馬 龍，李 莉，王 磊，彭麗娟，楊佳冰，趙 燕，趙 原

（1.寧夏動(dòng)物疾病預(yù)防控制中心，寧夏 銀川 750001；2.靈武市動(dòng)物疾病預(yù)防控制中心，寧夏 靈武 750400）

1 流行概況

2012年3月16日至4月23日，寧夏某動(dòng)物園先后從山東某市調(diào)入290只孔雀。4月21日1只孔雀首先發(fā)病，對(duì)病死孔雀進(jìn)行詳細(xì)記錄，眼觀病理變化主要表現(xiàn)為呼吸困難、眼腫脹、采食減少，臥地不起，嘴流[1]黏液，拉白綠色稀糞便。至4月26日先后又8只發(fā)病，經(jīng)藥物治療，每只按（3～4羽份/只）肌注新城疫疫苗，進(jìn)行緊急免疫接種，無(wú)明顯好轉(zhuǎn)，沒(méi)有配合其他藥物進(jìn)行輔助治療。到6月18日共死亡54只，隨后出現(xiàn)零星死亡。8月5日突然死亡79只， 8月6日上午又死亡13只，截至8月6日?qǐng)@內(nèi)共死亡146只孔雀。發(fā)病孔雀的主要臨床癥狀為呼吸困難，下痢、精神紊亂。動(dòng)物防疫部門(mén)對(duì)發(fā)病孔雀采用新城疫疫苗大劑量（3～5羽份／只）肌注，并用0.1%菌毒凈帶孔雀消毒，飲用含適量多維、10%葡萄糖水治療之后這批孔雀發(fā)病率急劇下降再無(wú)死亡報(bào)告。

2 臨床癥狀

患病孔雀精神沉郁，頭腫，鼻塞，不愿走動(dòng)，厭食，下痢，體溫高達(dá)44℃，羽毛松亂，呼吸困難而呈張口呼吸，口中流有白色[2]黏液。部分表現(xiàn)神經(jīng)癥狀，雙翅麻痹下垂，雙腿不能站立，頭頸扭轉(zhuǎn)呈現(xiàn)轉(zhuǎn)圈動(dòng)作。

3 剖檢變化

剖檢病死孔雀發(fā)現(xiàn)氣管黏膜出血，肺組織有魚(yú)肉樣變，腺胃乳頭出血、潰瘍，肌胃肌層有出血點(diǎn)，十二指腸腫、彌漫性出血，盲腸扁桃體腫脹、黏膜出血，腎腫大、花斑樣出血，胸腔積水，心臟呈絨毛心、形成白色纖維覆蓋，肝臟表面呈白色纖維且脆。

4 實(shí)驗(yàn)室診斷

采集孔雀血液和病死孔雀咽喉、氣管、腸管、心、肝、脾、肺、腎和腦等組織采用RT—PCR方法進(jìn)行檢測(cè)。

4.1 樣品的采集

采集疑似發(fā)病孔雀病料5份，利用RT—PCR方法檢測(cè)新城疫病毒（NDV）。同群發(fā)病靜脈采血5份，周邊未接觸病變10份。

4.2 材料與試劑

4.2.1 TransScriptTM One-Step RT—PCR SuperMix kit購(gòu)自北京全式金生物技術(shù)有限公司，Marker DL2000購(gòu)自大連寶生物工程有限公司。

4.3 樣品的處理

4.3.1 采集病死孔雀的組織樣品按照常規(guī)方法用pH7.2的PBS溶液進(jìn)行研磨，反復(fù)凍融3次，10000r/min離心3min，取上清液作為RT—PCR試驗(yàn)材料。

4.4 RNA的提取

4.4.1 病毒RNA按公司High pure Viral RNA Kit試劑盒說(shuō)明書(shū)提取

4.4.2 對(duì)疑似患病孔雀組織和同群進(jìn)行新城疫RT—PCR檢測(cè)

4.4.3 目的基因的擴(kuò)增分析

4.4.3.1 新城疫RT—PCR全預(yù)混通用反應(yīng)液中含有模板以外的所有RT—PCR所需酶、引物及各種離子。在各設(shè)定的PCR管中分別加入24uL反應(yīng)液、3uLCI類(lèi)陽(yáng)性對(duì)照及3uLCII類(lèi)陽(yáng)性對(duì)照，使總體積達(dá)30uL。

4.4.3.2 反應(yīng)條件為：42℃作用35min，90℃作用3min。反應(yīng)參數(shù)：94℃ 30s，55℃ 40s，72℃40s，35個(gè)循環(huán)，72℃延伸7min。擴(kuò)增產(chǎn)物以1.5%瓊脂糖凝膠電泳檢測(cè)4.4.3.3用1×TAE緩沖液配制1.5%的瓊脂糖凝膠，100V電泳30min后取5uL RT—PCR擴(kuò)增產(chǎn)物進(jìn)行電泳，于紫外凝膠紫外燈下進(jìn)行觀察。

4.5 實(shí)驗(yàn)結(jié)果

對(duì)疑似患病孔雀組織和同群進(jìn)行新城疫病毒RT—PCR檢測(cè)，得到目的條帶，經(jīng)1.5%的瓊脂糖凝膠電泳分析，擴(kuò)增出了特異的條帶，與預(yù)期結(jié)果一致。綜合臨床表現(xiàn)和病理特征以及RT—PCR檢測(cè)結(jié)果，本病確定為新城疫病毒感染。

圖2 實(shí)驗(yàn)結(jié)果

5 防治

5.1 對(duì)新引進(jìn)的孔雀必須嚴(yán)格隔離和消毒，并注意人員、包裝物品、車(chē)輛等一切與孔雀有接觸的物品的獸醫(yī)衛(wèi)生。

5.2 堅(jiān)持經(jīng)常、定期地對(duì)鳥(niǎo)舍和周?chē)h(huán)境的清掃與消毒。

5.3 緊急接種新城疫活疫苗可提高鳥(niǎo)體對(duì)新城疫的緊急免疫力。

5.4 對(duì)可疑病例應(yīng)盡快利用實(shí)驗(yàn)室等診斷手段，做到早確診并果斷采取一系列有效措施，包括將病鳥(niǎo)及時(shí)隔離，鳥(niǎo)舍和飼養(yǎng)用具及時(shí)消毒并對(duì)該場(chǎng)地進(jìn)行封鎖，對(duì)個(gè)別病鳥(niǎo)進(jìn)行淘汰，以防病原擴(kuò)散和蔓延。

5.5 病死孔雀應(yīng)采取無(wú)害化處理，將其深埋或焚燒，并做好接觸封鎖的一切善后工作。

[1]賈松濤，劉星，宋慶華.孔雀新城疫繼發(fā)大腸桿菌病的診治[J].中國(guó)畜牧獸醫(yī)，2011，38（12）：205-206.

[2]張媛，王丹，葛晨霞，等.孔雀組織滴蟲(chóng)病的病理學(xué)診斷[J].中國(guó)獸醫(yī)雜志，2011，47（8）：49-50.