劉暉 石磊 王麟

[摘要]目的 建立母液中3-甲基黃嘌呤含量的測(cè)定方法。 方法 采用高效液相色譜法，分析柱為C18色譜柱，進(jìn)行等度洗脫，流速1.0mL/min，檢測(cè)波長(zhǎng)：273 nm，柱溫為35℃。 結(jié)果 3-甲基黃嘌呤濃度在100～800mg/L范圍內(nèi)呈良好線形關(guān)系，實(shí)驗(yàn)有較好的精密度，其RSD為0.21%。平均回收率為98.38%，RSD為0.29%。 結(jié)論 該檢測(cè)方法操作性強(qiáng)、靈敏度高、準(zhǔn)確、重復(fù)性好，可用于生產(chǎn)母液中3-甲基黃嘌呤的含量測(cè)定。

[關(guān)鍵詞]高效液相色譜法；3-甲基黃嘌呤

[中圖分類號(hào)] R917 [文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼] B [文章編號(hào)] 2095-0616（2014）07-110-03

Determination of 3-methyl xanthine by High Perfoumance Liquid Chromatography

LIU Hui1 SHI Lei2 WANG Lin2

1. CSPC Innovation Pharmaceutical Co.，Ltd.， Luancheng 051430， China； 2. Department of Pharmaceutical Engineering， Hebei Chemical and Pharmaceutical College， Shijiazhuang 050026， China

[Abstract] Objective To establish an HPLC method for determine of 3- methyl xanthine in mother liquor. Methods The chromatographic analysis was carried out using a Merck RP-18 colum at 35℃， The mobile phase was 5g/L potassium dihydrogen phosphate solution- methanol （80∶20， V/V）， at a flow rate of 1.0mL/min and UV detection at 273 nm. Results The line arrange was 100-800 mg/L， The precision is good with RSD of 0.21%.The average recovery of 3- methyl xanthine was 99.38% and RSD was 0.29%. Conclusion The method is simple， accurate and reproducible.

[Key words] High performance liquied chromatography； 3- methyl xanthine

3-甲基黃嘌呤（3- methylxanthine；結(jié)構(gòu)式見(jiàn)圖1）屬于嘌呤類化合物，在醫(yī)藥工業(yè)中是合成嘌呤類衍生物的重要醫(yī)藥中間體，如MRS 1754和DMPTX[1-3]，已酮可可堿（舒安靈）[4]，也可通過(guò)其鈉鹽的甲基化生產(chǎn)可可堿[5]、咖啡因等黃嘌呤系列產(chǎn)品；同時(shí)3-甲基黃嘌呤作為一種母核，在其他領(lǐng)域也有著較為廣泛的應(yīng)用[6-7]。

目前，全球可可堿的市場(chǎng)需求量約1000噸/年，主要由印度和中國(guó)生產(chǎn)，通過(guò)3-甲基黃嘌呤甲基化生產(chǎn)可可堿[8]，是國(guó)內(nèi)外化學(xué)合成方法生產(chǎn)可可堿的主要方式，因此作為主原料的3-甲基黃嘌呤的成本就決定了可可堿的成本。檢測(cè)母液中3-甲基黃嘌呤含量并建立回收方法可以降低企業(yè)生產(chǎn)成本，減輕環(huán)保壓力。

圖1 3-甲基黃嘌呤

企業(yè)在化學(xué)合成生產(chǎn)3-甲基黃嘌呤過(guò)程中會(huì)產(chǎn)生大量3-甲基黃嘌呤母液，母液中含有較多色素，同時(shí)由于與3-甲基黃嘌呤結(jié)構(gòu)相似、極性相近的雜質(zhì)共存于母液中，不易分離，不能使用滴定法和紫外分光光度法進(jìn)行定量分析。參閱文獻(xiàn)[9-13]，本分析方法采用液相法（外標(biāo)法），利用反相色譜柱可以快速、準(zhǔn)確測(cè)定母液中3-甲基黃嘌呤的含量。

目前，對(duì)于從生產(chǎn)母液中檢測(cè)3-甲基黃嘌呤的分析方法尚未見(jiàn)到相關(guān)報(bào)道，故該方法具有一定創(chuàng)新性。

1 實(shí)驗(yàn)部分

1.1 試樣與試劑

3-甲基黃嘌呤對(duì)照品（石藥集團(tuán)新諾威提供，純度99%）；甲醇（天津四友精細(xì)化學(xué)品公司，色譜級(jí)）；氫氧化鈉（北京化工廠，分析純），其他試劑均為分析純。

1.2 儀器與色譜條件

高效液相色譜儀（安捷倫1200系列，包括G1314型單元泵、VWD型可變波長(zhǎng)檢測(cè)器、7725i型手動(dòng)進(jìn)樣器、安捷倫1200系列工作站，美國(guó)安捷倫公司）；柱溫箱（CBL Model 100型柱溫箱，美國(guó)Photoelectron Technology公司）。

