曾文彤,田 英,梅雪峰,夏雨果,趙 娟,鄒四海

(1.成都中醫(yī)藥大學(xué)附屬醫(yī)院 泌尿外科，成都 610072；2.成都中醫(yī)藥大學(xué)，成都 610075)

膀胱過(guò)度活動(dòng)癥(overactive bladder,OAB)是指逼尿肌無(wú)意識(shí)收縮, 以尿急、尿頻、夜尿增多為主要特點(diǎn)，伴有或不伴急迫性尿失禁等癥狀[1]。在世界范圍內(nèi)發(fā)病率較高，且對(duì)患者生活質(zhì)量影響較大，逐漸受到國(guó)內(nèi)外學(xué)者的重視[2]。膀胱過(guò)度活動(dòng)癥可歸屬于中醫(yī)“淋證”“勞淋”范疇。絕經(jīng)后女性腎氣漸衰、天癸將竭，陰陽(yáng)失調(diào)，致膀胱氣化不利，開(kāi)闔失司，若兼情志不舒，肝氣郁結(jié)，則氣滯血瘀。故絕經(jīng)后女性更容易出現(xiàn)膀胱過(guò)度活動(dòng)癥。西醫(yī)認(rèn)為其發(fā)病原因可能與激素代謝失調(diào)等有關(guān)。絕經(jīng)后女性因卵巢功能衰竭，體內(nèi)雌激素水平缺乏，導(dǎo)致膀胱、尿道結(jié)構(gòu)發(fā)生改變，協(xié)同功能失調(diào)，尿路上皮細(xì)胞功能障礙而出現(xiàn)膀胱敏感性增高，容量減少，殘余尿量增加及逼尿肌不穩(wěn)定等尿路癥狀。補(bǔ)充雌激素是其治療的主要方法。中藥復(fù)方制劑尿暢舒膠囊具有雌激素樣作用，臨床用于治療絕經(jīng)后膀胱過(guò)度活動(dòng)癥能有效緩解患者癥狀，改善其排尿情況。本實(shí)驗(yàn)采用去卵巢方法制作大鼠雌激素缺乏模型，用尿暢舒膠囊進(jìn)行治療，觀察比較去勢(shì)雌鼠膀胱重量、膀胱壁黏膜及肌層厚度變化，研究尿暢舒膠囊對(duì)大鼠膀胱結(jié)構(gòu)的影響，從而探討尿暢舒膠囊治療絕經(jīng)后膀胱過(guò)度活動(dòng)癥的作用機(jī)制。

1 材料與方法

雌性SD大鼠30只，體質(zhì)量150～200 g，由成都達(dá)碩生物科技公司提供。隨機(jī)分為空白組、模型組、尿暢舒膠囊治療組，每組10只。適應(yīng)性飼養(yǎng)3 d后，除空白組外，其余2組大鼠均給予卵巢切除(造模參照鄧虹珠等[3]的造模方法)。造模成功后開(kāi)始給藥?？瞻捉M、模型組灌服生理鹽水1 mL/100 g,1次/d，連續(xù)4周。治療組每只灌服尿暢舒藥液1 mL/100 g(16.0 g生藥/kg體質(zhì)量)，1次/d，連續(xù)4周。所有動(dòng)物均在同一條件下用普通鼠料飼養(yǎng)，實(shí)驗(yàn)期間動(dòng)物每周稱(chēng)重1次，根據(jù)體質(zhì)量變化調(diào)整給藥量(藥品用量根據(jù)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物與人體表面積等效劑量換算)。尿暢舒膠囊由黃芪、王不留行、葛根等中藥制成，藥粉呈棕色，每粒含藥粉0.47 g(2.5 g原藥材/粒)，成都中醫(yī)藥大學(xué)附屬醫(yī)院藥劑科提供，批號(hào)121107。根據(jù)急性毒性試驗(yàn)結(jié)果、臨床用量及前期動(dòng)物實(shí)驗(yàn)，將尿暢舒膠囊內(nèi)藥粉用蒸餾水配成0.5 g/mL(1.6 g原藥材/mL)的藥液。戊巴比妥鈉[中國(guó)醫(yī)藥(集團(tuán))上?；瘜W(xué)試劑公司]；羧甲基纖維素鈉(CMC,國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司)；SARTORIUS電子分析天平，d=0.1-0.01；OLYMPUS顯微鏡；mias病理圖像采集分析系統(tǒng)；LEICA 2245切片機(jī)。

實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)測(cè)定:頸椎脫臼法處死大鼠，完整獲取大鼠膀胱組織稱(chēng)重。膀胱稱(chēng)重后，用10%的甲醛溶液固定，石蠟包埋，切片，行HE染色，光鏡觀察膀胱壁組織結(jié)構(gòu)改變，每張膀胱組織切片隨機(jī)取5處,測(cè)量膀胱黏膜及肌層厚度，求取平均值，觀察模型組和治療組的差異。

2 結(jié)果

2.1 大鼠膀胱重量的比較 參加實(shí)驗(yàn)的大鼠為30只，實(shí)驗(yàn)過(guò)程中因造模不成功剔除2只,因灌胃死亡3只，實(shí)驗(yàn)結(jié)束時(shí)大鼠保持為3組，共25只。其中空白組10只，模型組7只,尿暢舒膠囊治療組8只。每組隨機(jī)選取7只提取標(biāo)本進(jìn)行檢測(cè)。進(jìn)入統(tǒng)計(jì)分析的大鼠實(shí)際為3組，每組7只。見(jiàn)表1。

