缺血性腦卒中患者血清基質(zhì)金屬蛋白酶-9、超敏C 反應(yīng)蛋白水平與頸動脈粥樣硬化的相關(guān)性

朱衛(wèi)香，劉彥敏，韓亞軍，王大力

論著·臨床

缺血性腦卒中患者血清基質(zhì)金屬蛋白酶-9、超敏C 反應(yīng)蛋白水平與頸動脈粥樣硬化的相關(guān)性

朱衛(wèi)香，劉彥敏，韓亞軍，王大力

目的探討急性缺血性腦卒中患者血清基質(zhì)金屬蛋白酶-9(MMP-9)、超敏C反應(yīng)蛋白(hs-CRP)水平與頸動脈粥樣硬化的關(guān)系。方法選擇發(fā)病72 h內(nèi)的急性前循環(huán)缺血性腦卒中患者120例為觀察組，應(yīng)用彩色多普勒超聲檢查頸動脈粥樣硬化斑塊；應(yīng)用酶聯(lián)免疫法(ELISA)測定血清MMP-9、hs-CRP濃度，同時選取門診健康體檢者72例作為健康對照組。觀察組根據(jù)頸動脈斑塊的性質(zhì)分為不穩(wěn)定斑塊亞組(39例)、穩(wěn)定斑塊亞組(51例)及無斑塊亞組(30例)，將有斑塊患者根據(jù)頸動脈狹窄程度分為輕度狹窄亞組(28例)、中度狹窄亞組(45例)、重度狹窄亞組(17例)，比較各組間血清MMP-9、hs-CRP濃度的差異。結(jié)果缺血性卒中患者M(jìn)MP-9、hs-CRP水平較健康對照組明顯升高(分別為t=11.716，t=10.759，P均<0.01)。隨著頸動脈斑塊不穩(wěn)定性增加，MMP-9、hs-CRP水平升高(P均<0.01)； 隨著頸動脈狹窄程度加重，MMP-9、hs-CRP水平也升高(P均<0.01)；且缺血性卒中患者急性期血清MMP-9與hs-CRP呈顯著正相關(guān)(r=0.855,P<0.01)。結(jié)論MMP-9、hsCRP參與了急性缺血性腦卒中的發(fā)病過程，頸動脈粥樣硬化嚴(yán)重程度不同的缺血性腦卒中患者血清MMP-9、hs-CRP水平存在差異， MMP-9和hs-CRP可能是不穩(wěn)定性斑塊及缺血性腦卒中的一個潛在血清標(biāo)志物。

卒中，缺血性，急性；基質(zhì)金屬蛋白酶-9；超敏C反應(yīng)蛋白；粥樣硬化斑塊，頸動脈

頸動脈粥樣硬化是缺血性腦血管病的主要病因，與腦梗死的發(fā)生密切相關(guān)。目前動脈粥樣硬化斑塊的穩(wěn)定程度受到了更多的關(guān)注。而血清基質(zhì)金屬蛋白酶-9(matrix metalloproteinase-9，MMP-9)在一定程度上可以反映斑塊的穩(wěn)定性。超敏C-反應(yīng)蛋白(hs-CRP)作為炎性標(biāo)記物與動脈粥樣硬化斑塊的形成、發(fā)展密切相關(guān)。本研究通過對急性缺血性腦卒中患者進(jìn)行頸動脈彩色多普勒超聲檢查及血清MMP-9、hs-CRP水平的測定，觀測缺血性腦卒中患者血清MMP-9、hs-CRP水平與頸動脈粥樣硬化嚴(yán)重程度的關(guān)系。

1 資料與方法

1.1 臨床資料 2007年12月—2010年2月唐山市協(xié)和醫(yī)院和河北聯(lián)合大學(xué)附屬醫(yī)院神經(jīng)內(nèi)科診治發(fā)病72 h內(nèi)的急性前循環(huán)缺血性腦卒中患者120例(觀察組)，診斷均符合1995年中華醫(yī)學(xué)會第四屆全國腦血管病會議制定的診斷標(biāo)準(zhǔn)，并經(jīng)頭顱CT或MR證實。排除標(biāo)準(zhǔn): (1)明確的腫瘤病史、自身免疫性疾病史；(2)各種感染性疾病、1年內(nèi)患心肌梗死或進(jìn)行大手術(shù)者、非動脈粥樣硬化性腦卒中患者。120例中男67例，女53例；年齡39～82(62±10)歲；其中合并高血壓60例，冠心病40例，糖尿病42例。同時選擇門診體檢的健康者72例作為健康對照組，男33例，女39例，年齡40～81(61±11)歲。2組性別、年齡比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)，具有可比性。本研究經(jīng)醫(yī)院倫理委員會批準(zhǔn)，且患者家屬簽署知情同意書。

