張罡 齊喜紅 王慶

寧夏食品藥品檢驗(yàn)所 寧夏銀川 750004

一測(cè)多評(píng)法測(cè)定人參健脾片中3種成分

張罡 齊喜紅 王慶

寧夏食品藥品檢驗(yàn)所 寧夏銀川 750004

目的:建立在同一色譜條件下測(cè)定枳殼、陳皮和青皮中的活性成分柚皮苷、橙皮苷和新橙皮苷含量的方法。方法:采用Phenomenex Gemini C18(250mm×4.6mm，5μm)色譜柱，以乙腈－水(17:83)(用磷酸調(diào)pH至3.0)為流動(dòng)相，檢測(cè)波長(zhǎng)283nm。結(jié)果:柚皮苷、橙皮苷及新橙皮苷的線性范圍分別為0.0999～1.249μg(r=0.9996)，0.08172～1.0215μg(r=0.9999)，0.0816～1.02μg(r=0.9996)。結(jié)論:該法簡(jiǎn)便，分離效果好，專屬性強(qiáng)，準(zhǔn)確，可用于人參健脾片的質(zhì)量控制。

HPLC;人參健脾片;柚皮苷;橙皮苷;新橙皮苷

人參健脾片是由人參、當(dāng)歸、草豆蔻等17味中藥制成的片劑，具有補(bǔ)氣健脾，開胃消食的作用［1］。臨床用于脾虛濕困所致的食少便溏，或吐或?yàn)a，脘腹脹滿，四肢乏力，面色萎黃等癥。為了更好的控制藥品質(zhì)量，保證臨床用藥的安全性和有效性，我們建立了同一色譜條件下同時(shí)測(cè)定人參健脾片中枳殼有效成分柚皮苷、新橙皮苷［2］、陳皮和青皮有效成分橙皮苷的高效液相色譜法。

1 儀器與試藥

1.1 儀器Agilent1260高效液相色譜儀，Agilent1260色譜數(shù)據(jù)工作站。梅特勒－托利多XS205電子天平。

1.2 試藥橙皮苷對(duì)照品(批號(hào):110721－201014)純度為95.1%;柚皮苷對(duì)照品(批號(hào):110722－200610);新橙皮苷對(duì)照品(批號(hào):111857－201102)純度為99.6%，均由中國(guó)藥品生物制品檢驗(yàn)所提供。人參健脾片樣品為河北百善制藥有限公司生產(chǎn)，批號(hào)為120211、1202132、11101151;浙江維康藥業(yè)有限公司生產(chǎn)，批號(hào):20100809、20120212、20120213、20120214。乙腈為色譜純，水為高純水，其他試劑均為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件Phenomenex Gemini C18(250mm×4.6mm，5μm);以乙腈－水(17:83)(用磷酸調(diào)pH至3.0)為流動(dòng)相，檢測(cè)波長(zhǎng)283nm。在上述條件下，樣品峰達(dá)到基線分離，與相鄰的色譜峰分離度大于1.5。各對(duì)照品峰理論塔板數(shù)不小于3000.結(jié)果見圖1.

圖1 高效液相色譜圖

2.2 混合對(duì)照品溶液的制備精密稱取橙皮苷對(duì)照品，柚皮苷對(duì)照品，新橙皮苷對(duì)照品適量，加甲醇制成每1ml各含50μg的溶液。

2.3 供試品溶液的制備取本品10片，除去包衣，精密稱定，研細(xì)，取約1g，精密稱定，精密加入甲醇50ml，密塞，稱定重量，加熱回流30分鐘，放冷，再稱定重量，用甲醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得。

2.4 方法學(xué)研究

2.4.1 測(cè)定波長(zhǎng)的選擇根據(jù)《中國(guó)藥典》2010年版，設(shè)定波長(zhǎng)為283nm。

2.4.2 線性關(guān)系考察精密吸取混合對(duì)照品溶液(柚皮苷對(duì)照品溶液(0.2498mg/ml)，橙皮苷對(duì)照品溶液(0.2043mg/ml)，新橙皮苷對(duì)照品溶液(0.204mg/ml))0.4ml、1ml、2ml、3ml、4ml、5ml至10ml量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻。分別吸取10μl注入液相色譜儀測(cè)定。以進(jìn)樣量(μg)為橫坐標(biāo)(X)，峰面積為縱坐標(biāo)(Y)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，計(jì)算回歸方程?；貧w方程分別為Y=1433.2X－2.4036，r=0.9996;Y=1614.9X－1.3078，r= 0.9999;Y=1696.2X+5.4345，r=0.9996。

2.4.3 穩(wěn)定性試驗(yàn)取同一批供試品(批號(hào)批號(hào)120211)，按2.3項(xiàng)供試品溶液制備方法制備，分別于配制后0、4、8、12、16、20小時(shí)，依法測(cè)定，柚皮苷、橙皮苷和新橙皮苷的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差分別為0.42%、0.94%和0.99%。結(jié)果表明，在20小時(shí)內(nèi)樣品溶液基本穩(wěn)定。

