郭淑芹 康軍朋 張金庫(kù) 周炳娟 趙文明 劉倩茹 張?jiān)屏?/p>

·論著·

結(jié)直腸癌組織中IGFBP-3和P53的表達(dá)及臨床意義

郭淑芹 康軍朋 張金庫(kù) 周炳娟 趙文明 劉倩茹 張?jiān)屏?/p>

目的探討胰島素樣生長(zhǎng)因子結(jié)合蛋白3(IGFBP-3)、P53在結(jié)直腸癌發(fā)生發(fā)展中的作用。方法應(yīng)用免疫組化 SP法檢測(cè)IGFBP-3、P53在138例結(jié)直腸癌和69例正常結(jié)直腸黏膜中的表達(dá)情況。結(jié)果IGFBP-3在CRC中的陽(yáng)性率顯著低于對(duì)照組(P<0.05)，P53在CRC中的陽(yáng)性率顯著高于對(duì)照組(P<0.01)；IGFBP-3在CRC中的表達(dá)與組織學(xué)分級(jí)、TNM分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的表達(dá)有關(guān)(P>0.05)；P53在CRC中的表達(dá)與結(jié)直腸癌TNM分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移有關(guān)(P>0.05)，二者與其他因素均無(wú)關(guān)(P>0.05)。IGFBP-3與P53的表達(dá)呈負(fù)相關(guān)性(r=-0.27，P<0.01)。結(jié)論IGFBP-3與P53可能均參與了CRC的侵襲、轉(zhuǎn)移過(guò)程，且二者起到了協(xié)同作用，聯(lián)合檢測(cè)二者在CRC中表達(dá)對(duì)預(yù)測(cè)預(yù)后具有重要意義。

結(jié)直腸癌；胰島素樣生長(zhǎng)因子結(jié)合蛋白3；P53；免疫組織化學(xué)

結(jié)直腸癌(CRC)作為消化道最常見(jiàn)的惡性腫瘤，其發(fā)病率逐年升高，目前已居我國(guó)惡性腫瘤發(fā)病率的第3位，病死率第5位，在歐美一些發(fā)達(dá)國(guó)家發(fā)病率已上升至第2位[1]。其5年生存率長(zhǎng)期以來(lái)并沒(méi)有明顯提升，一方面與其侵襲轉(zhuǎn)移率高有關(guān)，另外還與放化療耐受的出現(xiàn)密切相關(guān)。研究顯示胰島素樣生長(zhǎng)因子系統(tǒng)(insulin-like growth factor system，IGFs)介導(dǎo)的異常信號(hào)傳導(dǎo)與多種惡性腫瘤的細(xì)胞轉(zhuǎn)化和轉(zhuǎn)移有關(guān)，其中包括CRC，胰島素樣生長(zhǎng)因子結(jié)合蛋白3(insulin-like growth factor binding protein,IGFBP-3)是這個(gè)異常信號(hào)通路中一個(gè)重要的調(diào)節(jié)因子[2]。本研究通過(guò)聯(lián)合檢測(cè)IGFBP-3和P53 在CRC中的表達(dá)，探討二者與CRC發(fā)生發(fā)展的關(guān)系，以期為臨床CRC的診斷和治療CRC提供新線索。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取保定市第一中心醫(yī)院2007至2012年期間所有臨床病理資料完整的結(jié)直腸癌石蠟包埋組織，全部病例均經(jīng)外科手術(shù)切除后送檢病理檢查，證實(shí)為原發(fā)性結(jié)直腸癌，術(shù)前均未行任何抗癌治療，共計(jì)138例，隨機(jī)篩選69例取其癌旁正常組織(距離腫瘤至少5 cm經(jīng)鏡下病理證實(shí)未被腫瘤細(xì)胞侵及的正常結(jié)直腸黏膜組織)作為對(duì)照組。本組男72例，女66例；年齡27～85歲，中位年齡55.9歲；結(jié)腸67例，直腸71例；結(jié)直腸癌TNM分期參考 AJCC/UICC分期系統(tǒng)第七版標(biāo)準(zhǔn)。

1.2 試劑與方法 試劑：兔抗人IGFBP-3多克隆抗體，工作濃度為1∶80，鼠抗人P53單克隆抗體，劑用型，二抗為快捷型酶標(biāo)羊抗鼠/兔IgG聚合物，免疫組化檢測(cè)試劑盒、濃縮型DAB試劑盒均購(gòu)自福建邁新生物技術(shù)有限公司。方法：采用免疫組化SP法，參照試劑盒說(shuō)明操作，以磷酸鹽緩沖液組代替一抗為陰性對(duì)照組，已知陽(yáng)性切片為陽(yáng)性對(duì)照，光鏡下觀察染色結(jié)果。

