血清pro-hepcidin水平與類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎貧血、 疾病活動(dòng)指標(biāo)的相關(guān)性

曾婷，宋超英，陸靜忠

論著·臨床

血清pro-hepcidin水平與類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎貧血、 疾病活動(dòng)指標(biāo)的相關(guān)性

曾婷，宋超英，陸靜忠

目的檢測(cè)類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎(RA)患者血清中pro-hepcidin水平，探討其與RA患者貧血、疾病活動(dòng)度之間的相關(guān)性。方法收集50例RA患者為RA患者組，50例健康體檢者為健康對(duì)照組，RA患者疾病活動(dòng)度通過(guò)疾病活動(dòng)度積分表28(DAS28)評(píng)估。檢測(cè)受試者的血紅蛋白、血清鐵、結(jié)合鐵、鐵蛋白、紅細(xì)胞沉降率(ESR)、C-反應(yīng)蛋白(CRP)、類風(fēng)濕因子滴度和抗環(huán)瓜氨酸肽抗體(抗CCP抗體)滴度、血清pro-hepcidin水平，并比較組間差異及進(jìn)行相關(guān)性研究。結(jié)果RA患者組血紅蛋白、血清鐵顯著低于健康對(duì)照組，而ESR、CRP類風(fēng)濕因子、抗CCP抗體、鐵蛋白、pro-hepcidin水平顯著高于健康對(duì)照組(P<0.01)，且RA患者活動(dòng)亞組(DAS28>5.1分)血清中鐵蛋白、CRP、ESR、pro-hepcidin水平顯著高于不活動(dòng)亞組(DAS28≤5.1分)(P<0.05)。pro-hepcidin水平和RA疾病活動(dòng)指標(biāo)如DAS28、關(guān)節(jié)腫痛數(shù)、ESR和CRP、鐵蛋白均呈正相關(guān)(r=0.596、0.406、0.502、0.567、0.420，P<0.05，P<0.01)。而血清中pro-hepcidin水平在RA伴和不伴貧血患者中無(wú)明顯差異。結(jié)論RA患者血清中pro-hepcidin水平可反映疾病活動(dòng)度，臨床上pro-hepcidin有望作為判斷RA患者疾病活動(dòng)度的另一標(biāo)志。

類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎；Pro-hepcidin；貧血

類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎(RA)是一種慢性自身免疫性疾病，以關(guān)節(jié)滑膜炎性反應(yīng)為特征，滑膜炎的持久反復(fù)發(fā)作，引起關(guān)節(jié)軟骨及骨質(zhì)的破壞，最終導(dǎo)致關(guān)節(jié)畸形及功能障礙。貧血是類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎關(guān)節(jié)外最常見(jiàn)的表現(xiàn)之一，類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎患者貧血發(fā)生率為26.9%～77.6%。類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎患者發(fā)生貧血主要為慢性炎性反應(yīng)所致，多為正細(xì)胞正色素性貧血，這與血清鐵和總鐵結(jié)合力下降有關(guān)，但是儲(chǔ)存鐵卻是正?；蛏叩腫1]。近年研究發(fā)現(xiàn)，主要在肝細(xì)胞中合成的小分子肽hepcidin具有獨(dú)特的抗微生物活性和調(diào)節(jié)體內(nèi)鐵代謝平衡的作用，通過(guò)干擾鐵從腸道的吸收和從巨噬細(xì)胞的釋放，從而調(diào)節(jié)腸道鐵的吸收、循環(huán)利用和儲(chǔ)存，hepcidin除了在體內(nèi)鐵的調(diào)節(jié)中起重要作用，也與炎性反應(yīng)和感染有著密切的關(guān)系[2]。由于血清中hepcidin檢測(cè)較為困難，近年國(guó)外有報(bào)道探討類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎患者h(yuǎn)epcidin前體物質(zhì)pro-hepcidin水平與疾病活動(dòng)的相關(guān)性，但是其結(jié)果不一，而國(guó)內(nèi)尚無(wú)相關(guān)研究報(bào)道。本項(xiàng)目擬通過(guò)檢測(cè)類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎患者血清中pro-hepcidin水平，以及其與類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎患者貧血、疾病活動(dòng)度之間的相關(guān)性，試圖探討pro-hepcidin在類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎疾病發(fā)生及活動(dòng)中的作用。