表1 大鼠膀胱重量的比較(n=7)

空白組、治療組大鼠膀胱重量均高于模型組；空白組與治療組比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)；治療組與模型組相比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。

2.2 大鼠膀胱壁黏膜及肌層厚度比較 見(jiàn)圖1、圖2。

40倍光鏡下觀察，治療組大鼠膀胱肌層厚度為(295.52±22.26)μm，模型組膀胱肌層厚度為(167.48±12.06)μm。差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。圖1 大鼠膀胱壁肌層

100倍光鏡下觀察，治療組大鼠膀胱黏膜層厚度為(28.60±4.69)μm,模型組膀胱黏膜層厚度為(22.54±4.98)μm。差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。圖2 大鼠膀胱壁黏膜

3 討論

中藥復(fù)方制劑尿暢舒膠囊由黃芪、葛根、王不留行等組成，具有益氣補(bǔ)腎、活血通淋之功。臨床用于治療女性絕經(jīng)后膀胱過(guò)度活動(dòng)癥，能夠增加患者膀胱容量，提高膀胱順應(yīng)性，降低膀胱敏感性[4]，有效緩解排尿癥狀[5]。動(dòng)物實(shí)驗(yàn)證明[6]，尿暢舒膠囊具有雌激素樣作用，大劑量用藥時(shí)能夠增加幼年小鼠子宮重量。并且能促進(jìn)體內(nèi)NO的合成,通過(guò)NO/cGMP途徑作用于下泌尿道平滑肌，發(fā)揮其雌激素樣作用[7]。

女性下泌尿道與生殖道均起源于尿生殖竇，同為雌激素依賴(lài)性器官，在發(fā)生發(fā)育過(guò)程中受著雌激素的影響[8]。雌激素缺乏后，膀胱及尿道黏膜血流供應(yīng)減少,通透性增加，繼而導(dǎo)致膀胱及尿道黏膜萎縮變??；泌尿道上皮細(xì)胞、平滑肌細(xì)胞萎縮，甚至凋亡[9];橫紋肌及血管數(shù)量相對(duì)減少，結(jié)締組織數(shù)量相對(duì)增加，尿道平滑肌彈性組織與纖維組織比例發(fā)生改變[10]。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，大鼠雙側(cè)卵巢切除后，膀胱重量減輕，膀胱肌層明顯萎縮、變薄，肌束間隙增大，纖維結(jié)締組織明顯增多，肌束排列紊亂(見(jiàn)圖1A)；膀胱黏膜層萎縮、變薄，細(xì)胞密度減小，間隙增大，排列不規(guī)整(見(jiàn)圖2A)。提示在缺乏雌激素作用下，膀胱壁結(jié)構(gòu)發(fā)生改變。陳軍等[11]認(rèn)為這可能是絕經(jīng)后女性出現(xiàn)膀胱容量減少、殘余尿量增加及逼尿肌不穩(wěn)定等尿路癥狀的結(jié)構(gòu)基礎(chǔ)。馮鳳芝等[12]研究發(fā)現(xiàn)，雌激素能改善上皮營(yíng)養(yǎng)，促進(jìn)血液循環(huán)，增加膀胱血流量，促進(jìn)組織生長(zhǎng)；可通過(guò)作用于位于膀胱、尿道的雌激素受體，促進(jìn)逼尿肌生長(zhǎng)[13]，還可刺激成纖維細(xì)胞，促進(jìn)膠原蛋白的合成，維持盆底組織的支持功能[14]。本次實(shí)驗(yàn)中，尿暢舒組較模型組大鼠膀胱重量增加，肌層增厚，肌細(xì)胞排列緊密，肌束排列較整齊，肌束間纖維結(jié)締組織較少(見(jiàn)圖1B)，黏膜層細(xì)胞排列緊密，層次清楚(見(jiàn)圖2B)。提示尿暢舒膠囊可逆轉(zhuǎn)雌激素缺乏導(dǎo)致的膀胱黏膜及平滑肌萎縮，促進(jìn)逼尿肌生長(zhǎng)，改善膀胱壁的結(jié)構(gòu)。其治療絕經(jīng)后膀胱過(guò)度活動(dòng)癥可能通過(guò)作用于泌尿道雌激素受體，發(fā)揮雌激素樣作用，修復(fù)雌激素缺乏出現(xiàn)的尿路上皮及組織損害，維持膀胱、尿道組織結(jié)構(gòu)完整及功能協(xié)調(diào)的途徑達(dá)到治療目的。

實(shí)驗(yàn)進(jìn)一步證實(shí)了尿暢舒膠囊具有雌激素樣作用，但實(shí)驗(yàn)樣本量較小，僅能初步揭示尿暢舒膠囊雌激素樣作用對(duì)膀胱結(jié)構(gòu)的影響，未能觀察膀胱壁肌層的超微結(jié)構(gòu)，未能明確尿暢舒膠囊對(duì)泌尿道肌層細(xì)胞的影響及其作用靶點(diǎn)，有待進(jìn)一步研究證實(shí)。

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