1.2 觀測方法

1.2.1 頸動脈超聲多普勒檢測： 采用美國ATL-HDI-5000型彩色多普勒超聲儀，探頭中心頻率7～12 MHz。檢測部位為頸總動脈遠(yuǎn)端、頸內(nèi)動脈起始部和頸動脈分叉處。頸內(nèi)動脈檢測范圍應(yīng)達(dá)4～6 cm，觀察內(nèi)膜中層厚度(IMT)、有無斑塊以及斑塊的大小、形態(tài)、性質(zhì)、管腔是否狹窄及狹窄程度。頸動脈粥樣斑塊診斷標(biāo)準(zhǔn)為頸動脈IMT≥1.2 mm，局部隆起，向管內(nèi)突出[1]。根據(jù)超聲特點將斑塊分型：(1)不穩(wěn)定斑塊：局部呈低回聲、等回聲或混合回聲的軟斑；(2)穩(wěn)定斑塊：高、強(qiáng)回聲伴或不伴聲影的硬斑。頸動脈狹窄程度: 彩色多普勒超聲儀自動計算出狹窄率,若同一血管內(nèi)存在多處斑塊或狹窄, 分析時僅考慮狹窄最嚴(yán)重的部位。(1)輕度狹窄：狹窄率<50%，灰階圖像顯示局部斑塊形成，管徑相對減小，血流無明顯變化；(2)中度狹窄：狹窄率為50%～69%，狹窄段血流出現(xiàn)加速度，狹窄遠(yuǎn)段病理性渦流形成；(3)重度狹窄：狹窄率為70%～99%，狹窄段流速進(jìn)一步升高，狹窄近段流速相對減低，遠(yuǎn)段出現(xiàn)渦流和湍流混雜的血流信號；(4)血管閉塞：血流信號消失，無血流通過。

1.2.2 實驗室檢查： 患者入院后第2天采取空腹靜脈血5 ml，靜置1～2 h后3000 r/min離心，離心10 min后，吸取血清，放入-20℃冰箱，采用ELISA法分批測定MMP-9、hs-CRP濃度。血清MMP-9的ELISA試劑盒購于上海卓康科技有限公司，血清hs-CRP的ELISA試劑盒購于美國RB公司，均按試劑說明書嚴(yán)格進(jìn)行操作。

2 結(jié) 果

2.1 MMP-9、hs-CRP濃度比較

2.1.1 2組間比較： 與健康對照組相比，觀察組的血清MMP-9、hs-CRP濃度明顯升高，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(t=11.716，t=10.759，P<0.01)。

表1 2組MMP-9、hs-CRP濃度的比較

注：對照組比較，aP<0.01

2.1.2 不同斑塊性質(zhì)比較： 將觀察組按頸動脈斑塊性質(zhì)分成3個亞組，即不穩(wěn)定斑塊亞組(39例)、穩(wěn)定斑塊亞組(51例)、無斑塊亞組(30例)，進(jìn)行方差分析，并用SNK法兩兩比較后顯示：MMP-9、hs-CRP濃度不穩(wěn)定斑塊亞組>穩(wěn)定斑塊亞組>無斑塊亞組(P均<0.01)。見表2。

表2 不同頸動脈斑塊性質(zhì)MMP-9、hs-CRP水平比較

注：與無斑塊亞組比較，aP<0.01；與穩(wěn)定斑塊亞組比較，bP<0.01

2.1.3 不同狹窄程度比較： 將觀察組頸動脈斑塊患者按頸動脈狹窄程度分成輕(28例)、中(45例)、重(17例)度狹窄3個亞組，進(jìn)行方差分析，并用SNK法兩兩比較后顯示：MMP-9、hs-CRP濃度重度狹窄亞組中度亞組>輕度亞組(P均<0.01)。見表3。

表3 不同頸動脈狹窄程度MMP-9、hs-CRP水平比較

注：與輕度狹窄亞組比較，aP<0.01；與中度狹窄亞組比較，bP<0.01

2.2 Pearson相關(guān)分析 血清MMP-9水平與斑塊不穩(wěn)定程度及狹窄程度均呈顯著正相關(guān)(分別為r=0.772、r=0.736，P均<0.01)，hs-CRP水平與斑塊不穩(wěn)定程度及狹窄程度均呈顯著正相關(guān)(分別為r=0.609、r=0.571，P均<0.01)。且缺血性卒中患者急性期血清MMP-9與hs-CRP呈顯著正相關(guān)(r=0.855,P<0.01)。