2.4.4 重復(fù)性試驗(yàn)取同一批供試品(批號(hào)批號(hào)120211)6份，按2.3項(xiàng)制備成供試品溶液，按2.1項(xiàng)色譜條件測(cè)定。結(jié)果表明該方法重復(fù)性良好，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差分別為2.16%，2.30%，2.07%。

2.4.5 加樣回收試驗(yàn)精密稱取已知含量同一批號(hào)(批號(hào)120211，柚皮苷含量0.29mg/片，橙皮苷含量0.44mg/片，新橙皮苷含量0.23mg/片)的供試品6份，每份取樣量為供試品取量(1g)的50%(0.5g)，以當(dāng)前取樣含量的1:1，分別精密加入柚皮苷對(duì)照品溶液(0.2498mg/ml)、橙皮苷對(duì)照品溶液(0.2043mg/ml)、新橙皮苷對(duì)照品溶液(0.2040mg/ ml)2ml，按2.3項(xiàng)制備成供試品溶液，按2.1項(xiàng)色譜條件測(cè)定，計(jì)算柚皮苷、橙皮苷、新橙皮苷的回收率，結(jié)果平均回收率分別為100.7%，98.3%，100.3%;RSD分別為1.41%，2.96%，2.44%。結(jié)果見表1，表2，表3。

表1 柚皮苷的確度試驗(yàn)結(jié)果

表2 橙皮苷的確度試驗(yàn)結(jié)果

表3 新橙皮苷的確度試驗(yàn)結(jié)果

2.5 樣品測(cè)定結(jié)果取7批樣品(批號(hào):120211、1202132、11101151、0100809、20120212、20120213、20120214。)。每批各6份，按2.3項(xiàng)制備成供試品溶液，按2.1項(xiàng)色譜條件測(cè)定。結(jié)果見表4。

表4 樣品含量測(cè)定結(jié)果

3 討論

3.1 采用HPLC法測(cè)定了人參健脾片中有效成分的量。參考相關(guān)文獻(xiàn)［3－7］，對(duì)甲醇－水，乙腈－磷酸水及甲醇－冰醋酸－水流動(dòng)相系統(tǒng)進(jìn)行了考察，最終采用了乙睛－水(17:83)(用磷酸調(diào)節(jié)pH至3.0)為流動(dòng)相系統(tǒng)進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，同時(shí)測(cè)定處方中柚皮苷、橙皮苷和新橙皮苷三種成分，并進(jìn)行了方法學(xué)考察，結(jié)果表明該方法簡(jiǎn)便快速，精密度、重復(fù)性、回收率良好，可作為人參健脾片的質(zhì)量控制方法。

3.2 本實(shí)驗(yàn)所用的色譜條件可使人參健脾片中的各主要色譜峰得到良好的分離，分析結(jié)果表明，經(jīng)對(duì)峰的純度光譜檢驗(yàn)，各主要成分色譜峰純度均大于95%。

3.3 中藥復(fù)方制劑廣泛用于臨床，其療效與藥材飲片的質(zhì)量及制備工藝密切相關(guān)，因此，本實(shí)驗(yàn)建立的質(zhì)量控制方法能夠更好的控制其質(zhì)量，保證人民的用藥安全。

［1］國(guó)家藥典委員會(huì).衛(wèi)生部藥品標(biāo)準(zhǔn)［M］.中藥成方制劑第十冊(cè)

［2］國(guó)家藥典委員會(huì).中華人民共和國(guó)藥典［M］.一部.北京:化學(xué)工業(yè)出版社，2010.

［3］于敏，彌宏，焦連慶.HPLC法測(cè)定人參健脾丸中橙皮苷的含量［J］.特產(chǎn)研究，2005(04):47－48.

［4］尚遠(yuǎn)宏，劉圓，田金鳳.反相高效液相色譜法測(cè)定人參健脾片中橙皮苷的含量［J］.時(shí)珍國(guó)醫(yī)國(guó)藥，2007，(05):781－782.

［5］尚遠(yuǎn)宏，劉圓，石圣洪.高效液相法測(cè)定人參健脾片中柚皮苷的含量［J］.中國(guó)實(shí)驗(yàn)方劑學(xué)雜志，2006，(10):12－13.

［6］康四和，周銳，聶晶.HPLC測(cè)定小兒消積止咳口服液中柚皮苷、橙皮苷、新橙皮苷的含量［J］.中成藥，2010(12):2088－2091.

［7］宋劍鋒，馮敬騫，胡建華，等.HPLC法同時(shí)測(cè)定常山胡柚花中柚皮苷、橙皮苷、新橙皮苷的量［J］.中草藥，2014(06):854－856.

R285.5

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1009－6019(2014)10－0324－02