peaks are characterized. [Conclusion] This method is stable and reliable， it can be a good method to distinguish and identify Fritillariae thunbergii Bulbus， Fritillariae cirrhosae bulbus， Fritillariae ussuriensis bulbus.

Key words Fritillariae thunbergii bulbus; Fritillariae cirrhosae bulbus; Fritillariae ussuriensis bulbus; HPLCELSD; Fingerprint

基金項目 國家科技支撐計劃項目（2011BAI04B06）;浙江省重點實驗室和中試基地計劃項目（2009E10009）;浙江省企業(yè)研究院項目（2010E90011）。

浙貝母（Fritillariae thunbergi ibulbus.）為百合科貝母屬浙貝母的干燥鱗莖，為傳統(tǒng)常用中藥之一，被列為著名的“浙八味”之一，其味苦、性寒，有清熱潤肺、化痰止咳、散結消腫等功效。川貝母（Fritillariae cirrhosae bulbus.）為百合科植物川貝母的干燥鱗莖，是潤肺止咳的名貴中藥材，具有良好的止咳化痰功效，且能養(yǎng)肺陰、宣肺、潤肺而清肺熱，是一味治療久咳痰喘的良藥。平貝母（Fritillariae ussuriensis bulbus.）為百合科植物平貝母的干燥鱗莖，有清熱潤肺、止咳化痰的作用，為一種常用中藥，與川貝母、漸貝母同屬貝母屬，但在藥用上有一定差別，3種貝母藥材均具有止咳化痰功效，其有效成分均為生物堿類物質。但由于其內在生物堿類成分種類不同，藥用上存在一定差別。目前市場上的貝母品種較多，且價格差別大，以川貝母價格最高，存在互相代替或者以偽替真的現象。由于眾多原因，從性狀、顯微、理化上不易將它們區(qū)別開，同時采用傳統(tǒng)的薄層鑒別法人為影響因素大，重現性不好，無法將三者共性與特性進行良好的展現與區(qū)分，故急需建立一種良好的方法將三者進行有效的指認與區(qū)分。

高效液相色譜法具有高效、快速、穩(wěn)定的特點，重現性好，靈敏度高。同時中藥材指紋圖譜的建立是藥材鑒別的新標準，能夠全面反映中藥材化學成分的種類與數量，從整體上反映中藥材的特性。采用高效液相色譜法建立中藥材指紋圖譜用以鑒定中藥材特性，穩(wěn)定、可靠、重現性高，目前已得到國際公認，亦是未來發(fā)展趨勢。

1 材料與方法

1.1 試驗材料

浙貝母樣品來自浙江寧波、磐安、舟山產地，川貝母樣品分別購自華東中藥飲片有限公司及康恩貝集團醫(yī)療保健品有限公司，平貝母樣品購自吉林省藥房。貝母素甲標準品（11750201311）、貝母素乙標準品（110751201110）均購自中國食品藥品檢定研究院，含量分別以97.3%、99.9%計。

表1 不同貝母樣品信息

樣品名稱批號樣品名稱批號

平貝母1103001川貝母120118

平貝母20100412浙貝母120538

平貝母070118浙貝母120552

平貝母110710868浙貝母120572

川貝母120308浙貝母1205114

川貝母110501浙貝母1205136

川貝母120401

1.2 儀器

BS210S電子天平（德國賽多利斯）、HH.S電熱恒溫水浴鍋（上海精宏實驗設備有限公司）、Agilent1200液相色譜儀（ELSD）（美國Aglient公司）。

1.3 方法

1.3.1 標準品溶液的制備。取貝母素甲標準品、貝母素乙標準品適量，精密稱定，加甲醇溶解，即得。

1.3.2 供試品溶液的制備。

取本品粉末（過四號篩）約2.0 g，精密稱定，置具塞燒瓶中，加濃氨試液4 ml浸潤1 h，精密加入氯仿∶甲醇（4∶1）的混合溶液40 ml，稱定重量，混勻，置于80 ℃水浴中加熱回流2 h，放冷，精密加入6 ml無水乙醇，用力搖勻，濾過，精密量取續(xù)濾液20 ml，水浴蒸干，殘渣加5 ml甲醇溶解，濾過，取續(xù)濾液，即得。

