楊鴻　鄧樺　盧月媚　李敏深　蒲文珺

摘要[目的] 探討玉屏風(fēng)復(fù)合多糖對(duì)免疫低下小鼠的調(diào)節(jié)和保護(hù)作用。[方法] 以環(huán)磷酰胺80 mg/kg誘導(dǎo)的免疫低下小鼠為實(shí)驗(yàn)動(dòng)物模型，研究不同劑量玉屏風(fēng)復(fù)合多糖（100、200和400 mg/kg）對(duì)小鼠脾臟指數(shù)、血清IL2和IFNγ含量的影響。[結(jié)果] 高劑量玉屏風(fēng)多糖能提高免疫功能低下小鼠的脾臟指數(shù)（P<0.05）。玉屏風(fēng)多糖能提高免疫抑制的小鼠血清的IL2和IFNγ含量，尤其以中、低劑量組效果較好。玉屏風(fēng)多糖能明顯提高正常小鼠血清的IL2含量（P<0.01），但對(duì)正常小鼠的IFNγ含量無顯著影響。[結(jié)論] 該研究可為玉屏風(fēng)復(fù)合多糖的臨床應(yīng)用提供試驗(yàn)依據(jù)。

關(guān)鍵詞玉屏風(fēng)復(fù)合多糖；IL2；IFNγ；脾臟指數(shù)；小鼠

中圖分類號(hào)S567文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼A文章編號(hào)0517-6611（2014）12-03571-02

基金項(xiàng)目廣東省科技計(jì)劃項(xiàng)目（2009B020307004）；廣東省自然基金項(xiàng)目（S2013010012191）。

作者簡(jiǎn)介楊鴻（1966-），男，云南大理人，教授，博士，從事獸醫(yī)藥理學(xué)研究。

復(fù)方中藥多糖免疫活性及其應(yīng)用的研究已逐漸成為生命科學(xué)及天然藥物研究的熱點(diǎn)。玉屏風(fēng)散是中醫(yī)扶正固本的代表方劑，具有廣泛的免疫增強(qiáng)作用[1]。玉屏風(fēng)多糖（Yupingfeng polysaccharides，YPFP）為玉屏風(fēng)散總多糖有效部位群，含黃芪多糖、白術(shù)多糖和防風(fēng)多糖等，是該方劑臨床藥效的主要物質(zhì)基礎(chǔ)[2]。目前，玉屏風(fēng)散組方中的單味多糖（如黃芪多糖和白術(shù)多糖）已在獸醫(yī)臨床用于免疫增強(qiáng)劑、疫苗佐劑、飼料添加劑以及疾病的輔助治療[3-4]，而有關(guān)玉屏風(fēng)復(fù)合多糖在畜牧獸醫(yī)領(lǐng)域的研究和應(yīng)用尚未見報(bào)道?；诖?，筆者以環(huán)磷酰胺（Cyclophosphamide，CY）建立免疫抑制小鼠模型，研究不同劑量玉屏風(fēng)復(fù)合多糖對(duì)小鼠脾臟指數(shù)、血清IL2和IFNγ水平的影響，旨在為玉屏風(fēng)復(fù)合多糖的臨床應(yīng)用提供試驗(yàn)依據(jù)。

1材料與方法

1.1玉屏風(fēng)多糖的制備將黃芪、白術(shù)和防風(fēng)按3∶1∶1的重量配方。采用L9（34）正交試驗(yàn)設(shè)計(jì)優(yōu)化水提醇沉的提取工藝，采用苯酚-硫酸法測(cè)定多糖含量。最佳提取工藝為：料液比1∶16、浸提時(shí)間1.5 h、浸提溫度90 ℃、提取次數(shù)3次，然后抽濾、濃縮提取液，無水乙醇沉淀濃縮液12 h，取沉淀物經(jīng)真空干燥，即得玉屏風(fēng)復(fù)合多糖。經(jīng)測(cè)定，玉屏風(fēng)多糖得率為11.47%，多糖含量為36.38%。

1.3儀器和試劑全自動(dòng)酶標(biāo)儀（芬蘭Labsystems公司）；環(huán)磷酰胺（江蘇恒瑞醫(yī)藥有限公司，批號(hào)為12032725）；小鼠IL2和IFNγ ELISA檢測(cè)試劑盒，購(gòu)自上海亞培生物科技有限公司。

1.2實(shí)驗(yàn)動(dòng)物模型與分組處理90只SPF級(jí)昆明小鼠（廣東省醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心），合格證書號(hào)為4407207211，雌雄各半，25～35日齡，體重16～20 g，隨機(jī)分成6組，每組15只。設(shè)置空白對(duì)照組、陰性對(duì)照組（環(huán)磷酰胺免疫抑制組）、陽(yáng)性對(duì)照組（僅灌服玉屏風(fēng)復(fù)合多糖）、多糖高、中、低劑量組（玉屏風(fēng)復(fù)合多糖+環(huán)磷酰胺）。1～10 d灌服玉屏風(fēng)復(fù)合多糖，4、8、10 d腹腔注射環(huán)磷酰胺，11 d剖殺。具體分組與處理見表1。