1 資料與方法

1.1 臨床資料 收集本院門診及住院部就診的類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎患者50例為RA患者組，均符合美國(guó)風(fēng)濕病學(xué)會(huì)1987年提出的類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎分類標(biāo)準(zhǔn)[3]，無(wú)急性、慢性感染及嚴(yán)重心、肝、肺、腎疾病，無(wú)外傷、手術(shù)、失血性疾病、腫瘤及骨髓造血異常，近3個(gè)月未接受輸血、鐵劑、促紅細(xì)胞生成素治療。其中男4例，女46例，年齡(48.8±16.7)歲，病程(54.5±87.4)月，晨僵(66.8±76.6)min，腫痛關(guān)節(jié)數(shù)(8.4±5.3)個(gè)， RF陽(yáng)性37例(74.0%)，抗環(huán)瓜氨酸肽抗體(抗CCP抗體)陽(yáng)性42例(84.0%)，疾病活動(dòng)度積分表28(disease activity score 28，DAS28)(4.24±2.28)分。根據(jù)DAS28積分又將RA組患者分為2個(gè)亞組：DAS28≤5.1分為不活動(dòng)亞組(n=32)，DAS28>5.1分為活動(dòng)亞組(n=18)。并同時(shí)收集本院體檢中心與本研究中性別、年齡匹配的健康體檢者50例作為健康對(duì)照組，其中男5例，女45例，年齡(40.2±18.9)歲。入選者均知情同意并簽署知情同意書。

1.2 檢測(cè)指標(biāo)與方法 所有研究對(duì)象抽血前一晚開(kāi)始禁食8～10 h，第2天清晨空腹安靜狀態(tài)下采肘靜脈血8 ml，均完成以下實(shí)驗(yàn)室項(xiàng)目檢測(cè)：血紅蛋白、血清鐵、結(jié)合鐵、鐵蛋白、紅細(xì)胞沉降率(ESR)、C反應(yīng)蛋白(CRP)、類風(fēng)濕因子滴度和抗CCP抗體滴度，以上檢測(cè)項(xiàng)目均由本院檢驗(yàn)科檢測(cè)。血紅蛋白、CRP的檢測(cè)分別使用Beckman-Coulter公司生產(chǎn)的全自動(dòng)血細(xì)胞計(jì)數(shù)儀, ESR檢測(cè)采用魏氏法, 抗CCP抗體、類風(fēng)濕因子采用酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)方法檢查(歐蒙試劑盒)。采用雙抗體一步夾心法酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法(enzyme-linked immunosorbent assay，ELISA)試劑盒(德國(guó)DRG公司)檢測(cè)患者和正常對(duì)照血清標(biāo)本中pro-hepcidin水平；所有標(biāo)本均設(shè)復(fù)孔，嚴(yán)格按照說(shuō)明書步驟進(jìn)行操作，測(cè)定吸光度，然后再根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算血清中pro-hepcidin水平。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS 18.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。計(jì)量資料均采用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表示，比較分析采用t檢驗(yàn)或方差分析。pro-hepcidin與各指標(biāo)之間的相關(guān)性分析采用Pearson或Spearman相關(guān)分析。P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié) 果

2.1 2組研究對(duì)象實(shí)驗(yàn)室檢查指標(biāo)比較 RA患者組血紅蛋白、血清鐵明顯低于健康對(duì)照組(P<0.05)，而RA患者組鐵蛋白、ESR、CRP、類風(fēng)濕因子、抗CCP抗體pro-hepcidin水平明顯高于健康對(duì)照組(P<0.05)。見(jiàn)表1。

表1 RA患者組及健康對(duì)照組各項(xiàng)指標(biāo)比較

2.2 RA患者2個(gè)亞組間各檢測(cè)指標(biāo)比較 活動(dòng)亞組和不活動(dòng)亞組相比，血紅蛋白、血清鐵、結(jié)合鐵水平差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，而相較于不活動(dòng)亞組，活動(dòng)亞組患者炎性相關(guān)指標(biāo)鐵蛋白、CRP、ESR pro-hepcidin水平均顯著升高(P<0.05，P<0.01)。見(jiàn)表2。RA患者伴貧血和不伴貧血患者血清pro-hepcidin水平分別為(309.6±105.1)ng/ml和(298.0±88.9)ng/ml，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.26)。