1.3.3 測定方法。

色譜條件：色譜柱：以十八烷基鍵合硅膠為固定相;流動相：甲醇（含0.05%三乙胺）[1]，水梯度洗脫：0～10 min甲醇（含0.05%三乙胺）由60到70;10～35 min甲醇（含0.05%三乙胺）由70到90，35～50 min甲醇（含0.05%三乙胺）由90到100，50～60 min甲醇（含0.05%三乙胺）保持100;流速1.0 ml/min;記錄60 min色譜圖;進樣量：供試品及對照品溶液各20 μl;ELSD條件：漂移管溫度70 ℃;氮氣流速1.6 L/min。

2 結果與分析

2.1 方法學驗證

2.1.1 浙貝母。

2.1.1.1 精密度試驗。

取“1.3.2”方法制備供試品溶液，參照“1.3.3”測定方法連續(xù)進樣6次，記錄色譜圖，以貝母素乙的色譜峰為參照峰，各色譜峰相對保留時間和相對峰面積的RSD分別在0～0.16%、0～4.02%，精密度良好。

2.1.1.2 重復性試驗。

參照“1.3.2”方法制備供試品溶液6份，參照“1.3.3”測定方法測定，記錄色譜圖，以貝母素乙的色譜峰為參照峰，各色譜峰相對保留時間和相對峰面積的RSD分別在0～0.32%、0～4.46%，重復性良好。

2.1.1.3 穩(wěn)定性試驗。

取“1.3.2”方法制備供試品溶液，參照“1.3.3”測定方法記錄0、4、8、12、24 h的色譜圖。各色譜峰相對保留時間、相對峰面積的RSD分別在0～0.33%、0～3.82%，供試品溶液在24 h內穩(wěn)定。

2.1.2 平貝母。

2.1.2.1 精密度試驗。

取“1.3.2”方法制備供試品溶液，參照“1.3.3”測定法連續(xù)進樣6次，記錄色譜圖，以貝母素乙的色譜峰為參照峰，各色譜峰相對保留時間、相對峰面積的RSD分別在0～0.30%、0～1.97%，精密度良好。

2.1.2.2 重復性試驗。

參照“1.3.2”方法制備供試品溶液6份，參照“1.3.3”測定方法測定，記錄色譜圖，以貝母素乙的色譜峰為參照峰，各色譜峰相對保留時間和相對峰面積的RSD分別在0～0.26%、0～3.15%，重復性良好。

2.1.2.3 穩(wěn)定性試驗。

取“1.3.2”方法制備供試品溶液，參照“1.3.3”測定法記錄0、4、8、12、24 h的色譜圖。各色譜峰相對保留時間、相對峰面積的RSD分別在0～0.22%、0～3.20%，供試品溶液在24 h內穩(wěn)定。

2.1.3 川貝母。

2.1.3.1 精密度試驗。

取“1.3.2”方法制備供試品溶液，參照“1.3.3”測定法連續(xù)進樣6次，記錄色譜圖，以貝母素乙的色譜峰為參照峰，各色譜峰相對保留時間、相對峰面積的RSD分別在0～0.47%、0～3.80%，精密度良好。

2.1.3.2 重復性試驗。

參照“1.3.2”方法制備供試品溶液6份，參照“1.3.3”測定法測定，記錄色譜圖，以貝母素乙的色譜峰為參照峰，各色譜峰相對保留時間和相對峰面積的RSD分別在0～0.47%、0～4.82%，重復性良好。

2.1.3.3 穩(wěn)定性試驗。

取“1.3.2”方法制備供試品溶液，參照“1.3.3”測定法記錄0、4、8、12、24 h的色譜圖。各色譜峰相對保留時間、相對峰面積的RSD分別在0～0.30%、0～4.80%，供試品溶液在24 h內穩(wěn)定。

2.2 不同貝母指紋圖譜 由圖1可知，不同貝母指紋圖譜特征存在明顯差異。浙貝母色譜峰個數最多，且峰響應也最大，其次為平貝母，川貝母樣品色譜峰個數較少，且峰響應亦較小。與此同時，浙貝母、平貝母、川貝母亦存在共有峰峰1、峰2、峰4、峰7。

浙貝母樣品其特征圖譜中峰5、峰6為各色譜峰中相應最大色譜峰，且滿足峰5<峰6;平貝母樣品其特征圖譜中峰1、峰2響應最大，峰5、峰6響應較小;川貝母樣品其特征圖譜中峰1、峰2響應最大，但在峰5、峰6出峰處無明顯色譜峰出現。

圖1 不同貝母指紋圖譜分析測定結果

3 討論

張建興[2]研究表明，浙貝母中含有浙貝甲素、浙貝乙素、

貝母辛、貝母芬，貝母啶、貝母替啶、原貝母堿、異浙貝甲素