1.4檢測(cè)脾臟指數(shù)將小鼠摘眼球放血處死，進(jìn)行系統(tǒng)剖解，觀察脾臟和胸腺的形態(tài)變化；稱取體重和脾臟重量，按照以下公式計(jì)算脾臟指數(shù)：脾臟指數(shù)=脾臟重量/體重。

1.5血清中IL2和IFNγ含量的測(cè)定每組隨機(jī)選取6只小鼠采樣，小鼠于11 d眼球采血，用離心管收集血液。待血液凝固后進(jìn)行高速離心，3 000 r/min離心5 min，取血清。血清IL2和IFNγ含量的測(cè)定按照ELISA試劑盒說明書進(jìn)行。

1.6數(shù)據(jù)處理試驗(yàn)數(shù)據(jù)均用±s表示，使用SPSS 18.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行方差分析和t檢驗(yàn)。

2結(jié)果與分析

2.1小鼠體質(zhì)量和脾臟指數(shù)的變化由表2可知，免疫抑制對(duì)照組、多糖各劑量組小鼠體重均顯著降低，空白對(duì)照組和多糖陽(yáng)性對(duì)照組體重最高（P<0.05）。除空白對(duì)照組和多糖陽(yáng)性對(duì)照組外，其余各組脾臟指數(shù)顯著降低（P<0.01）。其中，免疫抑制對(duì)照組脾臟指數(shù)最低，與多糖高劑量組差異顯著（P<0.05）。這說明高劑量玉屏風(fēng)多糖對(duì)小鼠脾臟有一定的保護(hù)作用。

2.2玉屏風(fēng)多糖對(duì)小鼠血清IL2和IFNγ含量的影響由表3可知，免疫抑制對(duì)照組的IL2含量最低，與空白對(duì)照組差異極顯著（P<0.01）；多糖高、中劑量組IL2含量均低于空白對(duì)照組；多糖高、中、低劑量組IL2含量均高于免疫抑制對(duì)照組，其中中、低劑量組差異顯著或極顯著（P<001或P<005）；多糖陽(yáng)性對(duì)照組的IL2含量最高，顯著高于其他各組（P<0.01）。

免疫抑制對(duì)照組的IFNγ含量明顯低于空白對(duì)照組（P<001）；多糖高、中、低劑量組的IFNγ含量均低于空白對(duì)照組和陽(yáng)性對(duì)照組（P<0.01或P<005）；多糖高、中、低劑量組的IFNγ含量明顯高于免疫抑制對(duì)照組（P<0.01或P<005）；空白對(duì)照組和陽(yáng)性對(duì)照組之間無顯著差異。

3討論

第4、8、10天用環(huán)磷酰胺80 mg/kg給小鼠腹腔注射環(huán)磷酰胺，小鼠的體重、脾臟指數(shù)、血清IL2和IFNγ含量較空白對(duì)照組明顯降低（P<0.01或P<0.05），表明該方法能建立小鼠免疫抑制動(dòng)物模型。

該試驗(yàn)結(jié)果表明玉屏風(fēng)多糖對(duì)小鼠的生長(zhǎng)無明顯的影響。玉屏風(fēng)多糖對(duì)正常小鼠脾臟指數(shù)無明顯促進(jìn)作用，高劑量組玉屏風(fēng)多糖能提高免疫功能低下小鼠的脾臟指數(shù)（P<0.05），說明其對(duì)小鼠的脾臟功能有保護(hù)作用。筆者以前研究表明玉屏風(fēng)復(fù)合多糖可以明顯促進(jìn)小鼠免疫抑制后脾臟結(jié)構(gòu)和功能的恢復(fù)，高、中劑量組促進(jìn)恢復(fù)的作用較低劑量組更佳[5]。

IL2是一種在機(jī)體的免疫調(diào)節(jié)中發(fā)揮著重要而復(fù)雜作用的細(xì)胞因子，既可以促進(jìn)淋巴細(xì)胞增殖，增強(qiáng)免疫功能，又能限制 T 細(xì)胞反應(yīng)而增強(qiáng)機(jī)體的免疫耐受[6]。IFNγ主要是由活化的T細(xì)胞和NK細(xì)胞產(chǎn)生的，是動(dòng)物機(jī)體最重要的細(xì)胞因子之一，具有強(qiáng)大的免疫調(diào)節(jié)作用和抗病毒、抗腫瘤作用[7]。該試驗(yàn)結(jié)果表明玉屏風(fēng)復(fù)合多糖能提高免疫抑制的小鼠血清的IL2和IFNγ含量（P<0.01或P<0.05），尤其以中、低劑量組效果較好；玉屏風(fēng)多糖能明顯提高正常小鼠血清的IL2含量（P<0.01），但對(duì)正常小鼠的IFNγ含量無明顯影響。

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