2.3 RA患者pro-hepcidin水平與其他指標(biāo)間的相關(guān)性 通過(guò)Pearson相關(guān)分析研究，RA患者血清pro-hepcidin水平和RA疾病活動(dòng)指標(biāo)如DAS28、關(guān)節(jié)腫痛數(shù)、ESR、CRP和鐵蛋白均呈正相關(guān)(P<0.05，P<0.01)。見(jiàn)表3。

表2 RA患者2個(gè)亞組間各指標(biāo)比較

表3 RA患者pro-hepcidin和其他參數(shù)間的相關(guān)性分析

3 討 論

hepcidin是一種由25個(gè)氨基酸組成的多肽類激素，在肝細(xì)胞中合成，干擾鐵從腸道的吸收和從巨噬細(xì)胞的釋放，從而調(diào)節(jié)腸道鐵的吸收、循環(huán)利用和儲(chǔ)存, 體內(nèi)鐵負(fù)荷、炎性因子和紅細(xì)胞生成等都是調(diào)節(jié)hepcidin合成的重要因素。hepcidin除了在體內(nèi)鐵的調(diào)節(jié)中起重要作用，也與炎性反應(yīng)和感染有著密切的關(guān)系[2，4]。體內(nèi)的炎性因子IL-6、TNF-α和IL-1β等不僅可以促進(jìn)hepcidin的合成，而且可以上調(diào)hepcidin在鐵代謝所起的作用，比如抑制腸道鐵吸收、促進(jìn)巨噬細(xì)胞對(duì)鐵的螯合作用，從而造成體內(nèi)鐵缺乏[5]。上述機(jī)制在包括類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎和系統(tǒng)性紅斑狼瘡的慢性炎性貧血中起了重要作用。目前用于人hepcidin研究的方法有限，且hepcidin分子較小、以及結(jié)構(gòu)和序列的原因，難于獲得特異性單克隆抗體，因此，基于單克隆抗體的常用臨床檢測(cè)方法極為有限，目前尚難于推廣應(yīng)用。基于hepcidin前體物質(zhì)pro-hepcidin已有成熟的ELISA法可檢測(cè)，因此我們采用檢測(cè)pro-hepcidin水平進(jìn)行研究。

國(guó)內(nèi)外已有較多研究表明pro-hepcidin在慢性貧血、肝硬化、腎功能衰竭、系統(tǒng)性紅斑狼瘡及其他慢性炎性疾病的發(fā)病中起了重要作用[6，7]。近年國(guó)外有報(bào)道探討類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎患者pro-hepcidin水平與疾病活動(dòng)的相關(guān)性，但是其結(jié)果目前仍缺乏一致性[8～10]，國(guó)內(nèi)尚無(wú)相關(guān)研究報(bào)道。本研究表明，RA患者血清中pro-hepcidin水平顯著高于健康對(duì)照組，且根據(jù)患者疾病活動(dòng)度將患者分為DAS28≤5.1分和DAS28>5.1分2個(gè)亞組，DAS28積分越高提示疾病活動(dòng)度越高，2組對(duì)比后發(fā)現(xiàn)RA患者活動(dòng)亞組血清中pro-hepcidin水平顯著高于不活動(dòng)亞組，提示RA患者血清中pro-hepcidin水平和疾病活動(dòng)度密切相關(guān)。

本研究通過(guò)進(jìn)一步研究表明pro-hepcidin水平和RA疾病活動(dòng)指標(biāo)如DAS28、關(guān)節(jié)腫痛數(shù)、ESR和CRP呈正相關(guān)，這和Kim等[8]研究結(jié)果一致。而Koca等[9]研究發(fā)現(xiàn)RA患者血清中pro-hepcidin水平雖高于正常對(duì)照，但pro-hepcidin水平和DAS28無(wú)明顯相關(guān)性。已有證據(jù)表明炎性因子特別是IL-6可以刺激hepeidin mRNA合成[11]。Kim等[8]研究表明RA患者血清pro-hepcidin水平和IL-6、TNF-α和IL-1β水平呈正相關(guān)，而IL-6、TNF-α和IL-1β作為炎性因子在RA的發(fā)病過(guò)程中起的作用已得到普遍認(rèn)識(shí)，且針對(duì)上述炎性因子的靶向治療藥物在臨床已得到廣泛應(yīng)用[12]。以上提示pro-hepcidin可像ESR、CRP、腫痛關(guān)節(jié)數(shù)、炎性因子等一樣作為判斷RA患者疾病活動(dòng)度的另一指標(biāo)。

