P53和Ki-67及Survivin在乳腺癌中的表達研究

郭秀芳

·論著·

P53和Ki-67及Survivin在乳腺癌中的表達研究

郭秀芳

目的探討P53、Ki-67和survivin在乳腺癌組織中的表達及相互關(guān)系。方法應(yīng)用免疫組織化學(xué)(S-P)檢測35例乳腺浸潤癌、28例乳腺導(dǎo)管癌組織中P53、Ki-67和survivin的表達情況。結(jié)果乳腺浸潤癌組織中P53、Ki-67和survivin的表達陽性率與乳腺浸潤癌相比較，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.01)。結(jié)論P53、Ki-67和survivin在乳腺癌中的表達增高，P53、Ki-67與survivin的表達無相關(guān)關(guān)系。

乳腺腫瘤；基因；P53；Ki-67；Survivin

乳腺癌是女性最常見的惡性腫瘤。Survivin是能抑制細胞凋亡,從而延遲或阻止細胞自殺的蛋白質(zhì),屬于已知阻礙細胞自殺的蛋白質(zhì)中之一[1]。Ki-67是癌細胞增殖情況的指標(biāo)。P53抑癌基因是生物體內(nèi)一種抑制細胞轉(zhuǎn)變癌細胞的基因。本研究探討P53、Ki-67和Survivin在乳腺癌組織中的表達及相互關(guān)系。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選擇邢臺市第一醫(yī)院病理科2008年6月至2010年3月手術(shù)切除39例乳腺癌標(biāo)本，所有標(biāo)本均經(jīng)組織病理學(xué)確診，相關(guān)臨床資料完整，患者手術(shù)前均未經(jīng)任何抗腫瘤治療，其中原位癌7例，浸潤癌32例；平均年齡(46±15)歲。另取同時期手術(shù)切除的乳腺導(dǎo)管癌標(biāo)本24例作為對照，年齡18～73歲，平均年齡(46±15)歲。2組基線資料有均衡性。

1.2 試劑 P53、Ki-67(鼠抗人)單克隆抗體，配套S-P(羊抗鼠)超敏試劑盒，二氨基聯(lián)苯胺(DAB)顯色劑，購自北京中衫生物工程有限公司，survivin(兔抗人)多克隆抗體，配套S-P(羊抗兔)超敏試劑盒，購自北京中衫生物工程有限公司。

1.3 SP法 (1)脫蠟、水化；(2)PBS洗2～3次各5 min；(3)3%H2O2(80%甲醇)滴加在TMA上，室溫靜置10 min；(4)PBS洗2～3次各5 min；(5)抗原修復(fù)；(6)PBS洗2～3次各5 min；(7)滴加正常山羊血清封閉液,室溫20 min。甩去多余液體。(8)滴加一抗P53、Ki67、Survivin室溫靜置1 h或者4℃過夜或者37℃ 1 h。(9)4℃過夜后需在37℃復(fù)溫45 min。(10)PBS洗3次各5 min；(11)滴加二抗40～50 μl，室溫靜置，或37℃1 h；(12)Ⅱ抗中可加入0.05%的tween-20。(13)PBS洗3次各5 min；(14)DAB顯色5～10 min，在顯微鏡下掌握染色程度；(15)PBS或自來水沖洗10 min；(16)蘇木精復(fù)染2 min，鹽酸乙醇分化；(17)自來水沖洗10～15 min；(18)脫水、透明、封片、鏡檢。以已知陽性的乳腺痛切片作為陽性對照，以PBS代替一抗作為陰性對照。

1.4 結(jié)果判定 免疫組化染色結(jié)果的判定采用雙肓法，由兩位病理醫(yī)師分別獨立閱片，觀察10個有代表性的高倍鏡視野(×40)計數(shù)1 000個細胞，對免疫組化結(jié)果進行評怙，兩者結(jié)果取均值作為最終結(jié)果。Ki-67定位表達于細胞核，survivin定位表達于細胞漿，P53在細胞漿和胞桉內(nèi)均有表達，以細胞漿和(或)細胞核內(nèi)出現(xiàn)清晰的棕黃色為陽性細胞。P53、survivin陽性細胞比例=(陽性細胞數(shù)/細胞總數(shù)1 000)×100%。Ki-67增殖指數(shù)=(陽性細胞數(shù)/細胞總數(shù)1 000)×100%。按照survivin P53陽性細胞比例和Ki-67增殖指數(shù)對組化結(jié)果分為4個等級：≤10%為“-”，11%～25%為“+”，26%～50%為“++”， ≥51%為“+++”[1，2]。

1.5 統(tǒng)計學(xué)分析 應(yīng)用SPSS 13.0統(tǒng)計軟件，計數(shù)資料比較采用χ2檢驗；相關(guān)性分析運行Spearmam相關(guān)性檢驗，P<0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 3種因子陽性表達 在39例乳腺癌組織中，survivin表達陽性為26例，陽性率為66.6%；Ki-67表達陽性為23例，陽性率為58.9%；P53表達陽性為32例，陽性率為82.0%。在24例乳腺導(dǎo)管癌組織中，survivin表達陽性為7例，陽性率為25%；P53表達陽性為4例，陽性率為14.29%；Ki-67表達陽性為3例，陽性率為7.14%。見圖1～3。

圖1 survivin陽性(免疫組化×40)

