陳立忠，孫 艷，王海燕，姬艷波，孫海東

(中國人民解放軍第208醫(yī)院，長春 130062)

膝骨關節(jié)炎(osteoarthritis,OA)是一種常見的風濕性疾病，多見于中老年人，我國60歲以上人群發(fā)病率超過50%[1-2]。病因多為“腎虛血瘀”,故治以補腎活血為主[3]。現(xiàn)代藥理研究表明，補腎活血中藥不僅能降低一氧化氮水平，延緩骨關節(jié)炎的組織學改變[4]，同時有抗脂質過氧化、提高抗氧化酶活性、延緩關節(jié)軟骨退變及促進關節(jié)軟骨修復的作用[5]。經過多年的臨床實踐，我們研制了以滋陰養(yǎng)血為主的增液潤節(jié)湯。為了進一步探討其治療作用及機制，建立兔膝骨關節(jié)炎(KOA)動物早期模型,觀察其對血清超氧化物歧化酶(SOD)、關節(jié)液白介-1(IL-1)及關節(jié)軟骨病理學的影響。

1 實驗材料

健康的新西蘭大白兔38只,體質量(2.25±0.25) kg，由長春生物制品研究所提供。所有大白兔均喂養(yǎng)在恒溫、恒濕的清潔環(huán)境中，環(huán)境溫度(25±1) ℃，濕度為70%，任意進食標準飼料和飲水。仙靈骨葆膠囊(由淫羊藿、續(xù)斷、補骨脂、地黃、丹參、知母等主要成分組成，500 mg/粒，貴州同濟堂制藥有限公司，國藥準字Z20025337)。增液潤節(jié)湯(杜仲15 g，刺五加15 g，威靈仙15 g， 薟草20 g，山茱萸20 g，當歸15 g，雞血藤15 g)。試劑盒(血清SOD、關節(jié)液中IL-1):由上海博升生物科技有限公司提供。

2 實驗方法

將38只大白兔隨機正常對照組(A組)、模型組(B組)、仙靈骨葆膠囊組(C組)、增液潤節(jié)湯治療組(D組)，其中正常組8只,其余各組每組10只。除正常組外，其余3組均按照日本鬼頭康炎[6]的方法造模，造模1周后在B組中隨機抽取2只大白兔，取右膝關節(jié)做HE染色，觀察關節(jié)軟骨變化以證明造模成功。造模成功后各組動物抽取耳背動脈血2 mL及關節(jié)液20 μL備用，同時予以各組灌胃(C組：仙靈骨葆膠囊75 mg/(kg·d)，D組:增液潤節(jié)湯10 mL，A、B組分別灌等量的生理鹽水，每天2次)，連續(xù)8周，每天觀察一般狀態(tài)(精神狀態(tài)、體毛色澤、四肢活動、體質量變化等)。8周后各組動物均以栓塞法處死，取關節(jié)軟骨行組織學觀察(評分標準見表1)及采用放射性免疫吸附法檢測血清SOD(U/L)和關節(jié)液IL-1(ng/mL)的含量,結果進行統(tǒng)計學分析處理。

注：根據(jù)相關文獻的參考[7-8]，按體表面積換算與人給藥的等效劑量。

3 結果

3.1 一般狀態(tài) 實驗過程中,A組兔子體質量明顯增加，精神狀態(tài)良好，反應靈敏，動作敏捷，毛色白而光澤，二便正常，無1只死亡。B組兔子體毛干而無澤、飲食減少、自發(fā)活動明顯減少,關節(jié)活動不利， 其中1只死亡。治療組也出現(xiàn)類似表現(xiàn)，但治療后程度較輕，情況基本與A組相同。在喂藥過程中，C組死亡1只，D組死亡2只。

表1 關節(jié)軟骨組織病理學評分標準

3.2 治療前后各組血清SOD及各組關節(jié)液IL-1的含量的比較 見表2。

表2 治療前后各組血清SOD、關節(jié)液IL-1的含量

注：與A組比較，#P<0.05;與治療前比較，△P<0.05

3.3 關節(jié)軟骨組織學觀察(HE染色) A組:軟骨表面光滑、完整，四層結構清晰可辨，潮線清晰完整。軟骨細胞數(shù)量、形態(tài)、大小正常，排列整齊有序。B組:軟骨表面不完整、變薄，軟骨細胞明顯減少，部分可見簇狀增生、腫脹，或見損傷、糜爛。C組:軟骨變薄，表層不連續(xù)，軟骨細胞略腫脹，排列輕度紊亂。部分可見局部缺損，偶可見細胞簇狀增生腫脹。D組:軟骨厚度正常，細胞排列輕度紊亂，軟骨表面輕度糜爛，局部無明顯的缺損，偶可見細胞簇狀增生腫脹。

表3 各組病理評分(均數(shù)±標準差)

注：與A組比較，#P<0.05;與B組比較，△P<0.05

4 討論

膝骨關節(jié)炎的發(fā)病與肝腎二臟關系最為密切[9-10]。因軟骨無血管，營養(yǎng)的供應需從關節(jié)液中攝取，而肝腎虧虛則關節(jié)液亦減少，從而難以濡養(yǎng)軟骨而使軟骨變性或糜爛。鑒于以上觀點，經過長期的臨床研究，自創(chuàng)了增液潤節(jié)湯，此方具有滋陰養(yǎng)血、活血通絡之功效。

結果表明,增液潤節(jié)湯通過激活SOD的活性而使其含量顯著升高，催化氧自由基發(fā)生歧化反應，阻止過多氧自由基對關節(jié)軟骨的損害，保護關節(jié)軟骨，提高軟骨細胞功能，促進軟骨修復，延緩軟骨的退變。同時，增液潤節(jié)湯可減低關節(jié)液IL-1水平,說明增液潤節(jié)湯在一定程度上可減輕炎癥對關節(jié)軟骨的破壞及所產生的疼痛。另外，增液潤節(jié)湯還具有活血化瘀通絡的功效，其可能通過改善骨內微循環(huán)，降低骨內高壓，以減輕骨內高壓對軟骨的損害。

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[6]楊峰,史宗道.用木瓜蛋白酶建立兔顳頜關節(jié)骨關節(jié)炎模型的研究[J].華西口腔醫(yī)學雜志,2002,20(5):330-332.

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