1.3 結(jié)果判定 IGFBP-3陽(yáng)性表達(dá)定位于細(xì)胞質(zhì)，呈黃色-棕黃色-棕褐色顆粒；P53陽(yáng)性表達(dá)定位于細(xì)胞核，呈黃色或黃褐色顆粒。每張切片隨機(jī)選取5個(gè)視野,每個(gè)視野計(jì)數(shù)200個(gè)細(xì)胞，取平均值；兩者均采用半定量積分法,分別評(píng)估陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)和染色強(qiáng)度,總分為兩者之積，陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)<5%為0分,6%～25%為1分,26%～50%為2分,51%～75%為3分,>75%為4分；染色強(qiáng)度,淡黃色為l分,棕黃色為2分,棕褐色為3分；總分0分為陰性(-),1～4分為弱陽(yáng)性(+),5～8分為陽(yáng)性(++),9～12分為強(qiáng)陽(yáng)性(+++),將陰性和弱陽(yáng)性視為陰性表達(dá),陽(yáng)性和強(qiáng)陽(yáng)性視為陽(yáng)性表達(dá)。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析 應(yīng)用SPSS 17.0統(tǒng)計(jì)軟件，計(jì)數(shù)資料采用χ2檢驗(yàn)或Fisher確切概率法，相關(guān)性采用Spearman相關(guān)分析，P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 IGFBP-3、P53在CRC組與對(duì)照組中的表達(dá)情況 IGFBP-3陽(yáng)性著色于細(xì)胞質(zhì)，呈黃色-棕褐色顆粒，P53陽(yáng)性著色于細(xì)胞核，呈黃色或黃褐色顆粒。138例CRC中IGFBP-3、P53陽(yáng)性率分別為76.8%(106/138)、53.6%(74/138)，69例正常結(jié)直腸黏膜組織中IGFBP-3、P53陽(yáng)性率分別為91.3%(63/69)、2.9%(2/69)，2組比較差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。見(jiàn)圖1、2。

圖1 IGFBP?3在CRC中呈陽(yáng)性表達(dá)(SP×100)

圖2 P53在CRC中呈陽(yáng)性表達(dá)(SP×100)

2.2 IGFBP-3、P53的表達(dá)與CRC臨床病理特征的關(guān)系 結(jié)直腸癌中IGFBP-3與腫瘤的組織學(xué)分級(jí)、TNM分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān)(P>0.05)；P53與TNM分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移有關(guān)(P>0.05)，兩者均與年齡、性別、腫瘤大小、部位、浸潤(rùn)深度等其他因素?zé)o明顯相關(guān)(P>0.05)。見(jiàn)表1。

表1 CRC中IGFBP-3和P53的表達(dá)情況及與臨床病理指標(biāo)的關(guān)系 例

注：* 數(shù)據(jù)經(jīng)Fisher確切概率法計(jì)算，故前無(wú)χ2值

2.3 CRC中IGFBP-3 與P53的表達(dá)及其相關(guān)關(guān)系 IGFBP-3陽(yáng)性表達(dá)106例中，P53陽(yáng)性表達(dá)率為46.2%(49/106)，IGFBP-3陰性表達(dá)32例中，P53陽(yáng)性率為 78.1%(25/32)，兩者差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，IGFBP-3表達(dá)與P53的表達(dá)呈負(fù)相關(guān)性(r=-0.27，P<0.01)。

3 討論

CRC患者晚期轉(zhuǎn)移率明顯升高，導(dǎo)致治療難度的加大，研究發(fā)現(xiàn)這除與P53的保護(hù)作用減弱有關(guān)外，還與IGFs誘導(dǎo)的異常信號(hào)通路關(guān)系密切。IGFs信號(hào)途徑主要通過(guò)高表達(dá)的配體(主要是IGF-1)與受體(IGF-1R)結(jié)合實(shí)現(xiàn)，當(dāng)IGF-1R與配體結(jié)合后，會(huì)激活MAPK和PI3K-AKT兩條信號(hào)傳導(dǎo)通路，進(jìn)而誘導(dǎo)細(xì)胞過(guò)度增殖、分化和凋亡抑制，導(dǎo)致腫瘤的發(fā)生[3,4]。IGFBP-3能結(jié)合循環(huán)中絕大部分IGF-1以合成復(fù)合物的形式使其以失活狀態(tài)存在，從而直接抑制由IGF-1誘導(dǎo)的異常信號(hào)通路，研究發(fā)現(xiàn)初次之外，IGFBP-3還能不依賴IGF-1機(jī)制而發(fā)揮直接抑制細(xì)胞生長(zhǎng)、誘導(dǎo)其凋亡的作用，并發(fā)現(xiàn)這種非依賴機(jī)制的調(diào)節(jié)作用與P53的介導(dǎo)有關(guān)[5,6]。

