林的仕，余楚欽，林華慶，陳潔，鄧艷斌，林蘇娜，吳麗花

(廣東藥學(xué)院廣東省藥物新劑型重點實驗室，廣州 510006)

3種頭孢呋辛酯干混懸劑體外溶出行為比較*

林的仕，余楚欽，林華慶，陳潔，鄧艷斌，林蘇娜，吳麗花

(廣東藥學(xué)院廣東省藥物新劑型重點實驗室，廣州 510006)

目的 考察3種頭孢呋辛酯干混懸劑(原研、國產(chǎn)、自制)在4種不同溶出介質(zhì)中的溶出行為,并對其進(jìn)行相似性評價。方法分別以水、pH 1.2氯化鉀/鹽酸溶液、pH 4.5醋酸鹽緩沖溶液、pH 7.0磷酸鹽緩沖溶液為溶出介質(zhì),采用槳法,50 r·min-1進(jìn)行溶出度實驗。采用紫外分光光度法分別測定不同時間點的溶出量,繪制溶出曲線。以原研頭孢呋辛酯干混懸劑(GlaxoSmithKline)為參比制劑,采用美國食品和藥品管理局(FDA)推薦的相似因子比較法對溶出曲線進(jìn)行相似性比較。結(jié)果自制頭孢呋辛酯干混懸劑在介質(zhì)為水、pH 1.2氯化鉀-鹽酸溶液、pH 4.5醋酸鹽緩沖溶液、pH 7.0磷酸緩沖溶液中的相似因子分別為74,92,77,75,國產(chǎn)頭孢呋辛酯干混懸劑在以上4種介質(zhì)中的相似因子分別為40,32,49,50。結(jié)論自制頭孢呋辛酯干混懸劑在4種溶出介質(zhì)中溶出曲線與參比制劑相似,而國產(chǎn)市售頭孢呋辛酯干混懸劑僅在pH 4.5醋酸鹽緩沖溶液和pH 7.0磷酸鹽緩沖溶液中與參比制劑的溶出曲線相似。

頭孢呋辛酯干混懸劑；體外溶出行為；相似性

頭孢呋辛酯(cefuroxime axetil)為第二代頭孢菌素頭孢呋辛的前體藥物。頭孢呋辛酯本身并不具有抗菌活性,口服吸收后迅速被體液和血液中的非特異性酶水解生成頭孢呋辛而發(fā)揮抗菌作用[1]。臨床主要用于呼吸道感染、尿道感染、腎盂腎炎、腦膜炎、敗血癥、淋球菌感染等疾病[2]。為滿足臨床上嬰兒、兒童、老年人等不能吞服患者的用藥需要,藥劑科研人員已運用現(xiàn)代制劑技術(shù)成功將其制成掩味的干混懸劑,并成功上市。自制頭孢呋辛酯的處方工藝較市售產(chǎn)品有改進(jìn),頭孢呋辛酯干混懸劑的標(biāo)準(zhǔn)收載于國家藥品標(biāo)準(zhǔn)WS1-(X-391)-2004Z中[3],但該標(biāo)準(zhǔn)并未涉及溶出度檢查。本品屬低溶解性-高滲透性藥物,溶出是其體內(nèi)吸收的限速步驟,其與生物利用度密切相關(guān)。為評價國產(chǎn)市售頭孢呋辛酯干混懸劑(某醫(yī)藥公司)及自制頭孢呋辛酯干混懸劑的內(nèi)在品質(zhì),按照仿制藥一致性評價要求,參考有關(guān)文獻(xiàn)及資料[4-6],分別繪制原研(GlaxoSmithKline)、國產(chǎn)、自制3種頭孢呋辛酯干混懸劑在4種不同溶出介質(zhì)中的溶出曲線,并評價其相似性。

1 儀器與試藥

1.1 儀器 ZRS-8G智能溶出儀(天津市天大天發(fā)科技有限公司),ZKT-18F真空脫氣儀(天津市天大天發(fā)科技有限公司),UV-1700紫外分光光度計(日本島津公司),KQ-300DA型醫(yī)用超聲波清洗機(jī)(昆山超聲儀器有限公司),CP225D型、BS224S型電子分析天平[賽多利斯科學(xué)儀器(北京)有限公司]。

