陳愛金 涂斐佩

摘要：目的：探討膠乳凝集法在奧林帕斯AU2700非原裝試劑自建系統(tǒng)中測(cè)定血清胱抑素C的性能評(píng)價(jià)。方法：方法評(píng)價(jià)血清胱抑素C測(cè)定的精密度、回收率、檢測(cè)限、干擾因素、線性范圍。結(jié)果：膠乳凝集法測(cè)定血清Cys C批內(nèi)變異系數(shù)為1.52 %（低值） 、1.25 %（高值） 日間變異系數(shù)為2.73 %（低值） 、1.77 %（高值）平均回收率為97.3 % 檢測(cè)線性范圍為0.1～ 6.00 mg/L?？偰懠t素正干擾在573 mol/L，血紅蛋白負(fù)干擾6 g/L ，甘油三酯負(fù)干擾12 mmol/L以下對(duì)Cys C偏差﹤5 % 。基本不受溶血、黃疸和脂血干擾。結(jié)論：：膠乳凝集法測(cè)定血清Cys C快速、準(zhǔn)確、精密度高，可作為腎臟功能損傷的指標(biāo)。

關(guān)鍵詞：胱抑素C腎小球?yàn)V過(guò)率肌酐清除率

【中圖分類號(hào)】R453【文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼】 A【文章編號(hào)】1002-3763（2014）09-0040-01為了評(píng)價(jià)該試劑盒的性能指標(biāo)我們依據(jù)美國(guó)國(guó)家臨床實(shí)驗(yàn)室標(biāo)準(zhǔn)化委員會(huì)（NCCLS）頒發(fā)的文件對(duì)該法測(cè)定CysC進(jìn)行初步評(píng)價(jià)。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)標(biāo)本：對(duì)照組40例無(wú)心肝腎等病史男20例，女20例41～59歲。腎臟病組40例，男21例，女20例，年齡16～58歲。

1.2 儀器與方法：血清Cys C采用OLYMPUSAU2700測(cè)定血清Cys C試劑采用美國(guó)G.cell公司膠乳凝集法檢測(cè)試劑盒。主要反應(yīng)參數(shù)為血清3μl，？試劑1180μl，試劑260μl，測(cè)定波長(zhǎng)570/800nm，固定時(shí)間法正反應(yīng)讀點(diǎn)13～27。

1.2.1 方法學(xué)評(píng)價(jià)：（1）精密度取高低值2個(gè)不同水平的混合血清Cys C樣品每天測(cè)定2次（2次間隔不少于2h）每次測(cè)定均做雙份連續(xù)測(cè)定20d按NCCLS EP-5A文件進(jìn)行精密度評(píng)價(jià)；（2）線性分析取0.1mg/L和6.00mg/L的混合血清按0/4、1/3、2/2、3/1、4/0比例混合制備5個(gè)不同Cys C水平的標(biāo)本，各測(cè)定4次按NCCLS EP-6A文件進(jìn)行線性分析；（3）干擾試驗(yàn)將混合血清分成2份，1份加入1/10體積的含膽紅素5730mol/L的高總膽紅素血清，另一份不加。然后將兩標(biāo)本按照4/0、3/1、2/2、1/3、0/4比例混合成5個(gè)不同濃度，每份標(biāo)本重復(fù)測(cè)定10次，計(jì)算平均干擾值。用同樣方法加入含血紅蛋白為12g/L的溶血物和含甘油三酯為18mmol/L的脂肪乳 重復(fù)測(cè)定10次計(jì)算各自的干擾值。干擾值=各組均值-未加干擾物的各組均值。按照NCCLS EP-7文件進(jìn)行干擾試驗(yàn)評(píng)價(jià)；（4）最低檢測(cè)濃度以9g/L NaCl溶液作標(biāo)本測(cè)定21次，用x+3s計(jì)算最低檢測(cè)濃度；（5）回收率取Cys C（0.68？mg/L）樣本分別與標(biāo)準(zhǔn)Cys C溶液（0.524mg/L）等體積混合，測(cè)定混合液中Cys C含量，計(jì)算出樣本中加入標(biāo)準(zhǔn)Cys C后的測(cè)得值（回收值）以求得回收率

1.2.2 試劑和標(biāo)本的穩(wěn)定性：試劑1和2分別放入AU2700中每5天測(cè)定1次試劑空白同時(shí)測(cè)定高低質(zhì)控血清將混合血清標(biāo)本分裝后分別置于室溫4℃、-20℃定期測(cè)定Cys C濃度。