P53基因是人類(lèi)最為重要的抑癌基因之一，定位于人類(lèi)染色體17q13區(qū)帶，分為野生型和突變型兩種類(lèi)型。正常情況下野生型P53參與細(xì)胞周期的調(diào)控，對(duì)G1/S期和G2/M 期點(diǎn)進(jìn)行檢查矯正，當(dāng)DNA損傷時(shí)，會(huì)迫使細(xì)胞停留于G0/G1期進(jìn)行修復(fù)過(guò)程，修復(fù)失敗則啟動(dòng)程序性細(xì)胞凋亡程序，維持機(jī)體的平衡狀態(tài)。當(dāng)機(jī)體受某些致癌因素刺激致P53基因發(fā)生突變后，就會(huì)對(duì)細(xì)胞分裂、增殖的負(fù)向調(diào)控作用喪失，而某些癌基因如RAS基因得以激活，使細(xì)胞的惡性轉(zhuǎn)化能力和侵襲性增強(qiáng)，導(dǎo)致腫瘤的發(fā)生[7,8]。野生型P53由于半衰期短在組織細(xì)胞中含量極少，故免疫組化檢測(cè)到的是因突變而半衰期延長(zhǎng)的突變型P53。國(guó)內(nèi)外文獻(xiàn)結(jié)果顯示P53陽(yáng)性表達(dá)率在40.8%～100%，本組研究結(jié)果顯示P53陽(yáng)性率為53.6%顯著高于正常結(jié)直腸黏膜，這與國(guó)內(nèi)某些小樣本研究結(jié)果相接近[8,9]，而與某些研究存在差異[10]，與臨床病理特征的關(guān)系，國(guó)內(nèi)外研究也存在著較大爭(zhēng)議[8-10]。鄭勇等[9]研究顯示，P53在CRC中呈高表達(dá)，但僅與分化程度有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，與其他臨床特征無(wú)關(guān)。而葉斌等[8]應(yīng)用免疫組化對(duì)71例CRC患者的研究結(jié)果顯示，P53不僅在CRC中高表達(dá)，且與腫瘤的分化程度、TNM分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和浸潤(rùn)深度均有關(guān)。Lam等[10]對(duì)188例CRC的研究結(jié)果表明，P53還與患者生存期明顯相關(guān)性。本研究結(jié)果顯示，P53與CRC的TNM分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移有關(guān)，這與國(guó)內(nèi)外大多數(shù)研究結(jié)果相一致。研究表明，P53與CRC的生物學(xué)行為密切相關(guān)，可能促進(jìn)了惡性腫瘤在CRC中的侵襲和轉(zhuǎn)移。

目前尚未見(jiàn)關(guān)于IGFBP-3在CRC中的表達(dá)的報(bào)道，Torng等[11]對(duì)卵巢子宮內(nèi)膜癌的研究結(jié)果顯示，IGFBP-3的低表達(dá)與較高的腫瘤病理分級(jí)有著顯著性差異，而IGFBP-3的高表達(dá)則能有效的抑制細(xì)胞遷移、侵襲和轉(zhuǎn)移，而絲毫不影響細(xì)胞增殖。而Soubry等[12]最通過(guò)對(duì)血液循環(huán)中IGF-1的濃度和IGF-1/IGFBP-3的測(cè)定發(fā)現(xiàn)，IGFBP-3的低表達(dá)與大腸腺瘤存在著正相關(guān)關(guān)系，大腸腺瘤作為癌前病變，提示二者的升高可能增加了CRC的發(fā)生風(fēng)險(xiǎn)，這與本研究結(jié)論較相一致。

本研究結(jié)果顯示：在TNM分期較晚組與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組，IGFBP-3的表達(dá)明顯低于各自對(duì)照組(P<0.05)，而P53的表達(dá)分別高于對(duì)照組(P<0.05)。這一結(jié)果證明IGFBP-3表達(dá)的降低在CRC侵襲轉(zhuǎn)移中起了重要作用，并且IGFBP-3和P53在CRC中的表達(dá)呈負(fù)相關(guān)性(P<0.05)，提示聯(lián)合檢測(cè)IGFBP-3與P53對(duì)預(yù)測(cè)CRC的侵襲、轉(zhuǎn)移具有重要作用。

1 王寧，孫婷婷，鄭榮壽，等.中國(guó)2009 年結(jié)直腸癌發(fā)病和死亡資料分析.中國(guó)腫瘤,2013,22:515-520.