Demirag等[10]研究表明RA伴貧血患者血清中hepcidin水平明顯高于單純?nèi)辫F性貧血患者組及對(duì)照組，RA伴貧血患者和RA無(wú)貧血患者之間hepcidin水平無(wú)明顯差異，進(jìn)一步研究發(fā)現(xiàn)RA伴貧血患者中有鐵缺乏者血清中hepcidin水平明顯高于RA無(wú)貧血患者，提示hepcidin在RA患者貧血的發(fā)病機(jī)制中發(fā)揮了重要作用。另一方面，亦有研究表明RA患者血清中pro-hepcidin水平和貧血指標(biāo)無(wú)明顯相關(guān)性。另有觀點(diǎn)認(rèn)為hepcidin主要影響鐵代謝過(guò)程，而pro-hepcidin主要通過(guò)炎性反應(yīng)過(guò)程發(fā)揮其作用[8]，其中更明確的作用機(jī)制還有待進(jìn)一步研究。本研究通過(guò)比較發(fā)現(xiàn)血清中pro-hepcidin水平在RA伴和不伴貧血患者中無(wú)明顯差異。我們推測(cè)血清中pro-hepcidin并不能代表有活性的hepcidin，而pro-hepcidin水平并不能影響貧血相關(guān)性指標(biāo)也支持這一推測(cè)[13]。

綜上所述，我們通過(guò)研究發(fā)現(xiàn)hepcidin 或pro-hepcidin因其和貧血、炎性因子密切相關(guān)性，使其在RA及其伴發(fā)的慢性貧血的發(fā)病過(guò)程中起了重要作用，臨床上pro-hepcidin有望作為判斷RA患者疾病活動(dòng)度的另一標(biāo)志。

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Associationofthelevelofserumpro-hepcidinandrheumatoidarthritis

ZENGTing,SONGChaoying,LUJingzhong.

DepartmentofInternalMedicine,ChongmingBranch,XinhuaHospital,MedicalSchoolofShanghaiJiaotongUniversity,Shanghai202150,China

SONGChaoying,E-mail:songys2005@126.com

ObjectiveTo detect the level of serum pro-hepcidin levels in the rheumatoid arthritis (RA) patients, and to explore its correlation with disease activity and anemia.MethodsFifty cases of RA patients as RA group, 50 healthy people as healthy control group, disease activity in patients with RA was assessed by disease activity score table 28 (DAS28). Detected the participants of hemoglobin, serum iron, ferritin, iron binding, erythrocyte sedimentation rate (ESR), C-reactive protein (CRP), titers of rheumatoid factor and anti-cyclic citrullinated peptide antibody titer, serum pro-hepcidin level, and compared the difference between groups.ResultsThe hemoglobin, serum iron RA group was significantly lower than that of healthy control group, while ESR, CRP, anti CCP antibody and rheumatoid factor, ferritin, pro hepcidin levels were significantly higher than that in healthy control group (P<0.01), and RA active sub group (DAS28>5.1)’s serum ferritin,CRP, ESR, pro-hepcidin levels were significantly higher than those of inactive sub group (DAS28≤5.1) (P<0.05). Pro-hepcidin levels and RA disease activity index such as DAS28, ESR and CRP, the number of joint pains, ferritin were positively correlated (r=0.596,r=0.406,r=0.502,r=0.567,r=0.420,P<0.05，P<0.01).Serum pro-hepcidin level in RA patients with and without anemia revealed no obvious difference.ConclusionRA patients’ serum pro-hepcidin level can reflect disease activity, pro-hepcidin is expected as a biomarker for disease activity in patients with RA.

Rheumatoid arthritis ; Pro-hepcidin; Anemia

崇明縣衛(wèi)生局科研項(xiàng)目(No.CW2013-02)

202150 上海交通大學(xué)醫(yī)學(xué)院附屬新華醫(yī)院崇明分院血液內(nèi)科

宋超英，E-mail:songys2005@126.com

10.3969 / j.issn.1671-6450.2014.11.009

2014-08-09)