色譜柱：Agilent extend RP-C18（4.6×250 mm，5μm）；柱箱溫度：35℃；流動(dòng)相：4.5g/L；磷酸二氫鉀水溶液-甲醇 = 80∶20；檢驗(yàn)波長(zhǎng)：273nm；進(jìn)樣量：20?L。

1.3 對(duì)照溶液制備

精密稱量3-甲基黃嘌呤對(duì)照品50mg至100mL容量瓶中，并用0.2mol/L的氫氧化鈉溶液5mL溶解，然后用純化水定容至標(biāo)準(zhǔn)刻度，可以得到濃度約為500mg/L的3-甲基黃嘌呤對(duì)照液。

1.4 樣品處理

由于3-甲基黃嘌呤在堿性條件下，水溶性增加，而在酸性條件下在水中溶解度降低。所以量取一定量的3-甲基黃嘌呤母液，調(diào)節(jié)母液的pH值在8.0～8.5之間，用純化水稀釋相應(yīng)倍數(shù)并經(jīng) 0.45μm膜濾過(guò)后備用。另外，在該pH條件下 做3-甲基黃嘌呤穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)，室溫放置48h后觀察檢測(cè)，其質(zhì)量濃度和色譜純度沒(méi)有明顯變化，證明3-甲基黃嘌呤母液在該條件下穩(wěn)定并符合實(shí)驗(yàn)要求。

2 結(jié)果與討論

2.1 色譜條件的選擇

本實(shí)驗(yàn)選用4.5g/L磷酸二氫鉀水溶液-甲醇作流動(dòng)相，以4.5g/L磷酸二氫鉀水溶液-甲醇按80︰20，60︰40，50︰50比例混合后進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。發(fā)現(xiàn)當(dāng)4.5g/L磷酸二氫鉀水溶液-甲醇 =為80︰20時(shí)，3-甲基黃嘌呤的分離效果理想，保留時(shí)間在10min內(nèi)。

2.2 標(biāo)準(zhǔn)曲線

準(zhǔn)確稱取3-甲基黃嘌呤對(duì)照品100mg，置于100mL容量瓶中，用少量0.2mol/L的氫氧化鈉溶液溶解并純化水定容，搖勻。精密量取1.0，2.0，3.0，4.0，5.0，6.0，7.0，8.0mL于10mL容量瓶中，純化水稀釋定容，各取20μL進(jìn)樣測(cè)定，記錄色譜圖。以溶液質(zhì)量濃度（c）對(duì)峰面積（y）繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，得回歸方程：y=2.0228×104c+1.411 2，r=0.999 1，3-甲基黃嘌呤在100～800mg/L內(nèi)線性關(guān)系良好。

2.3 精密度實(shí)驗(yàn)

取1.3項(xiàng)下對(duì)照品溶液，每次20μL，分別重復(fù)進(jìn)樣6次，測(cè)得6個(gè)峰面積，其RSD值為 0.21%。

2.4 穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)

取相同批號(hào)的待測(cè)樣品，每1h 取樣1次，每次進(jìn)樣20 μL，共取樣8次，記錄色譜圖，其RDS 值為1.11%。說(shuō)明待測(cè)樣品在8 h內(nèi)穩(wěn)定。

2.5 回收率實(shí)驗(yàn)

精密量取同批樣品各5份（已知濃度）分別置于25mL容量瓶中，各個(gè)加入1250mg/L對(duì)照品液1、2、4、6、8mL，稀釋定容并檢測(cè)，計(jì)算平均回收率為99.52%，RSD值為0.79%。

2.6 樣品測(cè)定

按照樣品欲處理要求進(jìn)行處理后，分別吸取對(duì)照液、樣品溶液各20μL進(jìn)樣測(cè)定，3 批樣品的含量結(jié)果分別為 3120、3070、3150mg/L，其RSD 分別為 0.27%、0.31%、0.28%。

3 結(jié)論

本文基本建立了采用高效液相色譜法來(lái)測(cè)定生產(chǎn)母液中3-甲基黃嘌呤的含量，待測(cè)樣品液雖呈弱堿性，但基本在pH 8.5以下，屬于可控范圍，不影響檢測(cè)結(jié)果，由此可知樣品只需簡(jiǎn)單用0.45?m膜過(guò)濾后即可測(cè)定。但由于生產(chǎn)母液中雜質(zhì)含量較高，較大量進(jìn)樣后容易造成柱壓增高，同時(shí)考慮流動(dòng)相中的鹽溶液對(duì)色譜柱的影響，故采用流動(dòng)相—20%甲醇—60%甲醇—100%甲醇清洗色譜柱效果較好。

經(jīng)過(guò)以上實(shí)驗(yàn)，可知該檢測(cè)方法線性關(guān)系較好， 利用本方法測(cè)定樣品中3-甲基黃嘌呤的含量，該檢測(cè)方法具有較快速、簡(jiǎn)捷、靈敏度高、重復(fù)性好，適用于在3-甲基黃嘌呤生產(chǎn)及母液回收過(guò)程中含量的測(cè)定，具有一定的工業(yè)化參考價(jià)值。

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（收稿日期：2014-01-02）