3 討 論

越來越多的證據(jù)表明動脈粥樣硬化是一種炎性疾病，炎性反應(yīng)的激活可導(dǎo)致斑塊的不穩(wěn)定。不穩(wěn)定斑塊是以脂質(zhì)為主的軟斑塊，表面有潰瘍，或斑塊內(nèi)出血或炎性反應(yīng)，易造成急性缺血性事件的發(fā)生[2]。而炎性標(biāo)志物MMP-9在動脈粥樣硬化和缺血性腦卒中中發(fā)揮重要作用[3～5]。MMP-9又稱明膠酶B，是一種糖蛋白，其主要生理功能是降解細(xì)胞外基質(zhì)，作用底物包括IV、V型明膠原。V 型明膠原是纖維帽及粥樣斑塊基底膜重要組成物質(zhì)，MMP-9 可促使V 型明膠原進(jìn)入平滑肌細(xì)胞內(nèi)，并加速動脈粥樣斑塊破裂及粥樣硬化進(jìn)程[6]。Wang 等[7]研究指出，不穩(wěn)定斑塊容易脫落或出現(xiàn)破損，從而導(dǎo)致腦血管栓塞，引起急性腦梗死。本文通過對120例急性缺血性腦卒中患者血清MMP-9 水平進(jìn)行檢測，發(fā)現(xiàn)患者血清MMP-9水平明顯高于對照組，提示MMP-9與缺血性腦卒中的發(fā)生密切相關(guān)，可能參與了急性缺血性卒中的發(fā)病過程，與國內(nèi)外的研究結(jié)果一致[8，9]。

MMP-9在粥樣硬化斑塊處的血管重構(gòu)、斑塊的不穩(wěn)定性及其破裂誘發(fā)的血管疾病都起著很重要的作用。Razuvaev等[10]研究了106例通過頸動脈內(nèi)膜剝除術(shù)(CEA)獲得的斑塊，發(fā)現(xiàn)MMP-9和MMP-7在斑塊中的表達(dá)要比正常動脈中高100倍。國內(nèi)李毅等[11]對19例腦梗死死亡患者的顱內(nèi)Wills動脈環(huán)(大腦中動脈起始段粥樣斑塊)標(biāo)本進(jìn)行研究，發(fā)現(xiàn)MMP-9在不穩(wěn)定性斑塊中的表達(dá)較在穩(wěn)定性斑塊中的表達(dá)均明顯增加，表明MMP-9是促進(jìn)動脈粥樣硬化斑塊不穩(wěn)定的重要因素。Loftus等[12]還發(fā)現(xiàn)具有頸動脈粥樣硬化斑塊并有自發(fā)性栓塞證據(jù)的患者血漿MMP-9水平明顯升高，因此認(rèn)為血漿MMP-9水平可作為反映動脈粥樣硬化斑塊不穩(wěn)定性的一個新的指標(biāo)。Konstantino等[13]提出MMP-9是斑塊不穩(wěn)定的生化標(biāo)志，可以作為降低急性心腦血管事件發(fā)生的潛在治療靶點。本結(jié)果顯示缺血性腦卒中患者隨著其頸動脈粥樣斑塊不穩(wěn)定程度的增加血清MMP-9水平明顯升高；同時還顯示隨著缺血性腦卒中患者頸動脈狹窄程度加重，血清MMP-9水平也升高，且血清MMP-9與斑塊不穩(wěn)定程度及狹窄程度呈正相關(guān)。這提示血清MMP-9水平與頸動脈粥樣硬化的嚴(yán)重程度相關(guān)，可能直接參與動脈粥樣硬化的發(fā)生、發(fā)展及繼發(fā)腦梗死，與Sapienza等[14]及Eldrup等[15]的研究結(jié)果一致。