1.2 試藥 頭孢呋辛酯對照品(中國食品藥品檢定研究院,純度80.8%,批號:130492-200402),頭孢呋辛酯原料藥(廣東立國制藥有限公司,含量:84.1%,批號:FZ41204071),國產(chǎn)頭孢呋辛酯干混懸劑[某醫(yī)藥有限公司,規(guī)格:0.125 g(C16H16N4O8S),批號: 12060142],原研頭孢呋辛酯干混懸劑[商品名: CEFTIN?,英國GlaxoSmithKline公司,規(guī)格:0.250 g (C16H16N4O8S),批號:C600383],自制頭孢呋辛酯干混懸劑[規(guī)格0.125 g(C16H16N4O8S),批號: 2013040101]。其他試劑均為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 溶出介質(zhì)的配制 ①水:為雙蒸水。②pH 1.2氯化鉀/鹽酸溶液:取0.2 mol·L-1的氯化鉀溶液250 mL和0.2 mol·L-1鹽酸溶液425 mL,加水稀釋至1 000 mL,即得。③pH 4.5醋酸鹽緩沖溶液:稱取三水合醋酸鈉2.99 g,加水適量溶解,加2 mol·L-1冰醋酸溶液14.0 mL,并定容至1 000 mL,即得。④pH 7.0磷酸鹽緩沖溶液:稱取無水磷酸氫二鈉5.7 g和磷酸二氫鈉3.7 g,加水溶解并稀釋至1 000 mL,即得。

2.2 對照品溶液的配制 精密稱取頭孢呋辛酯對照品15 mg,置10 mL量瓶中,加甲醇使溶解并稀釋至刻度,搖勻。精密量取1 mL置于100 mL量瓶中,分別加對應(yīng)溶出介質(zhì)稀釋至刻度,搖勻,即得。

2.3 專屬性實驗

2.3.1 檢測波長的選擇 取“2.2”項下的對照品溶液,按紫外分光光度法,分別以溶出介質(zhì)為空白對照,在200～400 nm波長范圍內(nèi)掃描,繪制對照品溶液紫外掃描圖譜。稱取頭孢呋辛酯干混懸劑適量,置于100 mL量瓶中,加溶出介質(zhì)適量超聲10 min并稀釋至刻度,搖勻,過濾,取續(xù)濾液按紫外分光光度法,分別以溶出介質(zhì)為空白對照,在200～400 nm的波長范圍內(nèi)掃描,繪制樣品溶液的紫外掃描圖譜。結(jié)果表明,4種不同介質(zhì)中,對照品與樣品均在280 nm波長處有最大吸收峰出現(xiàn),故選擇280 nm作為主成分的測定波長。

2.3.2 輔料干擾實驗 按處方量比例,稱取混合輔料適量,以溶出介質(zhì)為溶劑,制成相當(dāng)于測定濃度的溶液,過濾,取續(xù)濾液,按紫外分光光度法,以溶出介質(zhì)為空白對照,在200～400 nm的波長范圍內(nèi)掃描。結(jié)果表明,混合輔料在280 nm波長處吸收度干擾不超過2%,可忽略不計。

2.4 線性關(guān)系考察 精密稱取頭孢呋辛酯對照品22 mg,置于10 mL量瓶中,加甲醇使溶解并稀釋至刻度,搖勻。精密量取1 mL,置4個10 mL量瓶中,分別用“2.1”項下4種溶出介質(zhì)稀釋至刻度,搖勻,作為儲備液。分別精密量取儲備液0.2,0.4,0.5,0.6,0.8, 1.0 mL置于10 mL量瓶中,加溶出介質(zhì)稀釋至刻度,搖勻。按紫外分光光度法,以溶出介質(zhì)為空白,于280 nm處測定吸光度。以吸光度(A)對濃度(C)進(jìn)行線性回歸。結(jié)果表明,頭孢呋辛酯在3.61～18.05 μg·mL-1范圍內(nèi),在280 nm處吸光度與濃度呈良好線性關(guān)系。見表1。

表1 頭孢呋辛酯在4種不同pH介質(zhì)下的線性方程與相關(guān)系數(shù)

2.5 濾膜吸附實驗 工作中常用的濾膜分為水系和有機(jī)系兩種,因選取的4種介質(zhì)均不含有機(jī)溶劑,根據(jù)《中華人民共和國藥典》2010年版二部相關(guān)要求并結(jié)合樣品實際情況,確定選取水系膜,孔徑為0.8 μm (φ=25 mm)進(jìn)行濾膜吸附驗證實驗。取“2.2”項下的對照品溶液適量,將其分為兩份,一份不過濾,另一份用濾膜過濾,在280 nm處測定兩者的吸光度。結(jié)果表明,濾膜吸附量均＜2%,可忽略不計[7]。