圖2 Ki?67陽性(免疫組化×40)

圖3 P53陽性(免疫組化×40)

2.2 Wilcoxon秩和檢驗 survivin(u=4.52032)、P53(u=5.64412)、Ki-67(u=4.68051)在乳腺浸潤癌組織中的表達與乳腺導(dǎo)管癌組織比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.01)。見表1。

表1 P53和Ki-67及survivin在乳腺浸潤癌與乳腺導(dǎo)管癌組織中的表達 例

3 討論

P53抑癌基因是生物體內(nèi)一種抑制細胞轉(zhuǎn)變癌細胞的基因。細胞中本來就有致癌基因(oncogene)及抑癌基因的存在，只要一方產(chǎn)生病變而失去平衡，癌癥就可能會發(fā)生[2]。

人類P53基因定位于17號染色體P13，全長16～20 kb,含有11個外顯子，轉(zhuǎn)錄2.8kb的mRNA,編碼蛋白質(zhì)為P53，是一種核內(nèi)磷酸化蛋白。P53是迄今為止發(fā)現(xiàn)的與人類腫瘤相關(guān)性最高的基因[3]，過去一直把它當(dāng)成一種癌基因，直至1989年才知道起癌基因作用的是突變的P53，后來證實野生型的P53是一種抑癌基因。P53基因表達產(chǎn)物P53蛋白由393個氨基酸殘基構(gòu)成，在體內(nèi)以四聚體的形式存在，半衰期為20～30 min[4，5]。

Ki-67是一種DNA結(jié)合蛋白，Ki-67陽性細胞率與生存時間呈顯著負(fù)相關(guān)(r=-0.587，P<0.01)[6]。Ki-67分裂活躍的細胞占腫瘤細胞的比例，這個是低增殖，預(yù)后好[6]。Ki-67與乳腺癌尤其是淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移陰性患者的預(yù)后相關(guān)，有助于確定是否采用輔助性化學(xué)治療。

Survivin是凋亡抑制蛋白家族(IAP)的重要成員，是凋亡抑制蛋白家族的新成員，Survivin具有腫瘤特異性，只表達于腫瘤和胚胎組織，且與腫瘤細胞的分化增殖及浸潤轉(zhuǎn)移密切相關(guān)[7]。Survivin 可能主要通過兩條途徑來抑制細胞凋亡：(1)直接抑制凋亡終末效應(yīng)酶Caspase-3 和Caspase-7的活性來阻斷各種刺激誘導(dǎo)的細胞凋亡過程;(2)Survivin 與周期蛋白激酶CDK4,CDK2相互作用阻斷凋亡信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路[8]。

在本研究中，P53、Ki-67和survivin在乳腺癌中的表達顯著增高(P<0.05)，這與相關(guān)研究，以及三者在其他惡性腫瘤中的表達情況[9,10]相一致。P53、Ki-67和survivin在乳腺癌中的表達明顯增高的生物學(xué)特點，可以聯(lián)合應(yīng)用于相應(yīng)疾病的鑒別診斷。同時，在作為腫瘤基因治療的靶點方面，也值得進一步研究。

1 范宇飛，朱嚴(yán)冰，孟繼昌，等.survivin、P53蛋白與細胞周期蛋白Dl在乳腺癌巾的表達及相關(guān).臨床誤診誤治，2010,12:101-103.

2 趙延龍，陳江，姜漢國.survivin、P53基固在甲狀腺乳頭狀癌組織中表達的研究.哈爾濱醫(yī)科大學(xué)學(xué)報,2006,40:23-26.

3 鄧百凱，陳健，部紅梅.Smac和Ki-67在甲狀腺癌中的表達和意義.腫瘤防治研究,2008,35:800-802.

4 陳利民，鄭建華，王烯冬.P53 Survivin的研究進展.疾病監(jiān)測與控制雜志,2009，4:243-245.

5 曾永群，陳秋月，李凡彩.CA-125抗原腫瘤抑制蛋白P53,Ki-67抗原及抑癌基因P27蛋白作為卵巢癌病理輔助診斷指標(biāo)的評價.中國全科醫(yī)學(xué),2010,13:1877-1879.

6 Dowsett M,Smith IE,Ebbs SR,et al.Prolifealion and apoptosis as markers of benefit in neoodjuvant endocrine therapy of breast Cancer.Clin Cancer Kes,2006，12：1024-1030.

7 王運端，張海娟，劉風(fēng)軍.survivin和環(huán)氧合酶-2在卵巢腫瘤中的表達及意義.河北醫(yī)藥，2009,31:2746-2748.

8 李秀娟，廖琪，孫中華，等.Ki67和survivin在卵巢上皮性癌中的表達及意義.中國全科醫(yī)學(xué),2009,12:1534-1535.

9 Chantalat L,Skonfias DA,Kleman JP,et al.Crystal strncture of human surviving reveals a bow tie-shaped dimmer with two unusnal alpha-heli-cal extensions.Mol Cell，2000,6:183-189.

10 王立芝，薛龍，譚冬梅，等.survivin的研究進展.醫(yī)學(xué)綜述，2006，12:1089-1092.

10.3969/j.issn.1002-7386.2014.22.024

054001 河北省邢臺市第一醫(yī)院病理科

R 737.9

A

1002-7386(2014)22-3425-02

2014-04-29)