CRP作為一種急性期蛋白，不僅是機(jī)體炎性反應(yīng)的標(biāo)志物之一，還是動脈粥樣硬化的一種典型標(biāo)志物[16，17]。尚廣芹等[18]通過免疫組化染色證實，在早期粥樣硬化動脈壁上的CRP沉積主要表達(dá)在終末補(bǔ)體復(fù)合物和泡沫細(xì)胞上，CRP可能通過激活補(bǔ)體系統(tǒng)和參與泡沫細(xì)胞形成的過程，促進(jìn)動脈粥樣硬化性損傷。hsCRP不僅是標(biāo)記炎性反應(yīng)的相關(guān)敏感指標(biāo)，其含量可反映動脈粥樣斑塊內(nèi)炎性反應(yīng)強(qiáng)度[19]。本結(jié)果發(fā)現(xiàn)缺血性腦卒中患者隨著其頸動脈粥樣斑塊不穩(wěn)定程度的增加血清hs-CRP水平明顯升高；同時還顯示隨著缺血性卒中患者頸動脈狹窄程度增加，血清hs-CRP水平也越高。這提示血清hs-CRP水平與頸動脈粥樣硬化的嚴(yán)重程度密切相關(guān)，因此hs-CRP除了作為炎性標(biāo)記物外，還是不穩(wěn)定性動脈粥樣硬化發(fā)生的危險信號。

本結(jié)果還發(fā)現(xiàn)腦卒中患者急性期血清MMP-9與hs-CRP水平呈顯著正相關(guān)，而這恰好反映了體內(nèi)炎性反應(yīng)的程度，MMP-9與hs-CRP互相影響以促進(jìn)腦卒中的發(fā)生、發(fā)展。因此MMP-9與hs-CRP作為頸動脈粥樣硬化斑塊形成的危險因素之一不僅反映了動脈粥樣硬化的活躍狀態(tài)， 而且MMP-9、hs-CRP水平增高是導(dǎo)致斑塊不穩(wěn)定并形成血栓的原因。因此監(jiān)測血清MMP-9、hs-CRP水平有可能及早發(fā)現(xiàn)不穩(wěn)定性斑塊，及時采取干預(yù)措施穩(wěn)定斑塊，從而降低缺血性腦卒中的發(fā)病率。

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RelationshipbetweenlevelsofserumMMP-9,hs-CRPandcarotidatherosclerosisinischemicstroke

ZHUWeixiang*,LIUYanmin,HANYajun，WANGDali.

*DepartmentofNeurology,TangshanXieheHospital,Tangshan063004,China

ObjectiveTo investigate the relationship among serum matrix metalloproteinase-9 (MMP-9), high sensitive C reactive protein (hs-CRP) level and carotid atherosclerosis in acute cerebral ischemic patients.MethodsOne hundred and twenty cases of onset within 72 h acute anterior circulation ischemic stroke were enrolled as the observation group, ultrasound examination of carotid atherosclerotic plaque by color Doppler were performed; using enzyme linked immunosorbent assay (ELISA) to determine the serum MMP-9, hs-CRP concentrations, and selected 72 healthy patient as healthy control group. According to the property of carotid plaque, the observation group is divided into unstable plaque sub group (39 cases), stable plaque sub group (51 cases) and non-plaque sub group (30 cases), according to the degree of carotid artery stenosis, they were divided into mild narrow sub group (28 cases), moderate stenosis sub group (45 cases) and severe narrow sub group (17 cases), the difference of serum MMP-9, hs-CRP concentrations were compared among these groups.ResultsThe ischemic stroke patients’ MMP-9, hs-CRP were higher than the healthy control group (t=11.716,t=10.759, respectively,P<0.01). With the increase of carotid artery plaque instability, MMP-9, hs-CRP levels were increased (P<0.01); along with the degree of carotid artery stenosis aggravates, MMP-9, hs-CRP levels were also elevated (P<0.01); and the acute phase of ischemic stroke patients’ serum MMP-9 were positive correlated with hs-CRP (r=0.855,P<0.01).ConclusionMMP-9 and hs-CRP are involved in the pathogenesis of acute ischemic stroke, different carotid atherosclerosis severity related to different serum MMP9 and hs-CRP level, MMP-9 and hs-CRP may be a potential biomarker for instabilities of plaque and ischemic stroke.

Stroke,ischemic,acute; Matrix metalloproteinase-9; High sensitive C reactive protein ; Atherosclerosis plaque; Carotid artery

063004 唐山市協(xié)和醫(yī)院神經(jīng)內(nèi)科二病區(qū)(朱衛(wèi)香、韓亞軍)； 063500 河北省灤南縣醫(yī)院神經(jīng)內(nèi)科(劉彥敏)； 063000 河北聯(lián)合大學(xué)附屬醫(yī)院神經(jīng)內(nèi)科(王大力)

10.3969 / j.issn.1671-6450.2014.11.004

2014-08-14)