2 結(jié)果

2.1 精密度評(píng)價(jià)：采用EP-5A可以對(duì)批內(nèi)批間日間及總精密度進(jìn)行計(jì)算高低混合血清批內(nèi)精密度分別為1.25%、1.52%日間精密度分別為1.77%、2.73%

2.2 線性分析：線性范圍內(nèi)不同濃度的稀釋水平重復(fù)4次取均值本法線性回歸方程為Y=0.9966X+0.0183

r=0.9999，表明Cys C在0.1～6.0mg/L范圍內(nèi)線性良好

2.3 最低檢測(cè)濃度：21次結(jié)果中11次為0.01mg/L，8次為0mg/L，2次為0.02mg/L。x=0.0071mg/L，s=0.00644。最低檢測(cè)限為0.03mg/L。

2.4 回收率在血清：Cys C為0.68 mg/L時(shí)加入等體積濃度分別為0.5 mg/L、2 mg/L、4 mg/L。Cys C的標(biāo)準(zhǔn)液加入標(biāo)準(zhǔn)液的濃度分別為1/2原標(biāo)準(zhǔn)液濃度?；厥章史謩e為（96%.97%、99%）

2.5 干擾試驗(yàn)：總膽紅素正干擾在573mol/L血紅蛋白負(fù)干擾6g/L，甘油三酯負(fù)干擾12mmol/L以內(nèi)相對(duì)偏差﹤5%

2.6 試劑和樣本的穩(wěn)定性：試劑置4℃30d內(nèi)試劑空白保持不變，高低質(zhì)控血清變化值﹤1%，血清標(biāo)本置于室溫（25℃）6d，4℃ 12d及-20℃ 30d，血清Cys C變化≤5%

3 討論

NCCLS文件對(duì)于檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)的標(biāo)準(zhǔn)化具有重要的指導(dǎo)意義[1]，本研究全部試驗(yàn)過(guò)程使用單一批號(hào)試劑和校準(zhǔn)品。試驗(yàn)結(jié)果顯示該CysC試劑盒具有較好的精密度，批內(nèi)日間及總變異系數(shù)均﹤5%，檢測(cè)線性范圍為0.1～6.00mg/L，基本不受溶血黃疸和脂血的影響，最低檢測(cè)限0.03mg/L，平均回收率為97.3%。能夠較好地滿足臨床需要試劑在儀器倉(cāng)中開蓋長(zhǎng)達(dá)30d，無(wú)需定標(biāo)，試劑吸光度幾乎無(wú)變化。說(shuō)明本試劑膠乳包被技術(shù)穩(wěn)定液體試劑均勻一致，不會(huì)隨著時(shí)間的延長(zhǎng)出現(xiàn)膠乳沉淀的現(xiàn)象。血清標(biāo)本置4℃冷藏12d血清Cys C值基本不變，說(shuō)明樣品易于保存。本研究的方法是臨床實(shí)驗(yàn)室常規(guī)測(cè)定血清Cys C的首選方法近年來(lái)，國(guó)外對(duì)Cys C的臨床應(yīng)用報(bào)道較多，認(rèn)為其血濃度能夠較準(zhǔn)確地反映GFR[2]，Cys C可以自由通過(guò)腎小球?yàn)V過(guò)，幾乎完全在腎小管重吸收及分解代謝，因此Cys C是反映腎小球?yàn)V過(guò)率的一個(gè)非常好的標(biāo)志物。

Cys C的濃度不受炎癥反應(yīng)、惡性腫瘤、肌肉、性別及年齡等多種外界因素的影響，更證明Cys C成為優(yōu)于傳統(tǒng)的血尿素、尿酸、肌酐和內(nèi)生肌酐清除率檢測(cè)的新的腎功能評(píng)價(jià)指標(biāo)。

參考文獻(xiàn)

[1]Laverdiere M， Restieri C， Habel F. Evaluation of the in vitro activity of caspofungin against bloodstream isolates of Candida speciesfrom cancer patients：comparison of Etest and NCCLS reference methods.Int J Antimicrob Agents，2002，20：468-471

[2]Le Bricon T，Thervet E，F(xiàn)roissart M，et al.Plasma cystatin C issuperior to 24 -h creatinine clearance and plasma creatinine for estimation of glomerular filtration rate 3 months after kidney transplantation.Clin Chem，2000， 46：1206-1207