陳祥平　范小敏　柯皓天　陳仁芳　朱一平　李螢　劉玲　張佳鈺　沈曦彤

摘要[目的]采用RAPD和ITS方法分析湖北省桑屬植物親緣關(guān)系。[方法]利用RAPD分析湖北省桑屬植物的親緣關(guān)系，并與ITS分支圖進(jìn)行比較，研究湖北省桑屬植物親緣關(guān)系。[結(jié)果]兩者在分析桑屬的親緣關(guān)系時(shí)，均把桑屬分為2大支。其中，RAPD多態(tài)性高，適合居群遺傳多樣性分析；但RAPD資料屬等位基因頻率資料，不同種的RAPD擴(kuò)增產(chǎn)物往往并不同源，不宜假定外類(lèi)群，無(wú)法確定樹(shù)根。ITS為核糖體基因內(nèi)轉(zhuǎn)錄間隔區(qū)的差異，位點(diǎn)的變異往往能反映出桑屬種間的差異，宜假定外類(lèi)群，進(jìn)行分支分析。但I(xiàn)TS資料并不能把桑屬所有桑種分開(kāi)。[結(jié)論]在研究桑屬的親緣關(guān)系時(shí)，先用ITS進(jìn)行粗略的分類(lèi)后，再用RAPD進(jìn)行細(xì)分的結(jié)果較準(zhǔn)確。

關(guān)鍵詞湖北省；桑屬；RAPD；ITS；親緣關(guān)系；再分析

中圖分類(lèi)號(hào)S888.3；Q948文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼A文章編號(hào)0517-6611（2014）07-01917-04

作者簡(jiǎn)介陳祥平（1955-），男，四川成都人，副教授，碩士，從事蠶桑科學(xué)研究。*通訊作者，副教授，碩士生導(dǎo)師，博士，從事蠶桑新品種選育研究。

收稿日期20140210隨機(jī)擴(kuò)增片段長(zhǎng)度多態(tài)性DNA（random amplified polymorphic DNA，RAPD）標(biāo)記，發(fā)明于20世紀(jì)90年代[1-2]，是在PCR基礎(chǔ)上發(fā)展起來(lái)的一種對(duì)未知序列基因組DNA進(jìn)行隨機(jī)擴(kuò)增，根據(jù)擴(kuò)增的DNA條帶長(zhǎng)度的多態(tài)性，判斷供試材料間的遺傳多樣性及親緣關(guān)系。桑樹(shù)隨機(jī)擴(kuò)增多態(tài)性DNA，已有較多人研究[3-17]，但關(guān)于RAPD與核糖體內(nèi)轉(zhuǎn)錄間隔區(qū) （Internal Transcribed Spacer，ITS）對(duì)比分析的研究鮮有報(bào)道。筆者在前報(bào)《基于ITS標(biāo)記分析湖北省收集桑種質(zhì)資源的親緣關(guān)系》的基礎(chǔ)上[18]，選取相同材料，利用RAPD標(biāo)記，對(duì)湖北省桑樹(shù)種質(zhì)資源的親緣關(guān)系進(jìn)行再分析，試圖比較2種方法各自的優(yōu)缺點(diǎn)，以期為RAPD技術(shù)的進(jìn)一步應(yīng)用提供理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1材料 材料同前報(bào)，并增加浙江瑞穗桑、四川川桑、新疆黑桑、廣東荊桑、欽州長(zhǎng)果桑、云南滇桑和外類(lèi)群湖北構(gòu)樹(shù)，增加的材料分別取自浙江農(nóng)業(yè)大學(xué)桑品種園、新疆維吾爾自治區(qū)和田桑品種園、四川絲綢公司桑品種園、廣東省蠶桑研究所桑品種園、廣西欽州百果園和昆明植物園，所有材料經(jīng)鑒定后采集（表1）。

1.2DNA提取及質(zhì)量檢測(cè) 總DNA提取采用稍加改進(jìn)的CTAB法[19]，從0.150 g的硅膠干燥桑葉中提取。質(zhì)量和濃度用Nanodrop 2000微量紫外分光光度計(jì)檢測(cè)確認(rèn)。