2 Baserga R.Customizing the targeting of IGF-1 receptor.Future Oncol,2009,5:43-50.

3 Weng CJ，Hsieh YH，Tsai CM，et al.Relationship of insulin-like growth factors system gene polymorphisms with the susceptibility and pathological development of hepatocellular carcinoma.Ann Surg Oncol,2010,17:1808-1815.

4 Annenkov A.The insulin-like growth factor (IGF) receptor type1 (IGF1R) as an essential component of the signaling network regulating neurogenesis.Mol Neurobiol,2009,40:195-215.

5 Georges RB,Adwan H,Hamdi H,et al.The insulin-like growth factor binding proteins 3 and 7 are associated with colorectal cancer and liver metastasis.Cancer Biol Ther,2011,12:69-79.

6 Wang Y,Zhao X,Shi D,et al.Overexpression of SIRT1 promotes high glucose-attenuated corneal epithelial wound healing via p53 regulation of the IGFBP3/IGF-1R/AKT pathway.Invest Ophthalmol Vis Sci,2013,54:3806-3814.

7 Ivanov K,Kolev N,Toncv A,et al.Comparative analysis of prognostic significance of molecular markers of apoptosis with clinical stage and tumor differentiation in patients with colorectal cancer：a single institute experience.Hepatogastroenterology,2009,56:94-98.

8 葉斌，王西川，雷蕾，等.P53和Ki67在結(jié)直腸癌中的表達(dá)及其臨床意義.實(shí)用癌癥雜志,2013,28:42-44.

9 鄭勇，高緒鋒，張松濤，等.p53、Bcl-2蛋白在結(jié)直腸癌中的表達(dá)及其與預(yù)后的關(guān)系.實(shí)用癌癥雜志,2011,26:374-376.

10 Lam AK,Ong K,Ho YH.hTERT expression in colorectal adenocarcinoma: correlations with p21,p53 expressions and clinicopathologicalfeatures.Int J Colorectal Dis,2008,23:587-594.

11 Torng PL,Lee YC,Huang CY,et al.Insulin-like growth factor binding protein-3(IGFBP-3) acts as an invasion-metastasis suppressor in ovarian endometrioid carcinoma.Oncogene,2008,27:2137-2147.

12 Soubry A,Il’yasova D,Sedjo R,et al.Increase in circulating levels of IGF-1 and IGF-1/IGFBP-3 molar ratio over a decade is associated with colorectal adenomatous polyps.Int J Cancer,2012,131:512-517.

TheexpressionsandclinicalsignificanceofIGFBP-3andP53incolorectalcancer

GUOShuqin*,KANGJunpeng*,ZHANGJinku,etal.

*DepartmentofEndocrinology,TheFirstCentralHospitalofBaodingCity,Hebei,Baoding071000,China

ObjectiveTo investigate the role and clinical significance of IGFBP-3 and P53 in pathogenesis of colorectal cancer (CRC).MethodsThe expressions of IGFBP-3 and P53 were detected in 138 cases of colorectal cancer tissues and 69 cases of normal colorectal mucosa tissues (control group) by immunohistochemistry (SP).ResultsThe positive expression rate (76.8%) of IGFBP-3 in CRC was significantly lower than that (91.3%) in control group (P<0.05),however,the positive expression rate (53.6%) of P53 in CRC was significantly higher than that (2.9%) in control group (P<0.05).The expression of IGFBP-3 in CRC was correlated to histological grade,TNM stage and lymph node metastasis (P<0.05);the expression of P53 in CRC was correlated to TNM stage,lymph node metastasis and distant metastasis (P<0.05),but both IGFBP-3 and P53 were not related with the other factors (P>0.05).Moreover the expression of IGFBP-3 was negatively correlated to that of P53 (r=-0.27,P<0.01).ConclusionIGFBP-3 and P53 may participate in the invasion and metastasis of CRC,and the two factors have a synergistic effect,combined detection of their expressions in CRC plays an important role in predicting patient’s prognosis.

colorectal cancer;IGFBP-3;P53;immunohistochemistry

10.3969/j.issn.1002-7386.2014.22.004

071000 河北省保定市第一中心醫(yī)院內(nèi)分泌科(郭淑芹、康軍朋、張?jiān)屏?，病理科(張金庫(kù)、周炳娟、趙文明、劉倩茹)

張?jiān)屏迹?71000 河北省保定市第一中心醫(yī)院分泌科；

E-mail：yanliangzhang2011@126.com

R 735.35，R 735.37

A

1002-7386(2014)22-3375-03

2014-05-28)