2.6 精密度實驗 分別精密量取“2.4”項下的儲備液0.4,1.2,2.0 mL,置于20 mL量瓶中,加溶出介質(zhì)稀釋至刻度,搖勻。以溶出介質(zhì)為空白,于280 nm波長處測定吸光度,各連續(xù)測定6次。見表2。

表2 4種介質(zhì)精密度實驗結(jié)果

2.7 重復(fù)性實驗 取頭孢呋辛酯干混懸劑(批號: 2013040101)加水適量配制成規(guī)格為25 mg·mL-1(以頭孢呋辛計)的混懸液,取以上混懸液5 mL,每次6份,共測定3次。依溶出度測定法(漿法),實驗溫度: 37℃,分別以水、pH 1.2氯化鉀/鹽酸溶液、pH 4.5醋酸鹽緩沖溶液、pH 7.0磷酸鹽緩沖溶液900 mL為溶劑,轉(zhuǎn)速為50 r·min-1,依法操作,經(jīng)5,15,90 min時(其中水、pH4.5的介質(zhì)取樣點為5,30,360 min),取溶液5 mL濾過,棄去初濾液,精密量取續(xù)濾液適量,加對應(yīng)溶出介質(zhì)稀釋制成每毫升中含11 μg的溶液,作為供試品溶液。取上述溶液及“2.2”項下的對照品溶液,照紫外-可見分光光度法,分別在280 nm波長處測定吸光度,計算不同時間的溶出量。見表3。

2.8 溶液穩(wěn)定性實驗 取頭孢呋辛酯干混懸劑置研缽充分研磨,分別稱取4份置于100 mL量瓶中,分別加溶出介質(zhì)適量,超聲15 min使溶解并稀釋至刻度,搖勻,過濾,各取濾液適量,于室溫放置,并于0,0.5, 1,2,3,4,5和6 h測定吸光度。結(jié)果表明,測定溶液在室溫下,6 h內(nèi)的RSD均＜2%,溶液基本穩(wěn)定。

2.9 加樣回收率實驗 精密稱取已知含量(31.25 mg·g-1,以頭孢呋辛計)的頭孢呋辛酯干混懸劑樣品9份,每份0.1 g,置100 mL量瓶中,分別精密加入頭孢呋辛酯對照品適量(以頭孢呋辛計),先加甲醇適量超聲溶解,再加溶出介質(zhì)稀釋至刻度,搖勻,濾過,精密量取2 mL置于100 mL量瓶中,分別加對應(yīng)溶出介質(zhì)稀釋至刻度,搖勻,照紫外分光光度法,在280 nm處測定吸光度。另取“2.2”項下對照品溶液,同法測定,計算回收率。見表4。

表3 4種介質(zhì)重復(fù)性實驗結(jié)果 %

表4 頭孢呋辛酯在4種介質(zhì)下的加樣回收率實驗結(jié)果

2.10 溶出曲線繪制 按如下方法[4]分別測定原研、國產(chǎn)、自制3種頭孢呋辛酯干混懸劑在不同pH的溶出介質(zhì)中的溶出曲線,各測定3次:取頭孢呋辛酯干混懸劑加水適量配制成規(guī)格為25 mg·mL-1(以頭孢呋辛計)的混懸液。取上述混懸液照溶出度測定法(漿法),實驗溫度:37℃,分別以水、pH 1.2氯化鉀/鹽酸溶液、pH 4.5醋酸鹽緩沖溶液、pH 7.0磷酸鹽緩沖溶液900 mL為溶劑,轉(zhuǎn)速為50 r·min-1,依法操作,經(jīng)5,10,15,30,45,60,90,120,180,240,300,360 min時 (pH1.2、pH7.0的介質(zhì)則取樣至120 min時結(jié)束實驗),取溶液5 mL濾過(同時補(bǔ)充同溫介質(zhì)5 mL),棄去初濾液,精密量取續(xù)濾液適量,加溶出介質(zhì)稀釋制成每毫升中含11 μg的溶液,作為供試品溶液。取上述溶液及“2.2”項下的對照品溶液,照紫外-可見分光光度法,分別在280 nm波長處測定吸光度,計算不同時間的累積溶出百分率。以時間對溶出百分率作圖,繪制溶出曲線。見圖1。

A.水;B.pH 1.2氯化鉀/鹽酸溶液;C.pH 4.5醋酸鹽緩沖溶液;D.pH 7.0磷酸鹽緩沖溶液圖1 頭孢呋辛酯干混懸劑在4種介質(zhì)中的溶出曲線(n=3)

結(jié)果可見與參比制劑相比自制頭孢呋辛酯干混懸劑在4種不同pH介質(zhì)條件下相似因子f2均＞46,說明體外溶出行為相似。而國產(chǎn)頭孢呋辛酯干混懸劑在pH4.5醋酸鹽緩沖溶液條件下相似因子f2＞46,在 pH7.0的磷酸鹽緩沖溶液條件下相似因子f2＞42,說明在這兩種溶出介質(zhì)中溶出行為相似。在水、pH1.2氯化鉀/鹽酸溶液中溶出行為不相似。見表5。

表5 4種溶出介質(zhì)條件下溶出曲線相似因子f2

3 討論

頭孢呋辛酯干混懸劑的國家藥品標(biāo)準(zhǔn)WS1-(X-391)-2004Z中并未有溶出度質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn),根據(jù)《普通口服固體制劑溶出度實驗技術(shù)指導(dǎo)原則》,采用《美國藥典》中該品種的溶出測定方法進(jìn)行不同溶出介質(zhì)條件下溶出曲線的比較[8]。結(jié)果顯示溶出較為緩慢,但在規(guī)定時間內(nèi)已有一定落差,不影響溶出曲線的相似性評價,且由于該品種主要是嬰兒、兒童、老年人以及其他不能吞服的患者服用,一般認(rèn)為槳法50 r·min-1與這類患者消化道的蠕動強(qiáng)度相當(dāng),故不再放寬實驗條件。

文獻(xiàn)[9]指出參比制劑溶出率在規(guī)定時間內(nèi)達(dá)85%以上,以參比制劑平均溶出率達(dá)85%的時間點為Ta,比較1/4Ta、1/2Ta、3/4Ta和Ta 4個時間點的兩者平均溶出率f2因子＞42；達(dá)50%～85%或85%以上的,以參比制劑在結(jié)束時間點平均溶出率的85%的時間點作為Ta,比較1/4Ta、1/2Ta、3/4Ta和Ta 4個時間點,f2因子＞46,則可判定為相似。本研究中各計算時間點數(shù)據(jù)偏離度均符合要求。

國內(nèi)已有溶出度標(biāo)準(zhǔn)的干混懸劑溶出實驗時,多采用直接投入干混懸劑的方法。筆者也嘗試該投樣方法進(jìn)行實驗,發(fā)現(xiàn)除在pH 7.0磷酸鹽緩沖溶液中頭孢呋辛酯干混懸劑在轉(zhuǎn)漿攪動下能分散在介質(zhì)中外,其他3種溶出介質(zhì)均是漂浮在液面,影響溶出。故最終采取第35版《美國藥典》中該品種的投樣方法。相比之下,采取投入混懸液的方法更能真實模擬服藥過程,有助于建立體內(nèi)外相關(guān)性。

國產(chǎn)上市頭孢呋辛酯干混懸劑批內(nèi)均一性和批間重復(fù)性均良好,與參比制劑的溶出曲線卻存在差異,說明其內(nèi)在品質(zhì)與參比制劑仍存在差異。參比制劑與自制制劑兩者在4種溶出介質(zhì)條件下溶出曲線均相似,初步認(rèn)定自制制劑處方、工藝合理,具有與與參比制劑相當(dāng)?shù)膬?nèi)在品質(zhì),但它僅在一定程度上預(yù)測生物等效性的研究情況及指導(dǎo)生物等效性實驗受試者的選擇,其生物等效性和臨床療效有待生物等效性實驗和臨床實驗驗證。

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DOI 10.3870/yydb.2014.04.028

R978.11;TQ460.6

A

1004-0781(2014)04-0503-05

2013-06-05

2013-09-28

*藥物制劑關(guān)鍵技術(shù)研發(fā)及產(chǎn)業(yè)化示范項目(2008A1-E4101)

林的仕(1988-),男,廣東揭陽人,碩士,主要從事緩控釋制劑的研究。電話:(0)13450207406,E-mail：lindishi1988@163.com。

林華慶(1964-),男,廣東湛江人,教授,碩士生導(dǎo)師,學(xué)士,主要從事緩控釋制劑和中藥新劑型的研究。電話: 020-39352502,E-mail：huaqing_@vip.tom.com。